Cultivos en Suspension Linfocitos

Cultivos Celulares

Linfocitos humanos Chamba Alexis, Hurtado Ma. Gabriela, Ramos Diana, Sauca William. ****Profesiona Profesionales les en ormaci!n ormaci!n,, Ciencias Ciencias de la Salud, Salud, "itulaci "itulaci!n !n de #io$u%mi #io$u%mica ca & armacia, armacia, 'ni(ersi 'ni(ersidad dad

")cnica Particular de o+a, San Ca&etano Alto sn C.P. -- - /01 o+a, 2cuador.

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Introducción.

La mayoría de las células in vivo se encuentran interaccionando con células vecina vecinas, s, una Membra Membrana na basal basal o una una matriz matriz extra extracel celula ularr. Estas Estas célula célulass se denominan dependientes de de Anclaje y se cultivan aderidas aderidas a una super!cie "cultivo en mono capa#. $in embar%o las células ematopoyéticas y al%unos tipo tiposs de célu célula lass tumo tumora rale less se encu encuen entr tran an en micr micro o %rav %raved edad ad en los los or%anismos vivos. vivos. Estas células se denominan denominan independientes independientes de anclaje y se pueden cultivar en suspensi&n en un lí'uido nutritivo. "(ro), (, *il-Loyza%a. ++# Estos tipos de cultivos no necesitan dis%re%aci&n enzimtica, pero para poder obtener poblaciones omo%éneas omo%éneas de células se tiene 'ue recurrir a métodos de separaci&n o puri!caci&n celular. Estos métodos se pueden emplear antes, durante o después del cultivo. Al%unos de ellos son métodos )ísicos o 'uímicos y otros se denominan métodos de muerte celular selectiva por'ue seleccionan las condiciones de cultivo para la supervivencia selectiva de un tipo celular. "(ro), (, *il-Loyza%a. ++# OBJETIVO • •

Extracci&n de los lin)ocitos de la san%re. /ijar las células con metanol Comp Compar arar ar la prol proli) i)era eraci ci&n &n celu celula larr medi median ante te el cicl ciclo o celu celula larr de los los lin)ocitos por citometría de 0ujo.

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Materiales y métodos.

1el medio ya preparado se tempero a 2+3C el medio ya suplementado, se lo coloc& coloc& cerca cerca del mecer mecero o para para evitar evitar posible posible contami contaminac naci&n i&n,, se limpi limpi& & el medi medio o y el rea rea de trab trabaj ajo o con con alco alcoo oll al 45, 45, dond donde e se ubic ubicar aron on los los materiales necesarios para trabajar, los di)erentes medios de desecos para corto punzantes, derecos biol&%icos etc. Obtención de linfocitos de la sangre

$e obtuvo 2 a 6mL san%re venosa eparinizada, posteriormente se dej& caer con suavidad la cantidad de san%re extraída sobre los 6mL de la super!cie del Tutora: Mgs. Ma. Isabel Ramírez

Cultivos Celulares percoll "medio 'ue nos permiti& separar los lin)ocitos#.$e centri)u%& a 2.6 r.p.m. durante 76minutos a una temperatura de 73C. 1espués de los 76 minutos de centri)u%aci&n se obtuvo las si%uientes )ases  $uero8 color ocre suave  9anda de %l&bulos blancos8 aspecto blanco y lecoso  9anda (ercoll8 transparente  9anda de %l&bulos rojos8 sedimentados



$e reco%i& con una micropipeta la banda de %l&bulos blancos. $e re suspendi& el anillo blanco y lecoso "a'uel donde se encontraban los lin)ocitos# en 6mL de (9$ y se centri)u%o a .: r.p.m. durante minutos a una temperatura de 7;C. $e paso el pellet celular tanto de lin)ocitos en los micro tubos respectivamente. Fijación !infocitos

$e coloc& mL de la mezcla de metanolL de soluci&n de tinci&n ?( ".5 "v