Cultivo in Vitro

UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONÍA Carrera Profesional de Ingeniería Agroindustrial

TEMA: Cultivo in vitro de tejidos vegetales Generalidades Curso:

Biotecnología

Docente: Blgo. MSC. Liz Michielle García Zare

Yarinacocha-Perú

Carica papaya “papaya”

Ananas sp. “piña”

Orcchidaceae “orquidea”

¿Podemos implementar esta tecnología en nuestra región ?

¿Qué es los que hace posible dicha tecnología?

EXPLANTO

Invernadero

Cultivo de Tejidos vegetales • Fue desarrollado a partir de 1950 por botánicos y fisiólogos vegetales.

• Técnica que utiliza pequeños segmentos de tejido en condiciones asépticas en medio nutritivo dentro de material estéril de vidrio, conseguir nuevas plantas idénticas a la planta madre

Fases de propagación vegetal: •La inic iació n, se extrae segmentos de la planta madre, se desinfectan y cultivan en medio específico. •La Multip licación, explantos.

comienza la reproducción de los

•Enraizamiento, a través de modificando el medio de cultivo para la generación de raíces. •Aclimatación, medio natural

el paso de las plantas de cultivo hacia el

Combinación sólida o líquida de minerales y agua

• Macroelementos: N, P, K, Ca, Mg, S

Sales inorgánicas

Carbohidratos

• Microelementos: Fe, Zn, B, Mn, Cu, Ni, Co, Al, Mo, I •Sacarosa, Manitol, Sorbitol

•Thiamina, piridoxina, ácido nicotínico, inositol

Vitaminas y aminoácidos •Glutamina, Glycina

Reguladores de crecimiento

• 2, 4 Diclorofenoxiacético, AIA, IBA, BAP, Citoquinicas

Preparación de Medio de Cultivo El éxito del cultivo de tejidos depende de la selección del medio de cultivo. Estas se realizan por medio de la preparación de soluciones stock.

La solución stock puede estar separada por macronutrientes, micronutrientes, vitaminas en mg/mL de solución.

Ejm. Preparar 50 ml de Thiamina sol. Stock 1mg/mL Esto es igual a pesar 50 mg de Thiamina y disolverlo en 50 mL de agua

Los principales medios de cultivos: 

Medio MS: cultivo de plantas herbáceas WPM: cultivo de plantas leñosas

Medio

Preparación de Medio de Cultivo

Aforar hasta volumen indicado con agua destilada y ajustar pH entre 5.5 y 6

Macronutrientes

Introducir explantos en medio estéril

Micronutrientes Hierro Vitaminas Hormonas Sacarosa

Adicionar fitagel , cubrir material de vidrio y autoclavar

Medio de cultivo MS Se denomina así por haber sido formulado por científicos Murashige y Skoog en 1962. Este medio de cultivo es empleado en plantas herbáceas como: Tomate, orquídeas, caña de azúcar, papaya, lúcuma, papa, camote, etc Reactivos que forman parte del medio MS

Vitaminas que conforman el medio MS

Medio de cultivo WPM • Se denomina así por sus siglas en inglés Wood plants medium (medio para plantas leñosas), fue formulado por Lloyd & McCown, 1980, y modificado por Zhang et al 2006. •Este medio de cultivo es empleado en plantas leñosas como: camu camu, palmeras, arándano, etc

Reactivos que forman parte del medio WPM

Vitaminas que conforman el medio WPM

Aplicación de cultivo in vitro -Obtención de plantas libres de patógenos -Propagación masiva -Conservación de germoplasma -Mejora por mutagénesis y selección in vitro -Ingeniería Genética

Embriones cigóticos de papaya var. Maradol: Se emplearán frutos inmaduros de papaya var. Maradol de aproximadamente tres meses de crecimiento.

• Los frutos colectados se lavarán con agua y

jabón • Sumergirán en cloro al 20% (v/v) (3.5% de

NaClO), durante 1 h • Luego se incorporará en una campana

Holten y, ahí se enjuagarán nuevamente con etanol al 70% (v/v).

Embriones cigóticos de papaya var. Maradol:

Después, los frutos serán cortados transversalmente y se extraerán las semillas

En placas Petri serán desinfectadas por inmersión: • Etanol al 70% (v/v) por 30 s. • Solución de cloro al 20% (v/v) con dos gotas de

Tween 20 por 20 min. • Se enjuagarán por tres ocasiones cada 5 min. con H2O die

Medio MS con el 50% de la concentración de sales y suplementado con 10 mg/L de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) Embrión cigótico de papaya var. Maradol

Iniciación de embriogénesis somática de papaya var. Maradol

Semillas inmaduras en medio MS + 2,4 D

Estructuras somáticas de 21 días

Estructuras somáticas globulares Estructuras somáticas en torpedo

Maduración y germinación de papaya var. Maradol

Enraizamiento de papaya var. Maradol

Aclimatación de papaya var. Maradol