Cultivo de E. Coli.

 

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Cultivo de E. Coli Coli en agar agar nut riti vo EMB  

Metodología No. _______

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Fecha de realización: ____________

Objetivo Desarrollar la habilidad en la preparación de este medio de cultivo existente dentro del laboratorio, conocerlo e identificar la morfología y demás características de los microorganismos se adaptan este medio. Fundamento Principi o y aplicación del agar agar EMB  AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO (E.M.B) es un medio diferencial similar al Agar Levine (Cat. 1050) y es utilizado para el aislamiento de Enterobacterias. El uso de Eosina y Azul de Metileno permite la diferenciación entre organismos fermentadores y no fermentadores de lactosa. Es muy utilizado en bacteriología médica. La Peptona aporta nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. La Sacarosa se añade además de la lactosa como carbohidrato fermentable, para detectar coliformes que fermentan la sacarosa más rápidamente que la lactosa. La Eosina y azul de metileno son inhibidores parciales de bacterias Gram-positivas e indicadores de pH. Debido a la lactosa y la sacarosa en el medio se puede diferencia en cultivo primario Salmonella y Shigella Shigell a las cuales son lactosa negativa y pueden ser diferenciado diferenciados s de otras lactosa negativos y sacarosa positivos tales como Proteus vulgaris, Citrobacter y  Aeromonas. El Fosfato dipotásico dipotásico actúa como buffer buffer del sistema y al Agar bacteriológico bacteriológico es el agente solidificante. Característ Ca racteríst icas del d el E. Coli.

 

Características Ca racterísticas morfoló gicas y tint oriales. Bacilo Gram negativo. No forma esporas Móviles (flagelos perítricos). Miden 0.5 µ de ancho por 3 µ de largo. Catalasa positivos. Oxidasa negativos. Reducen nitratos a nitritos. Producen vitamina vitamina B y K. Características Ca racterísticas nutr icionales: No exigente. Fermenta glucosa y lactosa con producción de gas. Es anaerobio facultativo Características Ca racterísticas col oniales: Las colonias de E. Coli en agar E.M.B. (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm de diámetro, un centro grande de color oscuro e incluso negro, y tienen brillo verde metálico cuando se observan con luz refleja. En agar MacConkey las colonias son rojas con halo turbio. Material   Olla express o  Balanza granataria o  Espatula o

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Cajas Aza dePetri siembra Mechero Matraces Erlenmeyer de 250 ml

Preparacion Pre paracion del medio de culti vo MODO DE USO: Sembrar el medio de cultivo con la muestra de ensayo por estría cruzada. Incubar 24  – 48 h a 35ºC. PREPARACION: Rehidratar 36 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC ( 15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar a temperatura ambiente.

 

Procedimiento Preparar el medio de cultivo con agar EMB en nuestras Cajas petri siguiendo las indicaciones que son mostradas en la etiquet del recipiente que contiene este agar. Se prepara la cantidad del medio de cultivo necresaria, considerando que por cada caja Petri se utlizaran 10 ml de cultivo. Ya preparados los medios de cultivo, se procede a esterilzar el material que se ocupara en la siembra del E. Coli. Se siembra ya una vez con el materil ya esterilizado, usando la tecnica de sembrado por estria. Ya sembrado se deja reposar en la estufa 1 dia y se verifica que el E. Coli haya crecido en este medio. Observaciones

Si hubode un cultivo adecuado crecimiento E. Coli utilizando este medio preparado con de agar EMB. Se pueden observar las formas de estrias que se hicieron para sembrar este microorganismo.

En todas las Caja Petri se desarrollo de manera correcta el crecimiento de la E. Coli, se pueden observar que en su centro predomina un color oscuro al igual que en sus alrededores, algunas tenían un diámetro mayor que otras . Estas resaltaban ya que el color de su medio de cultivo era rojizo tras su esterilización.

 

Conclusiones El crecimiento de la E. Coli. Se dio de una correcta manera ya que el medio en el que esta se cultivo es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias, que inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y permite la diferenciación de bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa, dando lugar a colonias incoloras, las no fermentadoras, y colonias de color azulado-negro con cierto brillo metálico, las fermentadoras. El Agar EMB es un medio de cultivo usado para el aislamiento y diferenciación de E.coli, ya que se pueden apreciar sus algunas de sus características morfol morfológicas ógicas a simple vista, como su forma, color y el diámetro de estas. Se debe de preparar el medio de cultivo con la cantidad de agar indicada en la etiqueta en el envase de este producto, ya que si no seguimos las indicaciones, no podría haber crecimiento alguno de los microorganismos que se hayan sembrado por la mala preparación de su medio de cultivo.