CUESTIONARIO 6 Morfologia Colonial

Practica No. 6 CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS DEL CULTIVO CULTIVO (MORFOLOGÍA COLONIAL) 1. !"# !"# $% $% "&a "&a co' co'o& o&ia ia Se entiende por colonia bacteriana a la agrupación de bacterias originadas a partir de una  bacteria madre que se establecen y extienden por determinado medio. En condic condicion iones es de incubac incubación ión adecuad adecuados, os, cada cada célula célula bacteri bacteriana ana inocul inoculada ada sobre sobre la superfici superficiee del medio sólido sólido proliferar proliferaráá lo suficiente suficiente para ser observable observable a simple simple vista, vista, se considera que la población bacteriana resultante deriva de una sola célula bacteriana y se conoce como co'o&ia, es decir, decir, todas las células células bacterianas bacterianas dentro de una colonia son del mismo género y especie, lo que otorga características genéticas y fenotípicas idénticas.

. c*+o c*+o %$ ,$t$r+i ,$t$r+i&a &a 'a co&%i% co&%i%t$&c t$&cia ia ,$ "&a co'o co'o&ia &ia La caa petri con el medio de cultivo se coloca a la altura de la cara y con una asa se toca una colonia !destruir" y se retira la asa con cuidado para poder obsrvar la consistencia de esta

-. ,ia 'a% 'a% ,i/$r$&cia% ,i/$r$&cia% $&tr$ $&tr$ 'a% co'o&ia% co'o&ia% ,$%arro' ,$%arro''a,a% 'a,a% $& "& +$,io +$,io $&ri!"$ci,o $&ri!"$ci,o 0 $& "&o %$'$ctio describió un medio diferencial diferencial selectivo selectivo que usó M$,io% %$'$ctio%# en $%&', (ac)on*ey describió  para aislar bacilos entéricos gramnegativos de muestras con me+clas de especies  bacterianas, este agar contiene roo neutro como indicador del p y, como resultado, las colonias que utili+an lactosa se ven de color roo por la producción de ácidos mixtos, los  productores de ácidos fuertes, como  Escherichia coli  coli  forman colonias roo oscuro, los formadores de ácidoa más débiles forman colonias rosado pálido o colonias que son claras en la periferia y tienen un centro rosado. M$,io% ,$ $&ri!"$ci+i$&to# como su nombre lo indica, un medio de enriquecimiento se usa para incrementar el crecimiento de ciertas especies bacterianas e in-ibir el desarrollo de microorganismos no deseados. En laboratorios, clínicos los medios de enriquecimiento con mayor frecuencia se utili+an para la recuperación de especies de Salmonella y Shigella de muestras fecales. Los caldos de enriquecimiento son tiles sobre todo para la recuperación de micr microor oorga gani nism smos os de las las -eces -eces de port portad ador ores es de Salmo Salmone nell lla a o de paci pacien ente tess con con infecci infeccione oness leves leves con Shigella  Shigella  en quienes el nmero de microorganismos puede ser tan  peque/o como de 0&&1g de materia fecal.

2. $&"+$rar $&"+$rar 'a% 3ri&ci3a'$% 3ri&ci3a'$% caract$r4 caract$r4%tica% %tica% to+a,a% to+a,a% $& c"$&ta c"$&ta 3ara 3ara ,$t$r+i&ar ,$t$r+i&ar "& cr$ci+i$&to co'o&ia' a" 2ama/o 2ama/o de la colonia colonia## por lo comn comn calculado calculado en mm o descrit descrito o en términos términos relativos como cabe+a de alfiler, peque/o, medio o grande.  b" 3orma# puntiforme, circular, filamentosa, irregular, ri+oide, como -uso. c" Elevación# Elevación# plana, plana, sobreel sobreelevada, evada, convexa, convexa, pulvinada pulvinada !con !con forma forma de coín", coín", umbonada, umbilicada d" (argen (argen o borde colonial# colonial# entero, entero, ondulante, ondulante, lobulado, lobulado, lacerado, lacerado, filament filamentoso, oso, ri+ado. e" )olor o pigmentaci pigmentación ón de la colonia# colonia# blanco, amarillo, amarillo, negro, negro, marrón, marrón, anaranado, etc. f" Superfi Superficie cie## 4rillan 4rillante, te, opaca, opaca, roma, roma, transpar transparent ente. e.

g" 5ensidad# opaca, translcida, transparente, etc. -" )onsistencia# mantecosa, viscosa, membranosa, quebradi+a, etc. i" 6lor# ciertas bacterias producen olores característicos 7cambios en los medios con agar como resultado del crecimiento bacteriano, como# patrón -emolítico en agar sangre8 cambios de color en los indicadores de p, corrosión de la superficie del agar.

5.  ,$ !"# +a&$ra %$ o%$ra %i "& aar %a&r$ 3r$%$&ta 7$+*'i%i% Las placas de agar sangre deben examinarse con transiluminación con una lu+ brillante desde detrás de la placa para detectar reacciones -emolíticas en el agar. Los -emocultivos deben incubarse a 9':) y examinarse visualmente para ver si -ay evidencia de crecimiento !-emólisis, producción de gas o turbide+" derante las primeras ; a $< -oras, siguientes a la recolección. 5eben examinarse contra lu+ fluorescente brillante o con lu+ transmitida incandescente. Se deben examinar la superficie de la capa de sangre sedimentada porque pueden detectarse colonias discretas.

6. ,$%cria c*+o %$ o%$ra& 'o% %i"i$&t$% ti3o% ,$ 7$+*'i%i%8 a" =lfa# aclaración parcial de sangre alrededor de las colonias con coloración verde del medio8 contorno de eritrocitos intactos.  b" 4eta# >ona de aclaración total de sangre alrededor de las colonias debido a la lisis o coloración de los eritrocitos. c" ?amma# ningn cambio del medio alrededor de la colonia8 no -ay lisis o coloración de los eritrocitos. d" =lfa primaria# alo de lisis incompleta inmediatamente alrededor de las colonias con una segunda +ona de -emólisis completa en la periferia.

M$&cio&$ !"$ otra% r$cacio&$% %$ ,a& $& 'o% %i"i$&t$% +$,io% ,$ c"'tio %o'i,o% "ti'i9a,o% $& 'a i,$&ti/icaci*& ,$ act$ria%: 7.

a" =gra Sal y (anitol. (edio de cultivo selectivo y diferencial, utili+ado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria. 2ambién, este medio puede utili+arse para el cultivo de especies -alófilas de @ibrio, si no se dispone de medios apropiados, aunque algunas especies pueden no desarrollar.

F"&,a+$&to Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa positiva -idroli+an el manitol acidificando el medio8 las colonias aparecen rodeadas de una +ona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos,  presentan colonias rodeadas de una +ona roa o prpura. Las colonias sospec-osas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la  prueba de la coagulasa. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el -idrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio !que se encuentra en alta concentración" es el agente selectivo que in-ibe el desarrollo de la flora acompa/ante, y el roo fenol es el indicador de p. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el p del medio y vira el indicador de p del color roo al amarillo. Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa

 positiva fermentan el manitol y se visuali+an como colonias amarillas rodeadas de una +ona del mismo color. Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visuali+an como colonias roas, rodeadas de una +ona del mismo color o prpura. Microorganismos

Crecimiento

Características de las colonias

Staphylococcus aureus

Excelente

Amarilla

Staphylococcus epidermidis

Bueno

Roja

Escherichia coli

Inhibido

Inhibido

Klebsiella pneumoniae

Inhibido

Inhibido

 b" =gar 4ase Lec-e.

c" E(4. Este medio !también denominado E.=.(." es utili+ado para el aislamiento selectivo de  bacilos ?ram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Aermite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

F"&,a+$&to Este medio combina las fórmulas de oltBarris y 2eague con la de Levine, para obtener  un meor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de  bacilos ?ram negativos. La diferenciación entre organismos capaces de utili+ar la lactosa y1o sacarosa, y aquellos que son incapaces de -acerlo, está dada por los indicadores eosina y a+ul de metileno8 éstos eercen un efecto in-ibitorio sobre muc-as bacterias ?ram  positivas. (uc-as cepas de Esc-eric-ia coli y )itrobacter spp. presentan un característico  brillo metálico. Las cepas que utili+an la lactosa poseen centro oscuro con periferia a+ulada o rosada, mientras que las que no lo -acen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de )andida spp. como colonias rosadas y puntiformes8 la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en ). albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que =cinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color a+ul lavanda8 esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al &.'C y ello se debe a la incorporación de a+ul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y S-igella.

Microora&i%+o%

Ti3o ,$ Co'o&ia

Esc-eric-ia coli

@erdosas con brillo metálico y centro negro a+ulado

Dlebsiella pneumoniae

(ucosas, rosa prpura, confluentes

Aroteus mirabilis

ncoloras

Enterococcus faecalis

ncoloras, peque/as, puntiformes

S-igella flexneri

ncoloras

Salmonella typ-imurium

ncoloras

8. Describa la morfología colonial de: a) E. Coli en agar EMB

Colonias verde-negras con un brillo metálico, ulvinada, semioaca, gris, !"meda a un oco seca. b) #. aureus en agar sal $ manitol Conve%a, borde entero, & a ' mm, cremosa amarillenta. (ermenta el manitol roduciendo ácidos con los ue se modifica el * $ en indicador vira de ro+o al amarillo. El igmento amarillo esta formado or dos carotenoides: caroteno $ sarcina%antina. c) .aeruginosa en agar nutritivo lan oaca, gris a verdosa, márgenes lacerados a diseminados, igmento verde-aul, olor como a uvas.

:. D$ !"# /or+a r$3orta 'a '"9 tra&%+iti,a ,$ "&a co'o&ia 5urante el examen para determinar las características macroscópicas de las colonias, las  placas deben inclinarse en diversas direcciones, con una iluminación directa brillante, de modo que la lu+ se reflee desde varios ángulos, para ello se recomienda el uso de una lupa o microscopio para disección como ayuda para detectar las colonias diminutas o inmaduras y observar meor sus características.

1;. D$ !"# /or+a r$3orta 'a '"9 r$/'$ ? $,. Sa'at $,itor$%. M$@ico 1:: ="r,o&> B$&&$t7 L. Microio'oia>1? $,. P"'icacio&$% C"'t"ra'> M$@ico> 1:6 ="rro% i''ia+. Trata,o ,$ +icroio'oia>1:? $,. E,itoria' I&t$ra+$rica&a> M$@ico 1:6: Bo&$+a&> E'+$r B. Dia&*%tico +icroio'*ico. -a  $,. E,itoria' +#,ica Pa&a+$rica&a. M#@ico> 1::