Cuantificacion de Vitamina b1

 

Determinación de Tiamina por método Fluorometrico - HPLC 1 Fundamento

Se basa en la extracción de al tiamina por un tratamiento enzimático, hidrolisis acida, seguido de purifcación, oxidación a tiocromo (compuesto uorescente cuya uorescencia es directamente proporcional a la concentración de tiamina presente en la liuida muestra) y posterior identifcació identifcación n y cuantifcación por cromatograía isocrática en ase in!ersa con detector de uorescencia, a"ustada a una longitud de onda de excitación de #$%nm y emisión de &#$nm' Estructura química

a estructura uímica de la tiamina o !itamina * consta de un n+cleo pirimidinico y otro tiazolico, unidos por un puente metilenico' 

 

Tiamina

Pirofosfato Pirofosfat o de tiamina

 

1.1 ateriales • • • • • • • • • • • • •

-olumna -. o /01. (%um) %x&mm 2ispositi!o de fltración al !acío para membrana 3illipore' 4mbudos 4spátula 3atraces 4rlenmeyer de color ámbar, boca ancha de %5 m' 3atraces 4rlenmeyer de color ámbar de 55 m' 3atraces aorados de color ámbar de 555 m' 3atraces aorados de color ámbar de 55 m' 3atraces aorado de color ámbar de 5 m 3embranas 3illipore de 5, micras de # mm' 3embranas 3illipore de 5, micras de &6 mm' 0apel fltro 7hatman 89 0re -olumna - . o /01. (%um) &1&

1.! Equipos • •

• •

*alanza analítica *a:o termorregulado con agitación magn;tica y rangos de < de &59c a %59*a:o termorregulado entre .59- a =59-romatógrao liuido de alta resolución con detector de uorescencia bomba cuaternaria o isocrática, autosampler o inyector manual y sot>are adecuado'

1." #eacti$os • •

• •

• • • • • •

?cido clorhídrico umante #6@ p'a ?cido clorhídrico  8' en un matraz aorado de 555m ue contenga aproximadamente %55m de agua destilada, a:adir con cuidado .m de A-l al #6@, enrasar con agua destilada' Aidrogenoosato de di10otasiodetrihidratado Solución de Aidrogenoosato di1potasio, p'a solución 5 m3 pA 6,' 4n un !aso de 555m pesar exactamente ,. g de BA0C& #AC y disol!er en aproximadamente .55m de agua destilada' D"ustar el pA a 6, con A-l 8'