cromatografia

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES DE ZARAGOZA INGENIERIA QUIMICA REPORTE DE CROMATOGRAFIA ELABORO: FELIPE GARCÍA REYES GPO: 3362 PROFESORA: ALEJANDRA VALANTAN RESUMEN: Se separaron los componentes de un extracto de chile guajillo utilizando la técnica cromatográfica en columna, aunada a una determinación del disolvente más adecuado a la mezcla problema para la realización de la CC con el uso de la cromatografía de capa fina. Comprobando así la efectividad de la CC para obtener los componentes puros de la mezcla  problema. ANTECEDENTES: CROMATOGRAFIA La cromatografía puede definirse como la técnica de separación de una mezcla de solutos,  basándose esta separación en la diferente difer ente velocidad con que se mueve cada uno a través de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. La cromatografía es un método que permite separar los componentes de una mezcla de compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es móvil y la otra estacionaria. La fase estacionaria puede ser un sólido o un liquido, este ultimo debe de estar  inmóvil sobre un soporte inerte. La fase móvil pude ser un líquido o un gas. Dependiendo de la naturaleza de las fases usadas; la cromatografía puede clasificarse en varios tipos: solido-liquido, liquido-liquido, solido-gas y liquido-gas; por esta diversidad, la cromatografía en las últimas décadas ha adquirido un gran valor, ya que su empleo ha contribuido no solo a la identificación sino también al aislamiento de compuestos que son de origen biológico; aun en cantidades muy pequeñas, dichos compuestos generalmente  poseen propiedades físicas y químicas muy mu y semejantes; siendo muy difícil por otras técnicas conseguir tales resultados. Las distintas técnicas cromatografías se pueden dividir según cómo esté dispuesta

la fase estacionaria: • Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un  papel. Las principales técnicas son: ◦ Cromatografía en papel. ◦ Cromatografía en capa fina. • Cromatografía en columna. La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen: ◦ Cromatografía de líquidos. ◦ Cromatografía de gases. ◦ Cromatografía de fluidos supe críticos. |TIPO |FASE MOVIL |FASE ESTACIONARIA | |Cromatografía en papel |Liquido |Solido | |Cromatografía en capa fina |Liquido |Solido | |Cromatografía de gases |Gas |Solido o liquido | |Cromatografía liquida en fase inversa |Liquido (polar) |Solido o liquido | | | |(menos polar) | |Cromatografía liquida en fase normal |Liquido (menos polar) |Solido o liquido (polar) | |Cromatografía liquida de intercambio iónico |Liquido (polar) |Solido | |Cromatografía liquida de exclusión |Liquido |Solido | |Cromatografía liquida de adsorción |Liquido |Solido | |Cromatografía de fluidos supercriticos |liquido |Solido | Al enfrentarse con el problema de separar una mezcla completamente desconocida lo mejor  es emplear un ensayo cromatográfico por medio de la cromatografía en capa fina, la cual dará detalles acerca de la complejidad de la mezcla a separar. La cromatografía en capa fina es uno de los métodos analíticos más sencillos ya que se utiliza poca cantidad de muestra, pues es sensible en alto grado y requiere de  poco tiempo para separar compuestos estructuralmente muy parecidos. Los resultados de la cromatografía son muy valiosos pues ayudan a seleccionar el adsorbente y eluyentes adecuados que pueden ser empleados para una separación en columna. CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA La cromatografía sobre papel es muy versátil y sus métodos se emplean con mucha frecuencia, pero su uso se limita a separaciones sobre celulosa, ya que otros medios adsorbentes, como la alúmina y el gel de sílice, no pueden prepararse en forma de tiras. Esta dificultad puede superarse fabricando capas finas de estas sustancias sobre placas de vidrio. Las capas finas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas. Se usan dos tipos de capas: la capa compacta que se adhiere a la placa de vidrio por medio de un agente aglomerante incorporado al adsorbente o por las cualidades adherentes del  propio material, y capa suelta. Estas últimas solo se emplean en la determinación de la actividad de los adsorbentes y en

uno de dos casos especiales. Las separaciones sobre la capa finase parecen en muchos aspectos a la del papel, pero es  posible la elección de muchos más medios, ye que con esta técnica pueden realizarse separaciones por reparto, filtración sobre gel, adsorción e intercambio iónico. Las  propiedades particulares de la cromatografía en capa fina permiten desarrollar el fraccionamiento en un periodo de tiempo mucho menor. Una razón de esto es el tamaño de las partículas que constituyen los medios empleados en cromatografía en capa fina, por lo que se consiguen mejores resoluciones y manchas más compactas. Las capas compactas se  preparan aplicando una papilla del medio elegido en un disolvente adecuado, sobre las  placas de vidrio. En la cromatografía de capa fina es posible emplearse cualquier medio, habiendo discutido que factores influyen en la elección. Los más populares son la celulosa microgranular o micricristalina, gel de sílice (silica gel) en adsorción y reparto y alúmina. La elección del disolvente dependerá de la naturaleza del compuesto que se va a separar y del material en que la separación va llevarse a cabo. Una regla general para la elección del disolvente es la comparación de la polaridad del mismo y de la sustancia que se va a separar, así aplicamos el criterio en el cual se emplea un disolvente poderoso (activos) para sustancias no polares y adsorbentes con menos actividad para sustancias más polares. El revelado de las placas pude llevarse a cabo con agentes corrosivos, tal como ácidos concentrados y compuestos fuertemente oxidantes, a alta temperatura, debido a la naturaleza inorgánica de la capa. Otro reactivo muy empleado son los vapores de yodo. En una cámara que contiene en el fondo algunos cristales de yodo, se introduce el cromatograma y se deja durante unos minutos. El yodo tiende a concentrarse en los sitios donde están los compuestos, por lo que aparece una mancha marrón oscuro, sobre el fondo amarillo pálido. Otros métodos que no afectan el revelado son la fluorescencia y la radioactividad. Muchas  placas llevan sustancias fluorescentes como aditivos para el revelado de los compuestos, localizándose los mismos por la aparición de machas no fluorescentes. Además muchos compuestos que se separan absorben ultravioleta, siendo este el método más sencillo para localizarlos. CROMATOGRAFIA DE COLUMNA (filtración en gel) La cromatografía de filtración en gel se realiza empleando unas matrices formadas por unas esferas porosas. El volumen de los poros es muy elevado y su diámetro está determinado. Cuando penetran en el lecho de la columna dos proteínas de tamaños tales que una penetra en los poros de las bolas de gel y la otra no, la primera se reparte entre el espacio entre las bolas y el interior de los poros, reduciéndose la concentración en la fase libre entre las bolas. La segunda proteína, por tamaño, sólo puede encontrarse entre las  bolas. El flujo de solvente es más elevado entre las bolas que en el interior de los poros de éstas, por lo que el efecto neto es el de acelerar el desplazamiento de las proteínas de mayor 

 peso molecular respecto al de las de menor peso molecular. En esta cromatografía se eluyen  primero las proteínas mayores, y en segundo lugar las menores, y tiene una gran influencia en el resultado la longitud de la columna y el volumen de la misma. Columnas largas aseguran separaciones de mayor calidad. Empleando patrones de proteínas de peso molecular conocido se emplea para determinar el peso molecular de proteínas de tamaño desconocido. Son numerosos los adsorbentes empleados en la cromatografía de columna. Las separaciones pueden realizarse por reparto, adsorción o intercambio iónico. Pueden usarse cualquier medio adsorbente, siendo los más generales la celulosa, gel de sílice, alúmina, oxido de magnesio. El tamaño de la columna está determinado por la cantidad de mezcla que se va a fraccionar. El primer paso en el montaje de la columna cromatográfica es colocarla fija en posición vertical. A continuación se pone en la columna un disco de porcelana con varios orificios, y encima de este un poco de lana de vidrio. Este dispositivo retiene el material solido de la columna, mientras que el líquido puede circular libremente. El adsorbente puede introducirse en seco, pero lo más frecuente es echarlo en forma de una papilla con eluyente. La papilla formada por el adsorbente y el disolvente se agrega lentamente en porciones, lo que permite que se pose en el adsorbente por la fuerza de gravedad, hasta alcanzar la altura deseada. Finalmente se abre la llave inferior de la columna para que salga el exceso de disolvente contenido. La altura del disolvente no debe exceder más de 2 a 5 mm sobre el sólido. Una vez realizado esto la columna esta lista para introducir la muestra que se va a separar. OBJETIVOS: • Seleccionar a técnica cromatográfica para purificar compuestos coloridos y no coloridos. • Identificar a la cromatografía en capa fina como una herramienta en la determinación del número de componentes de una mezcla. • Elegir la cromatografía en columna como una técnica para purificación de compuestos. HIPOTESIS: En la cromatografía de capa fina obtendremos un buen ensayo para encontrar el eluyente más apto para la CC, siendo este aquel que sea más afín a la mezcla problema y muestre una mayor ascendencia en los componentes del extracto. El la cromatografía de columna observaremos la separación de los componentes del extracto del chile guajillo. PROCEDIMIENTO: LISTADO DE MATERIALES |MATERIALES

|

|MATERIAL |CANTIDAD |MATRAZ BOLA 500 ML |1 |TUBO REFRIGERANTE |1 |MANGUERAS DE HULE |2 |SOPORTE UNIVERSAL |1 |PINZAS DE TRES DEDOS CON NUEZ |2 |AGITADOR CON GANDARME |1 |CUBREOBJETOS |10 | |CHAROLA DE ALUMINIO |1 |BOLA DE ALGODÓN |1 |EMBUDO TALLO CORTO |1 |VASO DE PP DE 100 ML |3 |Vaso de pp 250 ml |1 | |REACTIVOS | |SUSTANCIA |CANTIDAD | |HEXANO |250 ml | |ETER DE PETROLEO |250 ml | |CICLOHEXANO |250 ml | |BENCENO |250 ml | |COLRURO DE METILO |250 ml |TOLUENO |250 ml | |ETER DIETILICO |250 ml | |CLOROFORMO |250 ml | |ACETONA |250 ml | |ETANOL |250 ml | |METANOL |250 ml | |SILICA GEL PARA CAPA FINA |30 gr |SILICA GEL PARA COLUMNA |30 gr

| | | | | | | | | | |

|

| |

PROCEDIMIENTO: Obtención del extracto: 1. Se cortaron cuadritos de chile guajillo en cuadros de aproximadamente .5 cm y se  pesaron en la balanza analítica 37 gramos de chile. 2. Se depositaron en el matraz bola de 500 ml y se colocaron 70 ml de etanol. 3. Se llevo la mezcla al reflujo a 50°C por un aproximado de 20 minutos y se dejo enfriar  la mezcla. La mezcla se coloco en un frasco con tapa. Preparación de la papilla para la cromatografía de capa fina: 1. Se coloco una cantidad de cloruro de metileno dentro de un frasco y se fue agregando  poco a poco la silica gel para capa fina.

2. Se agito hasta que en el agitador se observo una capa opaca y uniforme (sin grumos y no debe ser espesa). Preparación de las cromatoplacas: 1. Se tomaron dos cubreobjetos juntos y se sumergieron en la papilla de silica gel. 2. Se sacaron cuidando no dañar la papilla adherida al cubre objetos, se separaron y se colocaron en una charola de aluminio. 3. Se activaron las placas en la estufa a 110° por 30 min. Preparación de las cámaras de elución: • Se lavaron 5 frascos de gerber con tapa, se etiquetaron y se les coloco el papel filtro alrededor dejando solo una pequeña ventana para observar el proceso. Elección de la efectividad del disolvente: 1. Se eligieron varias mezclas de disolventes con diferentes polaridades, sumando un total de 5 ml de cada combinación. Se colocaron en la cámara de elución y se espero a la absorción del papel filtro. 2. En la cromatoplaca activada se colocaron, con ayuda de un tubo capilar, dos puntos de la sustancia problema a una distancia de la base de la cromatoplaca a los puntos de 1 cm,  para que el disolvente no toque los puntos. Guardando además una distancia entre dichos  puntos para evitar su cruce en la corrida cromatográfica. 3. Se introdujeron las cromatoplacas en la cámara de elución y se espero el ascenso del disolvente, cuidando que este no rebasara la capa de silica. 4. Al terminar la corrida se retiro la cromatoplaca y se espero a su secado para corroborar  la efectividad de la mezcla. Preparación de la columna para la cromatografía fraccionada: 1. Se monto la bureta en forma vertical. Se le introdujo un pedazo de algodón el en fondo. 2. Se coloco después cerca de 1 cm de sal, cuidando quedase esta de forma horizontal. 3. Se prepararon cerca de 6 gramos de silica para columna con el disolvente escogido ( 12ml éter etílico y 18 ml de cloruro de metileno) y se vertieron en la columna esperando que la silica fuera asentándose lentamente hasta tener un aproximado a 10 cm de silica en la columna y se le coloco otra capa de sal del mismo espesor que la anterior. CORRIDA DE LA CROMATOGRAFIA DE COLUMNA:

1. Se introdujo una cantidad de mezcla problema sobre la columna preparada y después se coloco el disolvente elegido. 2. Se abrió la llave de la bureta permitiendo la evacuación del disolvente a más o menos 1 gota cada 3 segundos. 3. Se espero a la separación de los componentes de la sustancia problema reservando cada uno de ellos en tubos de ensaye. Separados por sus tonalidades en cada tubo desde el  primero hasta el último. ** ES IMPORTANTE NO DEJAR SECAR LACOLUMNA DURANTE LA CORRIDAYA QUE SE ESTROPEARIA EL TRABAJO ** COMPROBACION DE LOS COMPONENTES DE LA SUSTANCIA PROBLEMA: Una vez obtenidos los componentes de la sustancia problema por separado en los tubos de ensaye: • Se concentraron poniéndolos a baño maría en agua con el uso de un vaso de pp. de 250 ml. SE PROCURO QUE LOS COMPONENTES NO SE EVAPORARAN POR  COMPLETO. • Para comprobar si los componentes de la sustancia se obtuvieron puros, se realizo una corrida en CCF para cada componente desde los más claros hasta los más oscuros. • Se revelaron las cromatoplacas para ver si efectivamente los componentes eran puros. Aquellos que no se podían notar a simple vista se revisaron con luz UV en un lugar oscuro  para una mayor eficacia. Resultados: |ELECCION DE DISOLVENTES EN CCF | |CORRIDA |MEZCLA |CANTIDAD |EFICACIA |1° |HEXANO |2.5 ML |POCA | | |ACETONA |2.5ML | | |2° |ETER ETILICO |3ML |BUENA | | CLORURO DE METILO |1ML | | | |CICLOHEXANO |1ML | | |3° |ETER ETILICO 2ML |EXELENTE | | |CLORURO DE METILENO |3ML | |

|

|COMPROBACION DE LA PUREZA DE LOS EXTRACTOS | |CROMATOPLACA |NO. DE EXTRACTO |COMPROBACION | |I |10 |ESXTRACTOS IGUALES |

| | |II | | |III | | |IV |

|11 |7 |8 |9 |2 |1 |6 |4 |3 |5

| | | | |PURO | |PURO | |MECLA DE 2 |MEZCLA DE 4 |PURO | |MEZCLA DE 2 |MEZCLA DE TODOS |MEZCLA DE TODOS

| | | | |

ANALISIS DE RESULTADOS: En la cromatografía de capa fina creímos haber obtenido la mezcla de disolventes apropiada para realizar la CC, sin embargo comprobamos al final que tal vez pudo haberse adecuado alguna mezcla de mayor eficacia ya que al comprobar la pureza de los extractos no fue posible encontrarlos todos ellos en estado puro. Algunos de estos estaban en mezcla. Por lo tanto recomendamos realizar la elección de la mezcla de disolventes de una manera más eficaz, lo cual permitiría una mejor obtención de los componentes en sus estados puros. CONCLUSION: La cromatografía es un método muy recomendable para quien quiere comprobar los componentes de una mezcla descocida. Facilita en todo caso la obtención de estos y resulta ser sencilla y superficial (CCF) o compleja y eficaz (CC). BIBLIOGRAFIA: http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/cromatografia.htm http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/cromatografias.htm http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa ----------------------La tabla muestra las diferentes técnicas cromatográficas las cuales dependen en todo caso del tipo de fase estacionaria y móvil que se utilizan. El desarrollo de las placas se lleva a cabo en las cámaras de elución por el método ascendente. En el interior de la cámara debe colocarse un papel filtro empapado de disolvente, que cubra las paredes interiores de la misma, para conseguir que la atmosfera este saturada de vapor del disolvente. El fondo de la cámara se cubre de disolvente hasta una altura de 0.5 a 1 cm y, después de un periodo apropiado en el que se consigue el equilibrio se introduce la placa. Durante el desarrollo no puede moverse la cámara de elución.

|INSTRUMENTOS | |INSTRUMENTO |CANTIDAD |PIPETA GRADUADA 10 ML |10 |BURETA 25 ML |1 | |BALANZA A NALITICA |1 |EQUIPOS | |ESTUFA | |CANASTA DE CALENTAMIENTO |REOSTATO | |RECIRCULADOR | |PLACA DE CALENTAMIENTO

| | | | |

ELEGIDO

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA OBJETIVO:

Identificar el pigmento que le da color al chile guajillo por medio de una cromatografía en columna y capa fina. RESUMEN:

Se dejo macerar chile guajillo con tolueno y se trituro para poder extraer la mayor cantidad de pigmento. Después se hizo una extracción con agua y se agrego Na2SO4 como desecante para así contener el tolueno con el pigmento lo más puro posible. Para asegurarnos de que solo se trataba de chile guajillo se llevaron muestras a una cromatografía en columna y capa fina. INTRODUCCIÓN:

Se obtendrá una mejor identificación del pigmento cuando se encuentre el sistema de resolución adecuado de eluyentes para la cromatografía de capa fina y, se comprobara al llevar estos eluyentes a la cromatografía en columna. La Cromatografía en columna es un proceso de separación donde la mezcla fluye hacia debajo de una columna rellena con absorbente. En todos los casos la separación que se produce mediante esta técnica, es con frecuencia comprobable con la obtenida en la cromatografía de capa fina. En este caso la fase móvil se llama eluyente, que es el que nos ayudará en la separación de componentes de una mezcla y este se selecciona según su polaridad.

El requerimiento básico para la cromatografía en columna es disponer de un cilindro hueco (preferentemente de vidrio, un reservorio que contenga el solvente revelador, un buen adsorbente y los medios mediante los cuales los componentes separados se puedan recoger  a medida que aparezcan en el fondo de la columna. Los usos de este tipo de cromatografía son: 

en la separación de grandes cantidades de material



monitora la separación de la mezcla.

EN DONDE EUYENTE COLUMNA ELUATO ENTRA SALE Las cromatografías son un grupo de técnicas de separación selectiva de moléculas, en las que los componentes de una mezcla compleja de componentes pueden ser identificados y/o  purificados. Existen varios tipos de cromatografías, según los criterios que se usan para hacer los análisis, pero todas consisten de una fase estacionaria y una móvil. En la cromatografía de columna las moléculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de las moléculas por la fase estacionaria o por la fase móvil. Si una molécula A tiene más afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajará más rápido que A. Existen muchos tipos de cromatografía de columna. A. Filtración en gel: En esta las moléculas son separadas por su tamaño. El gel consiste de una cama de esferas con poros de un tamaño dado. El gel se conoce como sefadex, el cual viene con poros de distintos tamaños. Las moléculas de igual o menor tamaño que el  poro entran a las esferas mientras que las moléculas más grandes pasan rápidamente por la columna. Las moléculas de tamaño intermedio pueden entrar las esferas pero pasan menos tiempo en ellas. Las moléculas salen en orden de tamaño por el eluído. Aunque para efectos de este laboratorio las muestras que usaremos están coloreadas, al hacer esta cromatografía en la vida real hay que usar otras pruebas para determinar qué fracciones contienen las muestras de interés, las cuales suelen ser proteínas. Estas pruebas pueden ser mediciones fotométricas, SDS-PAGE o ensayos enzimáticos. Una vez tenemos identificadas las fracciones con las muestras,podemos hacer un "profile" de elución con concentración en con concentración en Y y el volumen de elución en X. El volumen inicial es el "void volume" de la columna. Lo que contiene es en amortiguador que estaba dentro de la columna al empezar. Las moléculas más grandes salen inmediatamente después. El material que se escoja para la fase estacionaria dependerá del tipo de muestra que estemos corriendo. Cada tipo de gel presenta poros de distinto tamaño.

B. Intercambio iónico: Se usa para purificar proteínas. Separa moléculas en base a su carga iónica. La fase estacionaria presenta una matriz con carga. Al eluir una muestra, las moléculas de igual carga salen con el amortiguador. Las moléculas de carga opuesta se adhieren al material de empaque con distintos grados de afinidad. Para desprender las  proteínas adheridas se usa una solución alta en cloruro de potasio o de sodio. Esto puede hacerse usando soluciones con incrementos moderados de salinidad, o de un solo paso, echando la solución de mayor concentración de sal primero. Al subir la concentración poco a poco podemos recolectar las muestras desde las que menos afinidad por la columna tiene hasta las de mayor afinidad. Durante la elución, la sal va compitiendo con la proteína por  las cargas de la matriz de la columna, hasta que la desprende. La columna puede ser de matriz negativa (intercambio catiónico) o positiva (intercambio aniónico). El tipo de empaque dependerá de qué queremos aislar. En este tipo de columna el pH es importante porque puede alterar la carga de la columna. Fase inversa: Esta es una cromatografía de interacción en la que la fase estacionaria, con moléculas hidrofóbicas, interactúa con moléculas hidrofóbicas en la muestra. La matriz conciste de fibras de silicato con cadenas de hidrocarburos. Estas atraerán a las moléculas hidrofóbicas de la muestra mientras que las hidrofílicas salen con el amortiguador. Las moléculas son eluídas de la columna lavando con soluciones de distinta concentración de alcohol o cualquier otro solvente no polar. 

MATERIAL:

 bureta de 25 ml algodón frascos soporte universal  pinzas dobles embudo de separación  papel filtro  porta objetos capilares 10 tubos de ensayo  parrilla de calentamiento

aluminio  pipita volumétrica de 5 ml  perilla etiquetas vaso de precipitados de 100 ml lámpara de rayos UV gradilla PROCEDIMIENTO: 

PREPARACIÓN DE SÍLICE GEL PARA LA COLUMNA

En un frasco se mezcla sílice gel con benceno, de tal forma que quede una papilla no muy floja. 

EMPAQUE DE LA COLUMNA

Se coloca la bureta de 25 ml en un soporte universal, y se le agregan 10 ml de benceno, y se le introduce un pequeño cacho de algodón, de tal forma que quede y se moje con benceno en la parte inferior de la bureta y posteriormente se le agrega 1 cm aproximadamente de  NaCl. Cuando este paso se haya realizado, con la ayuda de un embudo se agrega la papilla de sílice gel dentro de la bureta.  NOTA: cuando se realice este paso se tendrá que verificar que no exista burbuja de aire alguna, cuando este el sílice gel dentro de la bureta. Se le agrega otro centímetro de NaCl. 

ADICION DEL CHILE CON TOLUENO

Posteriormente se procede a agregar en la parte superior una muestra de .2 ml de chile con tolueno El eluato se recibirá en una vaso de precipitados de 100 ml y el eluyente se adicionara con la ayuda de un embudo de separación de 125 ml. (en este caso benceno) Se espera a que se comience a observar la separación de los componentes del chile con tolueno.

Cuando comience la separación. Se tratará de recolectar dichas separaciones en los tubos de ensayo y se tendrán que enumerar según el orden vayan saliendo. 

PREPARACIÓN DE CAMARAS DE ELUSIÓN

En un frasco de boca ancha, se coloca un rectángulo considerable de papel filtro. En la campana de ventilación, con la ayuda de pipeta volumétrica se agrega una mezcla de metanol con benceno 9:1, este nos servirá para revelar las cromatoplacas que se realizarán sobre los compuestos separados en los tubos de ensayo. 

CROMATOGRAFÍA EN CAFA FINA.

Cuando se haya terminado de separar los componentes del chile con tolueno, se realiza una CCF con cada uno de los eluatos obtenidos. Una vez realizado el procedimiento para la CCF (práctica antes hecha), con la ayuda de una lámpara UV se observará que fue lo que sucedió en la cromatoplaca después de salir de la cámara de elusión, esto para identificar que compuestos son iguales y cuales son diferentes. DIAGRAMA RESULTADOS:

De la cromatografía en columna se obtuvieron 8 tubos de ensaye con distintos tonos de color. Y no se pudieron concluir las elusiones ya que la columna se partio. En la cromatografía de capa fina se eluyeron los distintos compuestos que tenia la muestra de chile guajillo. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

De acuerdo a los resultados obtenidos durante el proceso de separación por medio de cromatografía en columna, se pudo observar que en lo que fue la separación , se obtuvieron 8 tubos de ensaye con diferentes productos y con diferentes tonalidades de color, esto no garantiza que todos sean diferentes, por lo cual se realizó la cromatografía en capa fina con estos dichos productos, obteniendo así: Las siguientes tablas muestran que productos de los tubos de ensayo fueron iguales y cuales fueron diferentes: # DE TUBO DE ENSAYE 1 2 3 4 SON IGUALES 9 10 11 SON IGUALES

# DE TUBO DE ENSAYE 6 DIFERENTE 7 DIFERENTE 8 DIFERENTE

La elusión en la columna no se termino ya que en la columna se formaron burbujas de aire y la silica gel se seco y estrello. CONCLUSIONES

Mediante el análisis de resultados podemos concluir que la prueba en cromatografía en columna para la separación de componentes de una mezcla de chile guajillo con tolueno fue en parte satisfactoria, por que se obtuvieron buenos resultados en cuanto a los productos contenidos en los tubos de ensaye, aunque no todos nos garantizaban que todos los compuestos contenidos en ellos eran iguales, pero mediante la identificación de un eluyente adecuado (benceno - metanol 9:1) para esta separación y una cromatografía en capa fina  pudimos identificar 5 componentes diferentes de esos tubos de ensaye. Solo que al romperse la columna no se pudo terminar de eluir toda la muestra. Al identificar estos 5 compuestos diferentes de dicha mezcla de chile se puede decir que no hubo demasiados errores en la elaboración de dichos experimentos. Aunque si llevan algo de tiempo y de cuidados al trabajar con cromatografía en columna. BIBLIOGRAFÍA:

FIESER, LOUIS EXPERIMENTOS ORGANICOS Barcelona 1967 ED. Reverté  pp.3-20 BREWESTER, Q, Ray “CURSO PRACTICO DE QUÍMICA ORGANICA” ESPAÑA 1979. ED. Alambra  pp.27,43,257,258

Harries, Daniel “QUÍMICA ANALÍTICA CUALITATIVA”  pp. CROMATOGRAFÍA “Principios y técnicas” Manual Moderno, S.A., México 1975 VOGEL, i Arthur  QUÍMICA ANALÍTICA CUALITATIVA Buenos Aires ED. Kapeluz  pp.279 REACTIVOS

sílice gel acetato de etilo tolueno  NaCl  benceno metanol PREPARACIÓN DE COLUMNA ( sílice gel ) CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Adición del eluyente (benceno) Agregar muestra de chile con tolueno

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Recolectar los eluatos En los tubos de ensayo Preparación de la cámara de elusión con el eluyente elegido en la CCF ya antes realizada Preparación de las cromatoplacas Comparar las cromatoplacas Realización de está técnica para identificar los diferentes eluatos obtenidos Definir cuantos compuestos se separaron de la mezcla