Cromatografia en capa fina y columna para pigmentos del chile guajillo

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

QUÍMICA FARMACÉUTICO BIOLÓGICA

LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA

“Cromao!ra"#a $% &a'a "(%a ) $% &o*+m%a 'ara $* &,(*$ !+a-(**o.

PROFA/ CARINA GUTIERREZ IGLESIAS

EQUIPO N0 1/ LÓPEZ LÓPEZ 2A3IR  BERNAL LÓPEZ ERIC4A

GRUPO/ “5678.

769MARZOO957:1

“Cromao!ra"#a $% &a'a "(%a ) $% &o*+m%a 'ara $* &,(*$ !+a-(**o. RESUMEN   A una muestra de chile guajillo se le realizó cromatografía en capa fina con varios eluyentes diclorometano! "ter de petróleo! cloroformo! acetato de etilo! he#ano! metanol acetona! tolueno$ para elegir el o los %ue m&s pigmentos separara! así como su proporción y polaridad y pasar la cromatografía a columna con los disolventes adecuados para eluir la mayor parte de pigmentos y asi o'tenerlos cada uno por separado(

)N*R+,U--).N  /a cromatografía es una t"cnica para separar una mezcla de dos o m&s compuestos de polaridad diferente por distri'ución del soluto en dos fases( /as diferentes interacciones %ue originan %ue las mol"culas org&nicas se unan a la superficie del adsor'ente con mayor a menor fuerza dependen de su naturaleza polar o no polar( /as mol"culas no polares interaccionan d"'ilmente con el adsor'ente mediante fuerzas de 0an ,er 1aals( /as m&s fuertes se manifiestan con mol"culas polares de fuerzas tipo dipolo2dipolo! enlace de coordinación y puentes de hidrogeno( Un compuesto no polar puede en el eluyente ser muy eluido por fuerzas de 0an ,er 1aals y d"'ilmente adsor'ido por lo tanto se va a mover r&pidamente a trav"s de la columna( 3or el contrario! uno polar es fuertemente atraído por el adsor'ente y se mover& m&s lento a trav"s del adsor'ente( ,e'ido a la diferencia de velocidad de migración en la columna los compuestos de la mezcla se separan en 'andas %ue se mueven a su propia velocidad( El chile guajillo contiene una veintena de diferentes tipos de carotenoides! Su principal componente es el 'eta caroteno seguido por la viola#antina estos son pigmentos los cuales son mol"culas %ue producen color entre ellos destacan #antofilas %ue producen la coloración amarilla! las antocianinas %ue dan el color rojo! purpura o azul y las 'etalainas cuyo color es el rojo! violeta y amarillos(  El objetivo de este e#perimento fue el de e#traer los pigmentos del chile guajillo eligiendo de entre varios disolventes el %ue mejor eluya y separara los pigmentos para una posterior recolección de los mismos en cromatografía en columna y así sa'er el n4mero e#acto de pigmentos así como ver su proporción! la hipótesis %ue se manejo es %ue el chile al estar compuesto de pigmentos como los 'eta carotenos! viola#antinas! capsantinas de diferente polaridad y se re%uieren separar de'emos usar disolventes de polaridad similar en una cromatografía en capa fina para ver cu&l es el mejor  separ&ndolos y asi con los disolventes correctos en una cromatografía en columna o'tenerlos cada uno por separado(

ME*+,+/+5)A Materiales:  Mortero con pistilo! 67 placas de portao'jetos limpias y desengrasadas! 8 frascos

transparentes con tapa! pedazos de papel filtro( -apilares! encendedor! tijeras! soporte universal! pinza do'le! columna para cromatografía! cinco vasos de pp( 9: m/! 9 tu'os ensaye! algodón! alam're! sal( Reactivos: chile guajillo! disolventes tales como cloroformo! 'enceno! dicloroetano! he#ano!

ciclohe#ano! acetato de etilo! acetona! cloruro de metileno! tolueno! 9g gel de sílice para cromatografía en capa fina! 9 g gel de sílice para columna(

-R+MA*+5RA;)A EN -A3A ;)NA •

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Se macera el chile guajillo en trozos finamente cortados y se agrega un poco de cloroformo < o 7 m/$! hasta %ue se vea %ue el cloroformo se ha pintado de color rojo intenso! filtrar con algodón y trasvasar a un frasco pe%ue=o eti%uetado( Se prepara una mezcla medio espesa de gel de sílice para cromatografía en capa fina con cloroformo hasta %ue se vea %ue esta res'ale por los costados del recipiente y no tenga grumos! se agrega con ayuda de una pipeta una pe%ue=a cantidad de la papilla de sílica gel al portao'jetos haciendo %ue se cu'ra casi por completo! dar pe%ue=os golpes para %ue %uede de manera uniforme y se elimine el e#ceso! se dejan secar! dado %ue el cloroformo volatiliza f&cilmente no tardara en secar(  -on un capilar se toma en la punta la muestra del chile guajillo con el cloroformo y dando un leve to%ue en el medio de la capa delgada! se deja secar la aplicación( >acer con todas las placas( En cada frasco transparente agregar una pe%ue=a cantidad de un disolvente! el trozo de papel filtro de forma horizontal! esperar a %ue este se empape del disolvente y meter la placa en el frasco! cerrar esperar a %ue eluya la muestra! cuando el disolvente este a medio centímetro de llegar al final sacar y marcar con un l&piz( ,e los disolventes usados elegir el o la mezcla de estos %ue m&s pigmentos separen y hacer  mezclas en diferentes proporciones para encontrar el sistema de elución con mayor eficacia(

-R+MA*+5RA;)A EN -+/UMNA •

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Una vez elegidos la mezcla de disolventes a usar para la separación de los pigmentos se procede a realizar una cromatografía en columna para aislar todos los pigmentos -olocar en posición vertical la columna cromatografica con la ayuda de un soporte universal y una pinza de do'le presión! de'e estar completamente seca y limpia( -olocar dentro de la columna un pedazo de algodón con la ayuda de un alam're o una perilla! agregar sal de mesa apro#imadamente 6cm7 y purgar agregando he#ano cuidar %ue la velocidad con %ue cae el he#ano sea de media a 'aja( En un vaso de precipitados agregar he#ano con silica gel para columna! no hay cantidades e#actas! la consistencia no de'e ser muy densa! agregar a la columna! a esto se le conoce como vía h4meda( No dejar de agregar he#ano para evitar %ue se se%ue la columna y así evitar la fractura de la misma? el he#ano se recolecta y se reutiliza para evitar grandes gastos de reactivos( En un vaso de precipitados colocar un poco de silica gel para columna se le agrega la muestra li%uida del chile guajillo con cloroformo previamente preparado en la pr&ctica de cromatografía por capa fina! se deja volatilizar todo el disolvente y se agrega a la columna cromatografica! a esta parte se le llama @muestra por vía seca$ apro#imadamente B cm 7(

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Se agrega la mezcla de disolventes C:D tolueno 7:D cloroformo en un volumen de 9:m/ y se agrega a la columna cromatografica y se dejan separar los eluatos recolect&ndolos en tu'os de ensayo separando por colores(

,)A5RAMA Cortar en trozos pequeños la mitad de un chile y macerar con cloroormo, ltrar con

+eter las placas en cada c)mara de elución.

$ntes que el disolente llegue al otro e#tremo marcar el nal del

Purgar la columna para el minar el aire con he#ano &disolente de menor polaridad'

En un aso de pp con el gel de sílice ormar una

Preparar la papilla de gel de sílice con acetato de etilo sin grumos y de

Cortar un capilar con fama para achicar el tamaño del oro

En diez rascos transparentes colocar  mapro#. e dierentes disolentes y un trozo de

 /omar de la muestra de chile con el capilar y colocar en medio de la placa a unos 0 mmm de la parte inerior. e!ar secar. 1epetir con todas

Elegir el* los disolentes que m)s pigmentos hayan separado y hacer mezclas de estos en dierentes

Colocar en el ondo de la columna un trozo de algodón no comprimido y posterior sal para nielar la su ercie

$%rir el paso de la columna y erter la

Eluir otras muestras y elegir la proporción de la mezcla que m)s

(na ez elegida la mezcla de disolentes y su proporción montar en posición ertical y com letamente seca la de En un aso pp colocar silica gel y unas gotas de "o de!ar secar la la muestra de columna chile con agregando acetona, de!ar siempre he#ano olatilizar la acetona y reoler perectamente

1ecoger los pigmentos en tu%os de ensaye etiquetados

Eluir agregando la mezcla &tolueno*

$gregar la muestra a la columna y encima agregar m)s silica el

RESU/*A,+S F ANA/)S)S

Se o'serva %ue la acetona desplaza a todos los compuestos siendo estos menos polares %ue la acetona! pero no los separa! el tolueno los separa muy 'ien en tres tipos de compuestos el naranja! amarillo y rojo! siendo el menos polar el amarillo! el he#ano al igual %ue el ciclohe#ano no los separa en nada ni si%uiera su'ieron con el disolvente! es decir! eran m&s polares %ue el solvente! el 'enceno los separo pero muy poco adem&s %ue no se vieron los tres compuestos sino solo el rojo y el amarillo! siendo el m&s polar el color rojo! el acetato de etilo los desplazo a todos y separo muy poco al amarillo del compuesto rojo siendo de polaridad similar a la del eluente! el cloroformo los fue separando pero no se vio una separación marcada sino desplazo a todos por igual( ,e a%uí se eligieron el disolvente %ue m&s y el %ue menos separo a los componentes de la mezcla %ue fueron tanto el tolueno como el he#ano! se hicieron mezclas de estos a diferentes concentraciones y la %ue mejor se o'servó %ue los separo fue la mezcla a proporción C7  Al agregar la muestra a la columna el primer compuesto en eluir con el he#ano fue colorante el amarillo! un amarillo muy claro! de este se recolecto una 'uena cantidad( ,espu"s se fueron separaron el rojo junto con otro amarillo! pero m&s fuerte! la división entre estos no era muy marcada! pero se aprecia'a la diferencia de colores! para %ue se separaran a4n m&s estos compuestos y se notara la separación y fuese m&s f&cil recolectarlos por  separado se agregó la mezcla de tolueno con he#ano a la columna y estos separaron en tres! el colorante amarillo muy fuerte! un anaranjado y un rojo %ue %uedo en la parte superior de la columna(

 El primero en separarse como se ha'ía mencionado fue el amarillo fuerte! de este se recolecto una mínima cantidad! le siguió en recolección un anaranjado no muy marcado %ue se o'tuvo en proporción por igual con el primer colorante amarillo claro( El orden de la elución se llevó a ca'o de los menos polares a los m&s polares! los colores o'tenidos amarillo fuerte! amarillo claro! naranja 0iola#anthin$ ! amarillo! amarillo muy tenue! el color rojo no se pudo o'tener %ue corresponde al -apsanthin! los varios tonos de amarillo o'tenidos corresponden al pigmento llamado antera#anthin( 3or falta de reactivos y de tiempo no se determinó si los pigmentos corresponden a lo o'servado por  cromatografía en capa fina? /a mezcla de disolventes fue insuficiente pues el color rojo -apsanthin$ no se pudo separar( -+N-/US).N /a cromatografía en capa fina es un m"todo de an&lisis cualitativo económico! r&pido y f&cil cuyo propósito es la separación de componentes mediante una fase estacionario y una móvil se fundamenta en la diferencia de polaridad entre los componentes de la mezcla( Es 4til para analizar el n4mero de componentes de un compuesto y su importancia radica en %ue en la separación se pueden e#traer por separado y analizar %u" tipo de compuesto es el %ue se tiene presente! adem&s %ue es un paso previo a la cromatografía en columna pues a%uí se pueden elegir  los mejores eluentes y las mezclas de estos para el tipo de compuesto %ue se est& analizando por  ser r&pido y sencillo( El uso de la cromatografía en capa fina es amplio siendo 4til en el estudio de impurezas! para llevar  el control de una reacción adem&s de optimizar el sistema de columna( En total se o'tuvieron cinco colorantes m&s pro'a'lemente uno m&s %ue %uedo en la columna %ue componían a la mezcla de chiles! estos se o'tuvieron en diferentes proporciones siendo el amarillo claro y el naranja claro %uienes se encontraron en mayor proporción! el de menor cantidad fue el amarillo claro! la separación se de'ió a %ue sus polaridades fueron a fines a los eluentes utilizados para sa'er esto se tuvo %ue hacer previo una cromatografía en capa fina %ue es m&s sencilla y r&pida a diferencia de la de columna! pero siendo la de columna m&s eficiente a la hora de %uerer  aislar los componentes para su futuro estudio de'ido a %ue posee una mayor &rea de superficie para %ue los componentes eluyan y se puedan separar m&s f&cilmente y o'servar las separaciones(

G)G/)+5RA;)A Horge Alejandro ,( S(( Iuímica org&nica e#perimental( /imusa( 5rupo Noriega Editores( M"#ico( 6JJ<  A''ott ,avid! R(S( AndreKs( )ntroducción a la cromatografía( Alham'ra editorial( Espa=a( 6J87( Mdz( Mata M( *eresa! *orres -( M( de los Lngeles! Manual para el la'oratorio de %uímica org&nica para la carrera de %uímica farmac"utico 'iológica! ;ES (