Cromatografia e Eletroforese
Short Description
Descrição: Seminário sobre as técnicas de cromatografia e eletroforese....
Description
CROMATOGRAFIA CROMA TOGRAFIA E ELETROFORESE E LETROFORESE
CROMATOGRAFIA CROMA TOGRAFIA E ELETROFORESE OBJETIVOS •
O presente experimento teve como objetivo realizar a caracterização de uma amostra de aminoácidos desconhecidos, através do uso das técnicas de cromatogr cromatografia afia e eletroforese;
•
Como objetivo secundários, o experimento buscou explorar a teoria envolvida nas técnicas de eletroforese e cromatografia, cromatograf ia, assim como as propriedades de aminoácidos e proteínas.
CROMATOGRAFIA CROMA TOGRAFIA E ELETROFORESE OBJETIVOS •
O presente experimento teve como objetivo realizar a caracterização de uma amostra de aminoácidos desconhecidos, através do uso das técnicas de cromatogr cromatografia afia e eletroforese;
•
Como objetivo secundários, o experimento buscou explorar a teoria envolvida nas técnicas de eletroforese e cromatografia, cromatograf ia, assim como as propriedades de aminoácidos e proteínas.
INTRODUÇÃO
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE INTRODUÇÃO •
A cromatografia é uma técnica que utiliza a diferença de interação entre a fase móvel e a estacionária para separar os componentes de uma mistura;
•
Para a cromatografia em papel, a fase móvel costuma ser um solvente, ou uma mistura de solventes, que devido ao fenômeno de capilaridade se movimentam de forma ascendente através do papel, arrastando consigo as substâncias solubilizadas;
•
No experimento em questão, o solvente utilizado foi uma mistura de butanol, ácido acético e água (4:1:5). A água adsorvida na celulose cumpre o papel de fase estacionária, retendo com maior afinidade aquelas moléculas mais polares.
Figura 1: Monômero de celulose
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE INTRODUÇÃO •
O quanto cada substância irá ascender pela fase estacionária é determinado pelo seu fator de retenção (R f), determinado por:
d = distância entre o centro da mancha e o ponto de aplicação da amostra; D = distância percorrida pela fase móvel.
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE INTRODUÇÃO Exemplo:
RF1 = 1,4/7,7 = 0,182 RF2 = 6,0/7,7 = 0,779 RF3 = 4,1/7,7 = 0,532
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE INTRODUÇÃO •
A eletroforese é uma técnica que utiliza a capacidade migratória dos íons em um campo elétrico para separar uma mistura de diferentes substâncias;
•
Ao passar uma corrente contínua entre dois eletrodos, os ânions se movem em direção ao eletrodo positivo e os cátions se movem em direção ao eletrodo negativo .
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE INTRODUÇÃO •
O experimento em questão fez uso da eletroforese de papel em alta voltagem;
•
Nesta técnica, a amostra é aplicada na forma de uma pequena mancha sobre uma folha de papel previamente umedecida com a solução tampão adequada;
•
As extremidades da folha de papel são ligadas em eletrodos, através dos quais é aplicada uma diferença de potencial;
•
Uma vez que os aminoácidos presentes na amostra possuem diferentes pontos isoelétricos (pI), os mesmos possuem cargas diferentes entre sí, percorrendo diferentes distâncias sobre o papel.
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE INTRODUÇÃO •
Os fatores que influenciam a separação das cargas são: •
A força do campo elétrico empregado;
•
A viscosidade do meio;
•
pH do meio;
•
Valor da carga líquida da molécula;
•
Tamanho e massa da molécula;
•
Conformação da proteína.
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE INTRODUÇÃO •
Enfim, a mobilidade eletroforética ( !) é dada por:
•
v = velocidade
•
E = potencial elétrico
•
Z = carga líquida
•
f = coeficiente de atrito
MATERIAIS E MÉTODOS
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE MATERIAIS E MÉTODOS ELETROFORESE
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE MATERIAIS E MÉTODOS ELETROFORESE
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE MATERIAIS E MÉTODOS CROMATOGRAFIA
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE MATERIAIS E MÉTODOS CROMATOGRAFIA
RESULTADOS E DISCUSSÃO
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE RESULTADOS E DISCUSSÃO
Eletroforese pH 5
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE RESULTADOS E DISCUSSÃO
Eletroforese pH 5
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE RESULTADOS E DISCUSSÃO
Eletroforese pH 6
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE RESULTADOS E DISCUSSÃO
Eletroforese pH 6
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE RESULTADOS E DISCUSSÃO
Eletroforese pH 10
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE RESULTADOS E DISCUSSÃO
Eletroforese pH 10
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE RESULTADOS E DISCUSSÃO
Cromatografia
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE RESULTADOS E DISCUSSÃO
Cromatografia
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE RESULTADOS E DISCUSSÃO Eletroforese •
Por eletroforese, tanto pH 5, 6 ou 10, observamos que a nossa amostra pode ter todas os aminoácidos testados, exceto a Glutamina por comparação a olho nu.
Cromatografia •
Por cromatografia, podemos determinar quais são os aminoácidos presentes verificando a olho nu ou comparando o Rf de cada mancha, o que é mais recomendado.
•
Nossa amostra tem 3 manchas com os Rfs:0,093, 0,15, 0,613.
•
Por comparações, vimos que os aminoácidos que podem estar presentes são a lisina , com o Rf 0,06 , a arginina, com o Rf 0,13, a histidina com Rf 0,113 e a leucina, com Rf 0,633.
REAÇÃO DE PRECIPITAÇÃO COM ÁCIDO FOSFOTUNGUÍSTICO REAÇÃO PARA AMINOÁCIDOS BÁSICOS
REAÇÃO DE SAKAGUCHI REAÇÃO PARA AMINOÁCIDOS CONTENDO GRUPO GUANIDINO
a r t s o m A
% 1 a n i s i L
% 1 a n i d i t s i H
% 2 a n i n i g r A
% 2 a % i n 1 a m u n b i c l i l a G o v O
REAÇÃO DE PAULY REAÇÃO PARA AMINOÁCIDOS CONTENDO GRUPO F ENOL E IMIDAZOL
a % d % l 2 a % 1 i a t 1 a n i % a % n s e a n 1 i r m 1 i d s t u a d a o a s n i r u o b n i t i l i s i s T g m a c i i o l Á A v G H L O
CONCLUSÕES
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE CONCLUSÕES •
A presença de Leucina foi confirmada através da eletroforese e na cromatografia.
•
Através das técnicas de eletroforese e cromatografia não foi possível determinar com certeza todos os aminoácidos presentes.
•
A soma dos resultados obtidos na cromatografia, eletroforese e dos testes colorimétricos permitem afirmar que a amostra analisada é composta por Leucina, Lisina e Arginina.
View more...
Comments
