Cromatografia de Afinidad

Química CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD La cromatografía cromatografía de afinidad ocupa un lugar importante en la tecnolog tecnología ía de separa separación, ción, ya que es una técnica capaz de purificar biomoléculas sobre la base de su función biológica o estruc est ructu tura ra qu quími ímica ca in indiv divid idual ual.. Es Esto to ha hace ce qu quee se seaa un mé méto todo do de ma mayo yorr res resolu olució ción n precisamente por la extraordinaria selectividad en que se basa su principio de separación. La primera aplicación aplicación de este tipo cromatografía cromatografía se llevó a cabo en !" en la purificación de am amila ilasa sa so sobre bre la ba base se de un alm almid idón ón in insol solub uble. le. #o #ost steri eriorm orment entee en !$ !$%, %, alg alguno unoss autores reportaron que las moléculas que contenían grupos aminos primarios, podían ser acopladas a matrices de polisac&ridos activadas con bromuro de cianógeno y ya en !%', la #harmacia había desarrollado la (epharo (epharose)*+ se)*+ activada con bromu bromuro ro de cianóge cianógeno, no, un gel listo para la inmovilización del ligando. En la actualidad existen una serie de productos geles- listos para la inmovilización del ligando a través de diferentes grupos funcionales. Eemplos/ •

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0hiopropyl 0hiopro pyl)(ep )(epharo harose se $+ con contien tienee un gru grupo po tiol acti activo vo,, par paraa inm inmovil ovilizar izar lig ligando andoss peque1os que contengan grupos tioles, enlaces 234, 535 o 232 -. Epoxy)activated)(eph Epoxy)activ ated)(epharose arose $+ contien contienee grupos oxiranos oxiranos libres para intera interactuar ctuar con ligandos que contengan hidroxilos, grupos amino o grupos tioles-. 6ctivated 27)(epharose *+ contiene un brazo espaciador de $ &tomos de carbono y un grupo gru po ést éster er act activ ivo o pa para ra in inte tera ractu ctuar ar con liligan gando doss qu quee co cont nten engan gan gr grup upos os am amin inos os primarios-.

Esta cromatografía es un tipo de cromatografía de adsorción en la que la molécula a ser purificada es adsorbida de forma reversible y específica, a una sustancia complementaria ligando- inmovilizada en un soporte insoluble matriz-. 0iene un efecto concentrador, lo quee pe qu permi rmite te pr proc ocesa esarr gr gran ande dess vo vol8 l8men menes es de mu muest estra ra.. La al alta ta sel select ectiv ivida idad d de las separaciones depende de la especificidad natural de las moléculas interactuantes. Este método puede ser usado para/ •

#urificar sustancias de mezclas biológicas compleas.

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(eparar la forma nativa de la desnaturalizada de una misma sustancia.

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Eliminar peque1as cantidades de material biológico de grandes cantidades cantidades de sustancias contaminantes.

Este tipo de cromatografía a la cual hacemos referencia se desarrolla en tres etapas fundamentales 9igura -/ . :nmo :nmovili vilizació zación n del ligando. ligando.

Cromatografía de Afinidad

'. 6dsorción de la sustancia a purificar. ;.