coproparasitoscopico

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

MÉDICO CIRUJANO

MÓDULO V APARATO DIGESTIVO

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA PRÁCTICA 19 EXÁMENES COPROPARASITOSCÓPICOS

OBJETIVOS Conocer la la importancia importancia del diagnóstico de laboratorio de las enfermedades parasitarias. 

Identificar las formas parasitarias mediante la observación al microscopio. 

Conocer la clasificación de los exámenes coproparasitoscópicos 

Reactivos - Sacarosa (azúcar común).

1.- Solución de sacarosa con densidad de 1.180. 2.- Lugol parasitológico (ver método directo).

Método cualitativo de concentración por flotación simple

Se usa para la búsqueda e identificación de formas parasitarias como huevos, quistes y larvas. La densidad tan elevada de la salmuera distorsiona las formas parasitarias y se necesita experiencia para la lectura.

Reactivos - Cloruro de sodio comercial.

Solución de lugol parasitológico Solución saturada de cloruro de sodio.

1.- Se hace una suspensión homogénea con 1 a 2 g de materia fecal y 10 ml de agua de la llave. 2.- Se pasa a través de gasa colocada en el embudo y colectando la suspensión directamente en el tubo de ensaye. 3.- Los tubos así preparados, se centrifugan a 2,000 revoluciones por minuto (r.p.m.) durante un minuto. 4.- Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con agua, agitando con un aplicador. 5.- Se centrifuga nuevamente y se vuelve a decantar el sobrenadante.

6.- Se agregan 2 a 3 ml de la solución de sulfato de zinc a los tubos y se homogen homogeneiz eizan an perfecta perfectamen mente, te, llenand llenandoo los tubos tubos has hasta ta 0.5 a 1 cm. por abajo de los bordes. 7.- Se centrifuga a 2000 r.p.m. durante un minuto. 8.- Con el asa estéril estéril o flameada, flameada, se recoge recoge la muestra muestra de la pelí película cula superficial, que se encuentra en el menisco, durante dos o tres ocasiones sucesivas y se deposita en un porta objetos. 9.- Se agregan dos gotas de lugol parasitológico y se homogeneiza con el ángulo de un cubreobjetos y se coloca este sobre la preparación. 10.- Se observa la preparación al microscopio con objetivos 10X y 40X.

TÉCNICAS CUALITATIVAS

1.- Suspen end der 1 a 2 g de mater eriia fecal en 10 ml de " Carles l ", utilizando la cápsula de porcelana para homogeneizar. 2.- Pasar la suspensión a través de la malla o gasa. 3.- Centrifugar a 1,800 r.p.m. durante 1 minuto. 4.- De 4.Deca cant ntar ar y ag agre rega garr al se sedi dime ment ntoo " Ca Carl rles es II ", ha hast staa ll llen enar ar do doss tercios del tubo. 5.- Agitar con fuerza y añadir el éter hasta centímetro y medio del borde. 6.- Tapar el tubo tubo con el tapón de caucho caucho y agitar violenta violentamente mente hasta

8.- Con un palillo palillo de dientes dientes,, se rom rompe pe el tapón de las heces, heces, gra grasas sas y otros restos, agitando ligeramente con el palillo. 9.- Se vuelve a centrifugar durante otros 30 seg. a 1,800 r.p.m. 10- Se rompe nuevamente el tapón superior de restos fecales, desprendiéndolo de la pared del tubo con cuidado, ayudándose del palillo. 11- Se decanta decanta de una sola vez, procurando procurando que quede quede una pequeña canti cantidad dad de 2 a 4 gotas líquidas junto al sedimento. 12- Agregar al sedimento una gota de lugol y agitar el tubo ligeramente para homogeneizar. 13- Con la pipeta Pasteur, se toma una gota de la suspensión coloreada del fond fo ndoo de dell tub uboo y se co colo loca ca en el po port rtaaob obje jeto tos, s, co colloc ocaand ndoo so sobbre es estte el cubreobjetos. 14- Se observa en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.

1.- Se coloc 1.colocaa un fragm fragmen ento to de he hece cess fe feca cale less de dell ta tama maño ño de un fr frijijol ol ( 1 g aproximadamente) aproximadam ente) en un vaso que contenga 5 a 10 ml de ácido clorhídrico al 15 %. 2.- Se homogeneiza con el aplicador. 3.- Se pasa la suspensión por dos capas de gasa previamente humedecida, recibiendo el colado en el tubo de centrífuga cónico de 15 ml. 4.- Se añade éter en cantidades iguales iguales y se coloca un tapón tapón de caucho. 5.- Se agita vigoro vigorosame samente nte y se afloja el tapón para para disminuir disminuir la presión presión y se destapa. 6.- Se centrifuga a 1,500 r.p.m. durante un minuto. 7.- Se saca de la centrífuga y se observan 4 capas: 1a.- Eter. 2a.- Tapón de restos fecales. 3a.- Capa de ácido. 4a.- Sedim Sedimento ento infer inferior ior que conti contiene ene form formas as para parasitar sitarias. ias.

8.- Se mantiene el tubo horizontal y con un aplicador de madera y con movimientos circulares, se despega el tapón de restos fecales. 9.- Rápidamente, pero con cuidado, se vierten vierten el éter, tapón de restos fecales y la capa de ácido, de manera que quede el sedimento en el e l tubo. 10- Se mantiene el tubo en posición horizontal, para evitar que los restos de extracto graso y de tapón fecal bajen por las paredes del sedimento. 11- Se introduce introduce un aplicador aplicador con hiposo de algodón algodón y se limpian las paredes paredes del tubo. 12- Con el tubo tubo vertical, se toma parte del sedimento con con una pipeta Pasteur. 13- Se coloca en un portaobjetos y se pone un cubreobjetos por encima de este. 14- Se examina examina en el microscopio microscopio con objetivo seco débil 10X 10X y seco fuerte 40X.

Se han descrito trofozoitos

Técnica permite hacer una buena concentración de huevos, quistes y larvas,

Se pueden destruir con el éter a pesar de que hayan sido previamente fijados y conservados con el MIF.

REACTIVOS •

Éter etílico., Merthiolate., Yodo de potasio. Formaldehído. Glicerina. Y agua destilada.

1.-

•

•

2.-

• • •

•

SOLUCIONES

3.-

•

•

- Solución de MIF.

Mezclar la muestra fecal con la solución de MIF y pasarla a través de gasa humedecida en MIF a un tubo cónico de centrífuga Se agregan 5 ml de éter, se tapa y agita Se retira el tapón con cuidado y se centrifuga a 1,500 r.p.m. durante un minuto. Se forman 4 capas: 1a.- Eter. 2a.- Restos fecales. 3a.- Solución MIF. 4a.- Sedimento con las formas parasitarias Se desprende el tapón superficial y se decantan las tres capas superiores, Con una pipeta Pasteur se toma la muestra de la parte superior del sedimento, se coloca en un un portaobjetos y se cubre. Se examina en el microscopio con objetivos de seco débil y seco fuerte.

" EXAMENES COPROPARASITOSCOPICOS CUANTITATIVOS "

MATERIALES

REACTIVOS

- Hidróxido de sodio Q.P.

- Agua destilada.

SOLUCIONES

- Solución 0.1\ N de Hidróxido de sodio

El equipo y material que se utiliza no se puede conseguir fácilmente en el comercio.

1.- Se pesa un frasco de boca ancha con un abatelenguas. 2.- Se pone materia materia fecal ayudánd ayudándose ose con el abatelengua abatelenguas, s, hasta que sean 4 g (peso del frasco con con el abatelenguas más 4 g de materia fecal). 3.- Se miden 36 ml de solución de formaldehído y se vacían en el frasco. 4.- Se homogeneiza la materia fecal con la solución de formol hasta que quede una suspensión. 5.- Se pasa la mezcla mezcla por malla o gasa previam previamente ente colocada colocada en un embudo embudo y se recibe la suspensión en un tubo colocado en una gradilla. 6.- Se centrifuga durante un minuto a 2,000 r.p.m.. 7.- Se decanta el sobrenadante, se suspende el sedimento con agua y se vuelve vuelve a centrifugar bajo las mismas condiciones anteriores. 8.- Se decan 8.decanta ta nueva nuevame ment ntee el sobre sobrena nada dant ntee y se agreg agregan an 2 a 3 ml ml.. de la solución de sulfato de zinc, se mezcla hasta hasta hacer una nueva suspensión.

9.- Se introduce la campana de Ferreira, dando un pequeño giro. 10- Se llena llena el tub tuboo con más soluci solución, ón, procur procurand andoo que tan tanto to el men menisc iscoo interno de la campana, como el externo, vayan subiendo paralelamente. 11- Se centrifuga a 2,000 r.p.m. durante un minuto. 12- Se saca el tubo tubo de la centrífuga centrífuga y con el pulgar y el índice se comprime comprime fuertemente el trocito de manguera de caucho del extremo anterior de la campana y de un golpe se saca ésta del tubo. 13.- Se in 13.invi vier erte te la campa campana na sobr sobree el po port rtao aobj bjeto etoss y se homo homoge gene neiz izaa la sus uspe pens nsió iónn con el án ángu gulo lo de un cu cubbre reob obje jeto toss y se co colloca oca sob obre re el portaobjetos. Se examina examina la prepara preparació ciónn con el microsco microscopio pio a seco débil y sec secoo fuerte (10X y 40X respectivamente)

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE HUEVOS DE ALGUNOS PARÁSITOS

         

Microscopio Centrifuga Vaso de precipitados Tubos con tapón Embudo de plástico Pipetas Pasteur Varilla de vidrio Abatelenguas Asa bacteriológica Gasas

METODO DE FAUST Y COLS

Pon oner er con un ap apli liccad ador or 1 g de ma matteri ria a fec ecal al en un vas aso o de precipit prec ipitado ado,, agre agregar gar 210 ml de soluc solución ión salin salina a isot isotónic ónica a Filtrar la suspensión embudo

a

través de

la gasa

colocada

en u n

Centrifugar durante 45-60 seg a 2500 rpm Tirar el líquido sobrenadante y añadir 2-3 ml de sedimento

agua al

Repetir la maniobra hasta que el líquido que sobrenada sea claro Agregar 8-9 ml de sulfato de zinc ; una vez tirado el sobrenadante agitar y adicionar adicionar solución hasta llenar el tubo Centrifugar durante 45-60 seg a 2500 rpm Tom oma ar con el asa la película superficial y colocarlo en el port po rtaob aobje jeto tos, s, añ añad adir ir un una a go gota ta de lu lugo goll pa para ra te teñi ñirr la la me mezzcl cla, a, cubrir con una laminilla y observar a seco débil y seco fuerte

METODO DE RITCHIE Poner un aplicador 1g de ma materia fe fecal en el el va vaso de precipit prec ipitados, ados, agre agregar gar 10 ml de soluc solución ión salin salina a isot isotónic ónica. a. Filtrar la suspensión a través de la gasa colocada en un embudo reci recibiend biendo o en el tubo. Centrifugar durante un minuto a 2000 rpm; desechar el sobrenadan sobr enadante, te, repe repetir tir hast hasta a que el sedime sedimento nto est este e limpi limpio o Agreg Agr egar ar 10 ml de fo formal rmalina ina al 10% y dej dejar ar en re repos poso o 10 min

Centri Cent rifug fugar ar du durran ante te 1 mi min n a 15 1500 00 rp rpm; m; en do donde nde se ob obse serv rvar arán án 4 capas: Eter Restos Rest os fec fecales ales Formol Sedimento Introducir una pipeta pipeta Pasteur Pasteur y extr extraer aer el sedimento; colocar colocar una gota sobr so bre e el por porttaob obje jettos, ag agrregar 1 got ota a de de lug lugol ol y cub cubri rirr con una una laminilla Observar a seco débil y seco fuerte