Caracterización y selección de bacterias promotoras de crecimiento en el cultivo orgánico de maca(Lepidium meyenii Walpers) como herramienta Biotecnológica para mejorar su calidad productiva Proyecto Perú Biodiverso – GTZ - CONCYTEC Dra. Doris Zúñiga Dávila Email:
[email protected] Web: www.lamolina.edu.pe/lmt Red biofag: www.biofag.org Universidad Nacional Agraria La Molina Mayo 2010
LUGAR DE EJECUCIÓN: Campesina San Pedro de Cajas Provincia de Tarma – Departamento de Junín Ensayos de laboratorio: Laboratorio de Ecología Microbiana y Biotecnología Marino Tabusso, Dpto. Biología UNALM
EQUIPO DE INVESTIGACIÓN Biol. Katty Ogata
Bach. Minoru Matsubara Bach. Mitsuyo García Bach. Jessica Tolentino Wendy Pérez Bach. Luder Ramos Colaboradores
Dr. Carlos Samaniego, Ecoandino S.A.C Dr. David Campos, Instituto de Biotecnología, UNALM
Institución Internacional Dra. Esperanza martínez, CCG Cuernavaca, UNAM-Mexico
Lugares de muestreo y condición del campo
Lugar
Suelo
Condición de campo
muestras
1er año de siembra
M1 M2 M3 M4
Galpón Condorín (MC1)
Rizosférico
Blanco (C1)
Sin cultivo
M1 M2
Rizosférico
M1 M2 M3 M4
Agomachay (MC2)
2do año de cosecha Blanco (C2)
Sin cultivo
Condorín (D3)
Sin cultivo
M1 M2 10 años de descanso
M1 M2
METODOLOGÍA
Análisis Microbiológicos • Recuento de bacterias aerobias mesófilas viables (ICMSF, 1998) • Recuento de bacterias aerobias psicrófilas (ICMSF, 1998) • Recuento de esporogénicos mesófilos aerobios (APHA, 1992) • Recuento de mohos y levaduras (ICMSF, 1998) • Recuento de actinomicetos (APHA AWWA WEF – 1998) • Enumeración de Pseudomonas (APHA AWWA WEF – 1998) • Enumeración de bacterias fijadoras de nitrógeno de vida libre (Burges, 1960)
Parámetros de crecimiento, tamaño, P Fresco, P Seco, tasa de crecimiento
Plantas Bioquímica: glucosinolatos Contenido macronutrientes Contenido micronutrientes Contenido de metales pesados Caracterización fisico quimica de suelos: pH, M.O, CE, Textura. Contenido de macronutrientes Contenido de micronutrientes
Suelo Contenido metales pesados
Preparación de muestras y diluciones
1 mL
1 mL
10 mL/g 9 mL AP 0.1%
9 mL AP 0.1%
Muestra
10-1
90 mL AP 0.1%
10-2
10-3
Medios de cultivo y condiciones de incubación para la determinación de la microflora analizada Análisis Aerobias mesófilas Hongos totales
Actinomicetos
Bacillus
(80°C)
Diluciones -4, -5, -6
-2, -3, -4
-1, -2, -3, -4 -4, -5 y -6
Medio de cultivo Agar Plate Count OGY*
Agar Almidón caseína**
AgarTriptona glucosa
Temperatura y tiempo de incubación 28°C por 48 horas
22°C por 3 - 5 días.
28°C por 6 - 7 días. 28°C por 48 horas
Diazótrofos de vida libre
-2, -3, -4, -5, -6, 7, -8
Caldo mineral sin nitrógeno
28°C por 7 - 10 días
Pseudomonas
-2, -3, -4, -5, -6, -7
Caldo Asparagina
28°C por 7 - 10 días
*Suplementado con Oxitetraciclina al 0.1% **Suplementado con Fluconazol al 0.25%
Medición de la actividad microbiana Pesar 25g de suelo tamizado Adicionar 0.5mL de sol. glucosa 25%
Vial con 3.5mL NaOH 1N
Incubar a 28°C por 24 horas
Trasvasar el contenido del vial a un matraz
HCl 0.25N Adicionar 3.5mL de BaCl2 + fenoftaleína
Titular el NaOH no combinado (hasta el viraje de rosa grosella a transparente)
Calcular la tasa de CO2 producido: mg CO2/g*h
RESULTADOS Y DISCUSIONES Lugar : San Pedro de Cajas (4100 msnm) Temperatura registrada durante el muestreo : 9 y 10°C
Temperatura y Humedad relativa del ambiente
Campo muestreado
Característica
Galpón Condorín (C1)
Primer año de siembra
Agomachay (C2)
Segundo año de cosecha
Condorín (D1)
10 años de descanso
Pampa Cima (D2)
4 años de descanso
Pampa Cima (D3)
1 año de descanso
LOCALIZACIÓN 18L0401914 UTM8755920 18L0401914 UTM8755942 18L0399212 UTM8754983 18L0398260 UTM8754213 18L0398288 UTM8754085
T (ºC)
%H
9.42
60.8
10
53.4
9.04
65.4
10.64
50.4
10.88
39.2
Características fisicoquímicas de los suelos y rizósfera PRIMER MUESTREO Parámetros
MC1
C1
MC2
C2
D3
D2
D1
pH
4.25
4.27
5.08
5.08
5.26
4.59
4.48
C.E.
0.57
0.26
0.5
1.44
0.48
0.38
0.6
CaCO3
0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
M.O.
4.84
4.4
6.4
11.94
8.1
5.5
4.7
P
67.9
60.6
61.6
64.1
61.3
65.2
65.9
K
215
176
158
554.4
210
161
231
Clase Textural
Fr.A.
Fr. A.
Fr.A.
Fr.A.
Fr.A.
Fr.A.
Fr.A.
CIC
14.9
15.04
27.52
23.68
8.43
8.43
8.43
Características fisicoquímicas de los suelos, San Pedro de Cajas
TERCER MUESTREO Parámetros
C1 1 año Siem.
C2 2 año cosecha
pH
5.2
5.21
C.E.
0.51
0.24
CaCO3
0.00
0.00
M.O.
7.8
8.0
P
36.7
56.1
K
162
196
Clase Textural
Fr. A.
Fr.A.
CIC
18.72
24.00
Poblaciones microbianas del suelo y de la rizósfera de maca – Junín PRIMER MUESTREO Bacterias m esófilas
Ps ic r ófilos
Suelos aer obios * Bac illus * Mohos * Ac tinomic etos * Diaz ótr ofos ** Ps eudomonas ** C1 C2 MC1 MC2 D1 D2 D3
mg CO 2/ ( gs s * h)
aer obios
6.18 7.18 5.69 6.99
4.74 4.49 4.49 4.84
5.08 5.46 4.11 4.88
5.08 4.91 4.32 5.04
5.30 6.06 4.95 6.20
3.95 4.93 6.04 6.25
0.026 0.046 0.030 0.055
4.903 7.490 6.591 7.157
6.41 5.41 5.90
4.52 4.81 4.81
5.26 5.28 5.32
5.78 4.93 5.30
4.95 5.18 5.30
5.38 4.38 3.38
0.034 0.020 0.032
5.903 6.121 6.182
* Log ufc/g ** NMP/g
Mohos y levaduras
Esporulados mesófilos aerobios
Población microbiana de suelos de Junín del primer muestreo
9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
aerobios mohos y levaduras bacillus psicrófilos actinomicetos
C1
MC1
C2
MC2
D1
D2
D3
Suelos muestreados
Poblaciones microbianas de Pseudomonas y diazótrofos en el suelo y rizófera del cultivo de maca 8 7 6
log (NMP/g)
log (ufc/g)
Poblaciones microbianas del suelo y rizósfera del cultivo de maca
5
pseudomonas
4
Azotobacter
3 2 1 0 C1
MC1
C2
MC2
D1
Suelos muestreados
D2
D3
Poblaciones microbianas del suelo y de la rizósfera de maca - Junín
SEGUNDO MUESTREO Bac t erias mes óf ilas
Bac t erias ps ic róf ilas
Suelos
aerobios
Bac illus
Ac t inomic et os
Mohos
Diaz ót rof os
Ps eudomona
aerobios
C1
6.76 6.43 6.42 6.30 6.68
5.04 4.67 4.86 4.69 4.89
4.13 3.52 4.77 4.28 4.29
5.48 5.64 5.00 5.40 3.89
5.64 6.06 7.12 5.94 6.33
2.89 4.38 5.03 5.44 6.03
4.66 6.22 6.84 6.44 6.30
C2 MC1 MC2 D3
Bac illus Mohos
4.75 4.60 5.01 4.97 5.17
5.20 5.93 5.20 5.49 4.88
Ac t . Mic robiana mg CO2 res p/ (g s uelo* h) 0.0302 0.0447 0.0354 0.0446 0.0383
Población microbiana de suelos de Junín del segundo muestreo Poblaciones microbianas del suelo y rizósfera del cultivo de "maca" 8
7
6
Bacillus Psf M y L Psf. Aerobios Psf MyL Bacillus
4
Aerobios Actinomicetos
3
2
1
0
C1
MC1
C2
MC2
D3
Suelos muestreados
Poblaciones Pseudomonas y diazótrofos del cultivo de "maca" 9 8 7 log (NMP/g)
log (ufc/g)
5
6 5
Pseudomonas
4
Diazotrofos
3 2
Mc1 y Mc2, rizósferas maca
1 0 C1
MC1
C2 suelos muestreados
MC2
D3
Variación de las Poblaciones microbianas en Galpón Condorín log (ufc/g) vs tiempo (días) Galpón Condorín (C1)
8 aerobios
log (ufc/g)
7 6
Bacillus
5 mohos
4 3
actinomicetos
2 1
aerobios psf
0 0
20
40
60
80
100
120
140
tiempo (días)
log (NMP/g) vs tiempo (días) Galpón Condorín (C1)
Pseudomonas 6
5
log (NMP/g)
DVL
4
diazótrofos
3
2
Pseudomonas
1
0 0
20
40
60
tiempo (días)
80
100
120
140
Variación de las Poblaciones microbianas en Agomachay log (ufc/g) vs tiempo (días) Agomachay (C2)
8 6
aerobios
5
Bacillus
4
mohos
3
actinomicetos
2
aerobios psf
1 0 0
20
40
60
80
100
120
140
tiempo (días)
log (NMP/g) vs tiempo (días) Galpón Condorín (C1)
6
log (poblac NMP/g)
log (ufc/g)
7
5
4 diazótrofos
3
Pseudomonas
2 1 0 0
20
40
60
80
tiempo (días)
100
120
140
Producción de Ácido Indolacéticos
•Bacterias diazótrofas mostraron altos niveles de AIA y de solubilización de fosfatos en comparación a los otros grupos bacterianos
Reacción oxidativa con el reactivo de Salkowsky
Solubilización de Fosfato bicálcico y tricálcico
b a
Bacterias relacionadas a la rizósfera de diferentes cultivos
Bacteria Pantoea agglomerans Rahnella aquatilis Stenetrophomonas rhizophila
Cultivos trigo trigo, maíz papa, colza
Total de bacterias que produjeron Ácido indolacético
Total de bacterias 421
Producción AIA < 20 a 70 µg/ml 0 µg/ml 20 a 70 µg/ml 246 (58.43%) 43 (10.21%) 132 (31.36%)
Total de bacterias que solubilizaron fosfato bi y tricálcico
Total de Bacterias 421
Solubilización de fosfato bicálcico Solubilización de fosfato tricálcico 0 cm 0.05 a 0.45 cm 0.5 a 1.8 cm 0 cm 0.05 a 0.45 cm 0.5 a 1.8 cm 241 (57.24%) 102 (24.23%) 78 (18.53%) 204 (48.46%) 160 (38%) 57 (13.54%)
Producción de AIA
Solubilizción de fosfatos Bicálcico (0.5 a 1.8 cm)
Tricálcico (0.5 a 2 cm)
20 a 70 µg/ml
Cepas
Bacillus
19 (4.51%)
0 (0%)
0 (0%)
Actinomicetos
23 (5.46%)
1 (0.24%)
1 (0.24%)
Pseudomonas
54 (12.83%)
32 (7.6%)
29 (6.89%)
diazótrofos
36 (8.55%)
35 (8.31%)
29 (6.89%)
Total cepas aisladas
421
Interacciones microbianas in vitro de cepas con potencial PGPR 5Aa Ø
53Aa
Crec Halo
Ø
66Aa
Crec Halo
Ø
B29a
Crec Halo
Ø
Ps 31a
Crec Halo
Ø
Crec
Halo
5Ab
0.85
++
-
0.8
+
-
0,75
+
-
0.8
+
-
0.8
+
-
53Ab
0.8
+
-
0.8
+
-
0,85
+
-
0.9
++
-
0.85
++
-
66Ab
0.9
++
-
0.8
+
-
0,75
+
-
0.95
++
-
0.85
++
-
B29b
0.95
++
-
1.1
+++
1.1
1
+++
-
0.95
++
-
0.95
+++
-
Ps 31b
0.8
+
-
0.9
++
0.9
1
+++
1
0.85
+
0.85
0.9
++
0.9
Ps 42b
1.55
+++
-
1.05 +++ 1.05
1,6
+++
-
1.05 +++ 1.05
1
+++
1
Ps 88b
0.95
++
0.95
1.1
+++
1.1
0,9
++
0.9
0.8
+
0.8
0.95
+++
0.95
12 Actc
0.9
++
-
0.9
++
-
0,85
+
-
0.75
+
1.4
0.8
+
-
5 Actc
0.9
++
-
0.95 +++
-
0,85
+
-
0.9
++
1.5
0.85
++
-
Interacciones microbianas in vitro de cepas con potencial PGPR Ps 42a Ø
Ps 88a
Crec. Halo
12 Acta
5 Acta
Ø
Crec.
Halo
Ø
Crec.
Halo
Ø
Crec.
Halo
5Ab
0.75
+
-
0.85
++
-
0.8
+
-
1.05
+++
-
53Ab
0.75
+
-
0.8
+
-
0.8
+
-
0.85
+
-
66Ab
0.8
+
-
0.9
++
-
0.7
+
-
0.8
+
-
B29b
0.8
+
-
0.9
++
-
0.75
+
-
0.85
+
-
Ps 31b
0.85
++
-
0.8
+
-
0.7
+
0.7
0.9
++
0.9
Ps 42b
0.8
+
0.8
0.8
+
-
0.7
+
-
0.9
++
0.9
Ps 88b
0.9
++
0.9
0.9
++
0.9
0.75
+
1.3
0.9
++
0.9
12 Actc
0.7
+
-
0.8
+
-
0.8
+
-
0.9
++
2
5 Actc
0.65
+
-
0.8
+
-
0.75
+
0.75
0.9
++
-
Pruebas de germinación en maca Porcentaje de germinación in vitro a los 8 días
100
Germinación usando bacterias aisladas de otros cultivos altoandinos (8 a 10°C)
80 60 40 20 0
A3M2
pf
pp
A16M2
B4
B15
st5
P2N3
H2O
46
56
48
44
66
45
58
87
40
Tratamientos
Porcentaje de germinación in vitro a los 2 días
Germinación usando bacterias aisladas del cultivo de maca (15 a 18°C)
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Porcentaje de germinación
Porcentaje de germinación
120
B15
Ps42
Control
14A
B11
6A
B2
P2N3
Ps31
5A
Act. M2/4
40
72
29
33
22
43
50
62
59
71
70
Tratamiento
Pruebas de germinación con microorganismos
ActM2/-4
Control
Porcentaje de germinación interacciones bacterianas
Porcentaje de germinación
Porcentaje de germinación in vitro a los 2 dias 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Cepas probadas
Emergencia de maca usando bacterias aisladas de otros cultivos altoandinos (8 a 10°C)
Porcentaje de emergencia de "maca" a los 15 días
Porcentaje de emergencia
100 90
80 70 60
50 40 30 20
10 0
N+
A3M2
pf
pp
A16M2
B4
B15
st5
N-
P2N3
H2O
25.00
20.00
25.00
16.67
22.50
25.00
23.33
30.00
27.50
67.50
12.50
Tratamientos
Peso seco aéreo de plantas de maca de 3 meses Condiciones de laboratorio (15 a 18°C)
Peso seco aéreo 0.05 0.045 0.04 0.035 0.03 0.025 0.02 0.015 0.01 0.005 0
Sistemas a. Jarras leonard modificadas b. bandejas c. tapers a
b
c
Plántulas de maca al mes de sembradas 19°C
arena
Tierra de Junín
Perfiles BOX - PCR de las cepas probadas como PGPRs
M. Marcador de ADN 1 Kb (Axygen), B. Blanco, 1. B2, 2. B11, 3. B15, 4. Ps31, 5. Ps42, 6. Ps 46, 7. 5A, 8: 6A, 9. 14A
M. Marcador de ADN 1 Kb (Axygen), B. Blanco, 1. Ps31, 2. Ps61, 3 Ps80, 4. Ps87, 5. Ps88, 6. 13Bac, 7. 4Bac, 8. 29Bac, 9. 25Bac, 10. 50A, 11. 53A, 12. 66A, 13. 64A
Árbol filogenético de secuencias del gen 16S rDNA. El método de reconstrucción filogenética fue Neighbour-joining (NJ) y las distancias fueron calculadas de acuerdo al método de Kimura-2 parámetros. Los valores en los puntos de ramificación indican un soporte de bootstrap mayor al 60% (1000 pseudo-replicas). Los aislados de rizósfera de maca se muestran en negrita.
Ps0 Ps88 Ps61 Ps87 Pseudomonas costantinii CFBP 5705T P. azotoformans IAM1603T P. poae LMG 21465T P. extremorientalis KMM 3447T P. salomonii CFBP 2022T
97
P. proteolytica CMS 64T P. fluorescens IAM 12022T 98
P. Antarctica CMS 35T 67
P. reinekei MT1T
62
100
P. putida IAM 1236T P. rhizosphaerae IH5T
88
P. vancouverensis DhA-51T Ps42 Ps46 P. aeruginosa DSM 50071T. Stenotrophomonas maltophilia LMG 981T
88
S. acidaminiphila AMX 19T S. maltophilia IAM 12423T
100
Ps31 100
S. rhizophila e-p10T Rhizobium tropici CIAT 899T
0.01
Árbol filogenético de secuencias del gen 16S rDNA. El método de reconstrucción filogenética fue Neighbour-joining (NJ) y las distancias fueron calculadas de acuerdo al método de Kimura-2 parámetros. Los valores en los puntos de ramificación indican un soporte de bootstrap mayor al 60% (1000 pseudo-replicas). Los aislados de pseudomonaceae de rizósfera de maca se muestran en negrita.
Bacillus drentensis (T) type strain: ... Bacillus b ataviensis (T) type strain:... Bacillus soli (T) type strain: LMG 21...
76
Bacillus vireti (T) LMG 21834.
89 90
Bacillus novalis (T) type strain: LMG...
95
Bacillus niacini (T) IFO15566. 68
Bacillus pocheonensis (T) Gsoil 420. Bacillus foraminis (T) type strain: C... Bacillus siralis (T) 171544. Bacillus circulans (T).
73
Bacillus asahii (T) MA001. Bacillus psychrosaccharolyticus (T) A... 77
79
Bacillus sp. LMG 20238 (T). Brevib acterium frigoritolerans (T) ty...
98
Bacillus simplex (T) DSM 1321T. Bacillus b utanolivorans (T) K9.
98
Bac29 78
Bac25 B.megaterium IAM1341I8 D16273 Bacillus litoralis (T) SW-211. Bacillus halmapalus (T) DSM 8723.
99
Bacillus horikoshii (T) DSM8719. Bacillus luciferensis (T) LMG 18422. Bacillus cereus ATCC 14579 (T). 61
Bacillus sub tilis sub sp. sub tilis (T)... Bacillus marisflavi (T) TF-11.
87
Bacillus aquimaris (T) TF-12.
93 97
Bacillus vietnamensis (T) 15-1. Paenib acillus polymyxa IAM13419(t)
0.01
Árbol filogenético de secuencias del gen 16S rDNA. El método de reconstrucción filogenética fue Neighbour-joining (NJ) y las distancias fueron calculadas de acuerdo al método de Kimura-2 parámetros. Los valores en los puntos de ramificación indican un soporte de bootstrap mayor al 60% (1000 pseudo-replicas). Los aislados de Bacillus de rizósfera de maca se muestran en negrita.
Contenido de nutrientes y metales pesados (parte aérea de la maca)
Muestra
N
P
K
Ca
Mg
S
Na
Zn
Cu
Mn
Fe
B
Mo
Pb
Cd
Cr
C1 P9
3.7
0.2
1.5
1.79
0.165
0.33
0.2
77
6.5
102
582
239
3.05
17
0.5
0
C1 P12
4.5
0.2
1.8
1.85
0.17
0.39
0.1
97
10.5
119
861
149
4.88
42
0
0
C2 P2-P14
4.3
0.3
1.8
2.35
0.245
0.46
0.2
92
13
130
1133
177
2.35
21
0.8
0
C2 P15-P16
4.4
0.3
2
2.39
0.25
0.45
0.2
63
10
129
797
197
1.9
20
0
0
Contenido de nutrientes y metales pesados (sistema radicular maca)
Muestra
N
P
K
Ca
Mg
S
Na
Zn
Cu
Mn
Fe
B
Mo
Pb
Cd
Cr
C1 P9
2.44
0.21
1.23
0.64
0.08
0.33
0.17
45
7
62
2338
126
1.90
5.25
0.50
0.50
C1 P12
2.17
0.24
1.29
0.59
0.08
0.40
0.16
53
7
35
1395
137
2.28
2.00
0.00
0.00
C2 P2P14
2.52
0.28
1.28
0.65
0.10
0.42
0.16
48
10
52
1470
165
2.10
6.25
0.00
0.25
C2 P15P16
2.50
0.30
1.49
0.51
0.09
0.35
0.18
29
6
27
708
146
1.05
2.00
0.00
0.00
Cuantificación glucosinolatos siete meses después de la siembra
Muestra
Ecotipo
Concentración de glucosinolatos µmol equi. de sinigrin/g ms
RC1P3
amarilla
9.89 ± 0.43
RC1P13
amarilla
16.99 ± 0.51
RC1P10
blanca
35.17 ± 3.39
RC2P1
morada
43.07 ± 0.51
RC2P9
morada
39.49 ± 3.81
RC2P13
Morada
25.49 ± 4.10
RC2P10
blanca
38.69 5.49
Cuantificación de Glucosinolatos
Morfotipos de plantas de maca muestreados
Galpón Condorín
Agomachay
Determinación taxonómica de la planta: Lepidium meyenii Walpers
Flores de maca
semillas de maca
Planta de maca
CAPACITACIÓN Y DIFUSIÓN 1.- Taller biofertilizantes para la agricultura de Iberoamérica en el siglo XXI Zúñiga, D. 2009. Presente y futuro de los biofertilizantes en Iberoamérica: Perú. Taller de Biofertilizantes para la Agricultura de Iberoamérica en el sigo XXI. Red Biofag-CYTED. 4 mayo. La Habana, Cuba.
2.- Presentación de resúmenes y pósters Katty Ogata*, Carlos García, Wendy Pérez, Mitsuyo García, Jessica Tolentino, Carlos Soto & Doris Zúñiga. 2009. MICROFLORA Y ACTIVIDAD MICROBIANA DE LA RIZÓSFERA DEL CULTIVO DE “MACA” (Lepidium meyenii Walpers) EN LA MESETA DEL BOMBÓN – JUNÍN. XXIV RELAR IIBEMPA. La Habana, Cuba. 4-8 Mayo. Katty Ogata, César La Torre, Wendy Pérez & Doris Zúñiga. 2009. EFECTO DE DIFERENTES BACTERIAS PROMOTORAS DE CRECIMIENTO (PGPR) EN LA GERMINACIÓN Y EMERGENCIA DE PLANTULAS DE “MACA” (Lepidium meyenii Walpers). XXIV RELAR IIBEMPA. La Habana, Cuba. 4-8 Mayo.
Capacitación de asistentes de investigación de LEMYB en la XXIV RELAR y I IBEMPA, La Habana Cuba.
Grupo peruano con investigadores de otros países
Taller: Importancia de las PGPR en los cultivos orgánicos nativos Junín, 2009
Katty Ogata y Carlos García con los agricultores
CONCLUSIONES Los suelos de Junín son franco arenosos, con alto contenido de materia orgánica, pH ácidos, con disponibilidad de P y K, sin problemas de carbonatos y CIC variable. Los contenidos de Cd, Cr están por debajo de los valores permitidos mientras que si presenta problemas de contaminación por Pb. Las poblaciones de bacterias psicrófilas fueron mayores en la rizósfera de maca que en los suelos sin cultivo. Los valores mínimos de las poblaciones aerobias estuvieron en el orden 106, diazótrofos 106, hongos 104, Bacillus 104, actinomicetos 103 y los psicrófilos aerobio104. Conforme la temperatura del ambiente baja, las poblaciones de pseudomonas, actinomicetos y psicrófilos se incrementaron. De 120 de cepas bacterianas (diazótrofos, pseudomonas, actinomicetos y bacillus), todas produjeron AIA en diferentes niveles. Sin embargo, 6 cepas de diazótrofos destacaron por sus niveles de mayor producción.
De un total de 421 cepas aisladas se encontró que 132 (31%) produjeron de 20 a 70 µg/ml de AIA. En la prueba de solubilización de fosfatos 68 cepas de las 421 cepas aisladas presentaron halos de 0.5 a 1.8 cm cuando se utilizó el medio NBRIP – bicálcico y 59 cepas presentaron halos de solubilización entre 0.5 y 2 cm el NBRIP – tricálcico Cinco cepas aisladas de rizósfera de maca (bacillus, pseudomona, actinomicetos y diazótrofos) (de 11 seleccionadas) incrementaron significativamente el % G semillas de maca.
Dos cepas de rizobios y un Bacillus (aisladas de tara, haba y papa) incrementaron significativamente los porcentajes de germinación de semillas de maca. Cuando se probó la emergencia sólo la cepa de rizobio P2N3 incrementó significativamente la emergencia de este cultivo. Las cepas de pseudomona Ps42, actinomiceto 5Act y las interacciones actino-diazótrofo: 5Act+5A, diazótrofo-pseudomona 5A+Ps42 presentaron diferencias significativas respecto al control.
Se encontró que una de las cepas (Ps31) corresponde a una Stenotrophomonas rhizophila. Las demás pseudomonas caracterizadas pertenecen al grupo de P. fluorescens y P. putida Se encontraron también bacterias relacionadas con Rahnella aquatilis y Pantoea agglomerans; y dos cepas de Bacillus emparentadas con B. butanolivorans El contenido de nitrógeno, potasio, calcio y magnesio en la parte aérea fue mayor que en la parte radicular. En cuanto al contenido de metales pesados, la parte aérea tiene casi cinco veces más de contenido de plomo que la parte radicular; mientras que el contenido de cromo fue mayor en la parte radicular. No se observó ninguna influencia del tipo de suelo en la concentración de glucosinolatos obtenidos. Por otro lado, se encontró que las macas moradas presentaron una mayor cantidad de este principio activo en comparación con las macas amarillas.
De los glucosinolatos analizados se encontró un mayor contenido de Glucotropaeolin (benzylglucosinolato) lo que corresponde a lo encontrado en la bibliografía tanto en hipocotilo como en hojas.
De todos los sistemas probados, substratos y temperaturas ambientales, las jarras leonard, el suelo de Junín y condiciones de temperaturas frías resultaron mejor en la emergencia, crecimiento y desarrollo de plántulas de maca.
Respecto a la difusión y capacitación •Se presentaron 3 resúmenes y 2 pósters a la XXIV RELAR - I IBEMPA. La Habana Cuba. 2009. •Una ponencia en Conference 16 of the FAO Biotechnoloogy Forum, Entitled “Learning from the past: Successes and failures with agricultural biotechnologies in developing countries over the last 20 years”. 8 junio-8 Julio 2009. •Existe un gran interés por parte de los agricultores y de la empresa de adquirir los conocimientos en lo que es agricultura orgánica, Utilizar las bacterias promotoras de Crecimiento vegetal y poner en práctica la inoculación con estos microorganismos en los cultivos nativos Altoandinos.
MUCHAS GRACIAS !!
