Caracterización y selección de bacterias-Doris Zuñiga

Caracterización y selección de bacterias promotoras de crecimiento en el cultivo orgánico de maca(Lepidium meyenii Walpers) como herramienta Biotecnológica para mejorar su calidad productiva Proyecto Perú Biodiverso – GTZ - CONCYTEC Dra. Doris Zúñiga Dávila Email: [email protected] Web: www.lamolina.edu.pe/lmt Red biofag: www.biofag.org Universidad Nacional Agraria La Molina Mayo 2010

LUGAR DE EJECUCIÓN: Campesina San Pedro de Cajas Provincia de Tarma – Departamento de Junín Ensayos de laboratorio: Laboratorio de Ecología Microbiana y Biotecnología Marino Tabusso, Dpto. Biología UNALM

EQUIPO DE INVESTIGACIÓN Biol. Katty Ogata

Bach. Minoru Matsubara Bach. Mitsuyo García Bach. Jessica Tolentino Wendy Pérez Bach. Luder Ramos Colaboradores

Dr. Carlos Samaniego, Ecoandino S.A.C Dr. David Campos, Instituto de Biotecnología, UNALM

Institución Internacional Dra. Esperanza martínez, CCG Cuernavaca, UNAM-Mexico

Lugares de muestreo y condición del campo

Lugar

Suelo

Condición de campo

muestras

1er año de siembra

M1 M2 M3 M4

Galpón Condorín (MC1)

Rizosférico

Blanco (C1)

Sin cultivo

M1 M2

Rizosférico

M1 M2 M3 M4

Agomachay (MC2)

2do año de cosecha Blanco (C2)

Sin cultivo

Condorín (D3)

Sin cultivo

M1 M2 10 años de descanso

M1 M2

METODOLOGÍA

Análisis Microbiológicos • Recuento de bacterias aerobias mesófilas viables (ICMSF, 1998) • Recuento de bacterias aerobias psicrófilas (ICMSF, 1998) • Recuento de esporogénicos mesófilos aerobios (APHA, 1992) • Recuento de mohos y levaduras (ICMSF, 1998) • Recuento de actinomicetos (APHA AWWA WEF – 1998) • Enumeración de Pseudomonas (APHA AWWA WEF – 1998) • Enumeración de bacterias fijadoras de nitrógeno de vida libre (Burges, 1960)

Parámetros de crecimiento, tamaño, P Fresco, P Seco, tasa de crecimiento

Plantas Bioquímica: glucosinolatos Contenido macronutrientes Contenido micronutrientes Contenido de metales pesados Caracterización fisico quimica de suelos: pH, M.O, CE, Textura. Contenido de macronutrientes Contenido de micronutrientes

Suelo Contenido metales pesados

Preparación de muestras y diluciones

1 mL

1 mL

10 mL/g 9 mL AP 0.1%

9 mL AP 0.1%

Muestra

10-1

90 mL AP 0.1%

10-2

10-3

Medios de cultivo y condiciones de incubación para la determinación de la microflora analizada Análisis Aerobias mesófilas Hongos totales

Actinomicetos

Bacillus

(80°C)

Diluciones -4, -5, -6

-2, -3, -4

-1, -2, -3, -4 -4, -5 y -6

Medio de cultivo Agar Plate Count OGY*

Agar Almidón caseína**

AgarTriptona glucosa

Temperatura y tiempo de incubación 28°C por 48 horas

22°C por 3 - 5 días.

28°C por 6 - 7 días. 28°C por 48 horas

Diazótrofos de vida libre

-2, -3, -4, -5, -6, 7, -8

Caldo mineral sin nitrógeno

28°C por 7 - 10 días

Pseudomonas

-2, -3, -4, -5, -6, -7

Caldo Asparagina

28°C por 7 - 10 días

*Suplementado con Oxitetraciclina al 0.1% **Suplementado con Fluconazol al 0.25%

Medición de la actividad microbiana Pesar 25g de suelo tamizado Adicionar 0.5mL de sol. glucosa 25%

Vial con 3.5mL NaOH 1N

Incubar a 28°C por 24 horas

Trasvasar el contenido del vial a un matraz

HCl 0.25N Adicionar 3.5mL de BaCl2 + fenoftaleína

Titular el NaOH no combinado (hasta el viraje de rosa grosella a transparente)

Calcular la tasa de CO2 producido: mg CO2/g*h

RESULTADOS Y DISCUSIONES Lugar : San Pedro de Cajas (4100 msnm) Temperatura registrada durante el muestreo : 9 y 10°C

Temperatura y Humedad relativa del ambiente

Campo muestreado

Característica

Galpón Condorín (C1)

Primer año de siembra

Agomachay (C2)

Segundo año de cosecha

Condorín (D1)

10 años de descanso

Pampa Cima (D2)

4 años de descanso

Pampa Cima (D3)

1 año de descanso

LOCALIZACIÓN 18L0401914 UTM8755920 18L0401914 UTM8755942 18L0399212 UTM8754983 18L0398260 UTM8754213 18L0398288 UTM8754085

T (ºC)

%H

9.42

60.8

10

53.4

9.04

65.4

10.64

50.4

10.88

39.2

Características fisicoquímicas de los suelos y rizósfera PRIMER MUESTREO Parámetros

MC1

C1

MC2

C2

D3

D2

D1

pH

4.25

4.27

5.08

5.08

5.26

4.59

4.48

C.E.

0.57

0.26

0.5

1.44

0.48

0.38

0.6

CaCO3

0.00

0.00

0.00

0.00

0.00

0.00

0.00

M.O.

4.84

4.4

6.4

11.94

8.1

5.5

4.7

P

67.9

60.6

61.6

64.1

61.3

65.2

65.9

K

215

176

158

554.4

210

161

231

Clase Textural

Fr.A.

Fr. A.

Fr.A.

Fr.A.

Fr.A.

Fr.A.

Fr.A.

CIC

14.9

15.04

27.52

23.68

8.43

8.43

8.43

Características fisicoquímicas de los suelos, San Pedro de Cajas

TERCER MUESTREO Parámetros

C1 1 año Siem.

C2 2 año cosecha

pH

5.2

5.21

C.E.

0.51

0.24

CaCO3

0.00

0.00

M.O.

7.8

8.0

P

36.7

56.1

K

162

196

Clase Textural

Fr. A.

Fr.A.

CIC

18.72

24.00

Poblaciones microbianas del suelo y de la rizósfera de maca – Junín PRIMER MUESTREO Bacterias m esófilas

Ps ic r ófilos

Suelos aer obios * Bac illus * Mohos * Ac tinomic etos * Diaz ótr ofos ** Ps eudomonas ** C1 C2 MC1 MC2 D1 D2 D3

mg CO 2/ ( gs s * h)

aer obios

6.18 7.18 5.69 6.99

4.74 4.49 4.49 4.84

5.08 5.46 4.11 4.88

5.08 4.91 4.32 5.04

5.30 6.06 4.95 6.20

3.95 4.93 6.04 6.25

0.026 0.046 0.030 0.055

4.903 7.490 6.591 7.157

6.41 5.41 5.90

4.52 4.81 4.81

5.26 5.28 5.32

5.78 4.93 5.30

4.95 5.18 5.30

5.38 4.38 3.38

0.034 0.020 0.032

5.903 6.121 6.182

* Log ufc/g ** NMP/g

Mohos y levaduras

Esporulados mesófilos aerobios

Población microbiana de suelos de Junín del primer muestreo

9 8 7 6 5 4 3 2 1 0

aerobios mohos y levaduras bacillus psicrófilos actinomicetos

C1

MC1

C2

MC2

D1

D2

D3

Suelos muestreados

Poblaciones microbianas de Pseudomonas y diazótrofos en el suelo y rizófera del cultivo de maca 8 7 6

log (NMP/g)

log (ufc/g)

Poblaciones microbianas del suelo y rizósfera del cultivo de maca

5

pseudomonas

4

Azotobacter

3 2 1 0 C1

MC1

C2

MC2

D1

Suelos muestreados

D2

D3

Poblaciones microbianas del suelo y de la rizósfera de maca - Junín

SEGUNDO MUESTREO Bac t erias mes óf ilas

Bac t erias ps ic róf ilas

Suelos

aerobios

Bac illus

Ac t inomic et os

Mohos

Diaz ót rof os

Ps eudomona

aerobios

C1

6.76 6.43 6.42 6.30 6.68

5.04 4.67 4.86 4.69 4.89

4.13 3.52 4.77 4.28 4.29

5.48 5.64 5.00 5.40 3.89

5.64 6.06 7.12 5.94 6.33

2.89 4.38 5.03 5.44 6.03

4.66 6.22 6.84 6.44 6.30

C2 MC1 MC2 D3

Bac illus Mohos

4.75 4.60 5.01 4.97 5.17

5.20 5.93 5.20 5.49 4.88

Ac t . Mic robiana mg CO2 res p/ (g s uelo* h) 0.0302 0.0447 0.0354 0.0446 0.0383

Población microbiana de suelos de Junín del segundo muestreo Poblaciones microbianas del suelo y rizósfera del cultivo de "maca" 8

7

6

Bacillus Psf M y L Psf. Aerobios Psf MyL Bacillus

4

Aerobios Actinomicetos

3

2

1

0

C1

MC1

C2

MC2

D3

Suelos muestreados

Poblaciones Pseudomonas y diazótrofos del cultivo de "maca" 9 8 7 log (NMP/g)

log (ufc/g)

5

6 5

Pseudomonas

4

Diazotrofos

3 2

Mc1 y Mc2, rizósferas maca

1 0 C1

MC1

C2 suelos muestreados

MC2

D3

Variación de las Poblaciones microbianas en Galpón Condorín log (ufc/g) vs tiempo (días) Galpón Condorín (C1)

8 aerobios

log (ufc/g)

7 6

Bacillus

5 mohos

4 3

actinomicetos

2 1

aerobios psf

0 0

20

40

60

80

100

120

140

tiempo (días)

log (NMP/g) vs tiempo (días) Galpón Condorín (C1)

Pseudomonas 6

5

log (NMP/g)

DVL

4

diazótrofos

3

2

Pseudomonas

1

0 0

20

40

60

tiempo (días)

80

100

120

140

Variación de las Poblaciones microbianas en Agomachay log (ufc/g) vs tiempo (días) Agomachay (C2)

8 6

aerobios

5

Bacillus

4

mohos

3

actinomicetos

2

aerobios psf

1 0 0

20

40

60

80

100

120

140

tiempo (días)

log (NMP/g) vs tiempo (días) Galpón Condorín (C1)

6

log (poblac NMP/g)

log (ufc/g)

7

5

4 diazótrofos

3

Pseudomonas

2 1 0 0

20

40

60

80

tiempo (días)

100

120

140

Producción de Ácido Indolacéticos

•Bacterias diazótrofas mostraron altos niveles de AIA y de solubilización de fosfatos en comparación a los otros grupos bacterianos

Reacción oxidativa con el reactivo de Salkowsky

Solubilización de Fosfato bicálcico y tricálcico

b a

Bacterias relacionadas a la rizósfera de diferentes cultivos

Bacteria Pantoea agglomerans Rahnella aquatilis Stenetrophomonas rhizophila

Cultivos trigo trigo, maíz papa, colza

Total de bacterias que produjeron Ácido indolacético

Total de bacterias 421

Producción AIA < 20 a 70 µg/ml 0 µg/ml 20 a 70 µg/ml 246 (58.43%) 43 (10.21%) 132 (31.36%)

Total de bacterias que solubilizaron fosfato bi y tricálcico

Total de Bacterias 421

Solubilización de fosfato bicálcico Solubilización de fosfato tricálcico 0 cm 0.05 a 0.45 cm 0.5 a 1.8 cm 0 cm 0.05 a 0.45 cm 0.5 a 1.8 cm 241 (57.24%) 102 (24.23%) 78 (18.53%) 204 (48.46%) 160 (38%) 57 (13.54%)

Producción de AIA

Solubilizción de fosfatos Bicálcico (0.5 a 1.8 cm)

Tricálcico (0.5 a 2 cm)

20 a 70 µg/ml

Cepas

Bacillus

19 (4.51%)

0 (0%)

0 (0%)

Actinomicetos

23 (5.46%)

1 (0.24%)

1 (0.24%)

Pseudomonas

54 (12.83%)

32 (7.6%)

29 (6.89%)

diazótrofos

36 (8.55%)

35 (8.31%)

29 (6.89%)

Total cepas aisladas

421

Interacciones microbianas in vitro de cepas con potencial PGPR 5Aa Ø

53Aa

Crec Halo

Ø

66Aa

Crec Halo

Ø

B29a

Crec Halo

Ø

Ps 31a

Crec Halo

Ø

Crec

Halo

5Ab

0.85

++

-

0.8

+

-

0,75

+

-

0.8

+

-

0.8

+

-

53Ab

0.8

+

-

0.8

+

-

0,85

+

-

0.9

++

-

0.85

++

-

66Ab

0.9

++

-

0.8

+

-

0,75

+

-

0.95

++

-

0.85

++

-

B29b

0.95

++

-

1.1

+++

1.1

1

+++

-

0.95

++

-

0.95

+++

-

Ps 31b

0.8

+

-

0.9

++

0.9

1

+++

1

0.85

+

0.85

0.9

++

0.9

Ps 42b

1.55

+++

-

1.05 +++ 1.05

1,6

+++

-

1.05 +++ 1.05

1

+++

1

Ps 88b

0.95

++

0.95

1.1

+++

1.1

0,9

++

0.9

0.8

+

0.8

0.95

+++

0.95

12 Actc

0.9

++

-

0.9

++

-

0,85

+

-

0.75

+

1.4

0.8

+

-

5 Actc

0.9

++

-

0.95 +++

-

0,85

+

-

0.9

++

1.5

0.85

++

-

Interacciones microbianas in vitro de cepas con potencial PGPR Ps 42a Ø

Ps 88a

Crec. Halo

12 Acta

5 Acta

Ø

Crec.

Halo

Ø

Crec.

Halo

Ø

Crec.

Halo

5Ab

0.75

+

-

0.85

++

-

0.8

+

-

1.05

+++

-

53Ab

0.75

+

-

0.8

+

-

0.8

+

-

0.85

+

-

66Ab

0.8

+

-

0.9

++

-

0.7

+

-

0.8

+

-

B29b

0.8

+

-

0.9

++

-

0.75

+

-

0.85

+

-

Ps 31b

0.85

++

-

0.8

+

-

0.7

+

0.7

0.9

++

0.9

Ps 42b

0.8

+

0.8

0.8

+

-

0.7

+

-

0.9

++

0.9

Ps 88b

0.9

++

0.9

0.9

++

0.9

0.75

+

1.3

0.9

++

0.9

12 Actc

0.7

+

-

0.8

+

-

0.8

+

-

0.9

++

2

5 Actc

0.65

+

-

0.8

+

-

0.75

+

0.75

0.9

++

-

Pruebas de germinación en maca Porcentaje de germinación in vitro a los 8 días

100

Germinación usando bacterias aisladas de otros cultivos altoandinos (8 a 10°C)

80 60 40 20 0

A3M2

pf

pp

A16M2

B4

B15

st5

P2N3

H2O

46

56

48

44

66

45

58

87

40

Tratamientos

Porcentaje de germinación in vitro a los 2 días

Germinación usando bacterias aisladas del cultivo de maca (15 a 18°C)

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Porcentaje de germinación

Porcentaje de germinación

120

B15

Ps42

Control

14A

B11

6A

B2

P2N3

Ps31

5A

Act. M2/4

40

72

29

33

22

43

50

62

59

71

70

Tratamiento

Pruebas de germinación con microorganismos

ActM2/-4

Control

Porcentaje de germinación interacciones bacterianas

Porcentaje de germinación

Porcentaje de germinación in vitro a los 2 dias 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Cepas probadas

Emergencia de maca usando bacterias aisladas de otros cultivos altoandinos (8 a 10°C)

Porcentaje de emergencia de "maca" a los 15 días

Porcentaje de emergencia

100 90

80 70 60

50 40 30 20

10 0

N+

A3M2

pf

pp

A16M2

B4

B15

st5

N-

P2N3

H2O

25.00

20.00

25.00

16.67

22.50

25.00

23.33

30.00

27.50

67.50

12.50

Tratamientos

Peso seco aéreo de plantas de maca de 3 meses Condiciones de laboratorio (15 a 18°C)

Peso seco aéreo 0.05 0.045 0.04 0.035 0.03 0.025 0.02 0.015 0.01 0.005 0

Sistemas a. Jarras leonard modificadas b. bandejas c. tapers a

b

c

Plántulas de maca al mes de sembradas 19°C

arena

Tierra de Junín

Perfiles BOX - PCR de las cepas probadas como PGPRs

M. Marcador de ADN 1 Kb (Axygen), B. Blanco, 1. B2, 2. B11, 3. B15, 4. Ps31, 5. Ps42, 6. Ps 46, 7. 5A, 8: 6A, 9. 14A

M. Marcador de ADN 1 Kb (Axygen), B. Blanco, 1. Ps31, 2. Ps61, 3 Ps80, 4. Ps87, 5. Ps88, 6. 13Bac, 7. 4Bac, 8. 29Bac, 9. 25Bac, 10. 50A, 11. 53A, 12. 66A, 13. 64A

Árbol filogenético de secuencias del gen 16S rDNA. El método de reconstrucción filogenética fue Neighbour-joining (NJ) y las distancias fueron calculadas de acuerdo al método de Kimura-2 parámetros. Los valores en los puntos de ramificación indican un soporte de bootstrap mayor al 60% (1000 pseudo-replicas). Los aislados de rizósfera de maca se muestran en negrita.

Ps0 Ps88 Ps61 Ps87 Pseudomonas costantinii CFBP 5705T P. azotoformans IAM1603T P. poae LMG 21465T P. extremorientalis KMM 3447T P. salomonii CFBP 2022T

97

P. proteolytica CMS 64T P. fluorescens IAM 12022T 98

P. Antarctica CMS 35T 67

P. reinekei MT1T

62

100

P. putida IAM 1236T P. rhizosphaerae IH5T

88

P. vancouverensis DhA-51T Ps42 Ps46 P. aeruginosa DSM 50071T. Stenotrophomonas maltophilia LMG 981T

88

S. acidaminiphila AMX 19T S. maltophilia IAM 12423T

100

Ps31 100

S. rhizophila e-p10T Rhizobium tropici CIAT 899T

0.01

Árbol filogenético de secuencias del gen 16S rDNA. El método de reconstrucción filogenética fue Neighbour-joining (NJ) y las distancias fueron calculadas de acuerdo al método de Kimura-2 parámetros. Los valores en los puntos de ramificación indican un soporte de bootstrap mayor al 60% (1000 pseudo-replicas). Los aislados de pseudomonaceae de rizósfera de maca se muestran en negrita.

Bacillus drentensis (T) type strain: ... Bacillus b ataviensis (T) type strain:... Bacillus soli (T) type strain: LMG 21...

76

Bacillus vireti (T) LMG 21834.

89 90

Bacillus novalis (T) type strain: LMG...

95

Bacillus niacini (T) IFO15566. 68

Bacillus pocheonensis (T) Gsoil 420. Bacillus foraminis (T) type strain: C... Bacillus siralis (T) 171544. Bacillus circulans (T).

73

Bacillus asahii (T) MA001. Bacillus psychrosaccharolyticus (T) A... 77

79

Bacillus sp. LMG 20238 (T). Brevib acterium frigoritolerans (T) ty...

98

Bacillus simplex (T) DSM 1321T. Bacillus b utanolivorans (T) K9.

98

Bac29 78

Bac25 B.megaterium IAM1341I8 D16273 Bacillus litoralis (T) SW-211. Bacillus halmapalus (T) DSM 8723.

99

Bacillus horikoshii (T) DSM8719. Bacillus luciferensis (T) LMG 18422. Bacillus cereus ATCC 14579 (T). 61

Bacillus sub tilis sub sp. sub tilis (T)... Bacillus marisflavi (T) TF-11.

87

Bacillus aquimaris (T) TF-12.

93 97

Bacillus vietnamensis (T) 15-1. Paenib acillus polymyxa IAM13419(t)

0.01

Árbol filogenético de secuencias del gen 16S rDNA. El método de reconstrucción filogenética fue Neighbour-joining (NJ) y las distancias fueron calculadas de acuerdo al método de Kimura-2 parámetros. Los valores en los puntos de ramificación indican un soporte de bootstrap mayor al 60% (1000 pseudo-replicas). Los aislados de Bacillus de rizósfera de maca se muestran en negrita.

Contenido de nutrientes y metales pesados (parte aérea de la maca)

Muestra

N

P

K

Ca

Mg

S

Na

Zn

Cu

Mn

Fe

B

Mo

Pb

Cd

Cr

C1 P9

3.7

0.2

1.5

1.79

0.165

0.33

0.2

77

6.5

102

582

239

3.05

17

0.5

0

C1 P12

4.5

0.2

1.8

1.85

0.17

0.39

0.1

97

10.5

119

861

149

4.88

42

0

0

C2 P2-P14

4.3

0.3

1.8

2.35

0.245

0.46

0.2

92

13

130

1133

177

2.35

21

0.8

0

C2 P15-P16

4.4

0.3

2

2.39

0.25

0.45

0.2

63

10

129

797

197

1.9

20

0

0

Contenido de nutrientes y metales pesados (sistema radicular maca)

Muestra

N

P

K

Ca

Mg

S

Na

Zn

Cu

Mn

Fe

B

Mo

Pb

Cd

Cr

C1 P9

2.44

0.21

1.23

0.64

0.08

0.33

0.17

45

7

62

2338

126

1.90

5.25

0.50

0.50

C1 P12

2.17

0.24

1.29

0.59

0.08

0.40

0.16

53

7

35

1395

137

2.28

2.00

0.00

0.00

C2 P2P14

2.52

0.28

1.28

0.65

0.10

0.42

0.16

48

10

52

1470

165

2.10

6.25

0.00

0.25

C2 P15P16

2.50

0.30

1.49

0.51

0.09

0.35

0.18

29

6

27

708

146

1.05

2.00

0.00

0.00

Cuantificación glucosinolatos siete meses después de la siembra

Muestra

Ecotipo

Concentración de glucosinolatos µmol equi. de sinigrin/g ms

RC1P3

amarilla

9.89 ± 0.43

RC1P13

amarilla

16.99 ± 0.51

RC1P10

blanca

35.17 ± 3.39

RC2P1

morada

43.07 ± 0.51

RC2P9

morada

39.49 ± 3.81

RC2P13

Morada

25.49 ± 4.10

RC2P10

blanca

38.69 5.49

Cuantificación de Glucosinolatos

Morfotipos de plantas de maca muestreados

Galpón Condorín

Agomachay

Determinación taxonómica de la planta: Lepidium meyenii Walpers

Flores de maca

semillas de maca

Planta de maca

CAPACITACIÓN Y DIFUSIÓN 1.- Taller biofertilizantes para la agricultura de Iberoamérica en el siglo XXI Zúñiga, D. 2009. Presente y futuro de los biofertilizantes en Iberoamérica: Perú. Taller de Biofertilizantes para la Agricultura de Iberoamérica en el sigo XXI. Red Biofag-CYTED. 4 mayo. La Habana, Cuba.

2.- Presentación de resúmenes y pósters Katty Ogata*, Carlos García, Wendy Pérez, Mitsuyo García, Jessica Tolentino, Carlos Soto & Doris Zúñiga. 2009. MICROFLORA Y ACTIVIDAD MICROBIANA DE LA RIZÓSFERA DEL CULTIVO DE “MACA” (Lepidium meyenii Walpers) EN LA MESETA DEL BOMBÓN – JUNÍN. XXIV RELAR IIBEMPA. La Habana, Cuba. 4-8 Mayo. Katty Ogata, César La Torre, Wendy Pérez & Doris Zúñiga. 2009. EFECTO DE DIFERENTES BACTERIAS PROMOTORAS DE CRECIMIENTO (PGPR) EN LA GERMINACIÓN Y EMERGENCIA DE PLANTULAS DE “MACA” (Lepidium meyenii Walpers). XXIV RELAR IIBEMPA. La Habana, Cuba. 4-8 Mayo.

Capacitación de asistentes de investigación de LEMYB en la XXIV RELAR y I IBEMPA, La Habana Cuba.

Grupo peruano con investigadores de otros países

Taller: Importancia de las PGPR en los cultivos orgánicos nativos Junín, 2009

Katty Ogata y Carlos García con los agricultores

CONCLUSIONES Los suelos de Junín son franco arenosos, con alto contenido de materia orgánica, pH ácidos, con disponibilidad de P y K, sin problemas de carbonatos y CIC variable. Los contenidos de Cd, Cr están por debajo de los valores permitidos mientras que si presenta problemas de contaminación por Pb. Las poblaciones de bacterias psicrófilas fueron mayores en la rizósfera de maca que en los suelos sin cultivo. Los valores mínimos de las poblaciones aerobias estuvieron en el orden 106, diazótrofos 106, hongos 104, Bacillus 104, actinomicetos 103 y los psicrófilos aerobio104. Conforme la temperatura del ambiente baja, las poblaciones de pseudomonas, actinomicetos y psicrófilos se incrementaron. De 120 de cepas bacterianas (diazótrofos, pseudomonas, actinomicetos y bacillus), todas produjeron AIA en diferentes niveles. Sin embargo, 6 cepas de diazótrofos destacaron por sus niveles de mayor producción.

De un total de 421 cepas aisladas se encontró que 132 (31%) produjeron de 20 a 70 µg/ml de AIA. En la prueba de solubilización de fosfatos 68 cepas de las 421 cepas aisladas presentaron halos de 0.5 a 1.8 cm cuando se utilizó el medio NBRIP – bicálcico y 59 cepas presentaron halos de solubilización entre 0.5 y 2 cm el NBRIP – tricálcico Cinco cepas aisladas de rizósfera de maca (bacillus, pseudomona, actinomicetos y diazótrofos) (de 11 seleccionadas) incrementaron significativamente el % G semillas de maca.

Dos cepas de rizobios y un Bacillus (aisladas de tara, haba y papa) incrementaron significativamente los porcentajes de germinación de semillas de maca. Cuando se probó la emergencia sólo la cepa de rizobio P2N3 incrementó significativamente la emergencia de este cultivo. Las cepas de pseudomona Ps42, actinomiceto 5Act y las interacciones actino-diazótrofo: 5Act+5A, diazótrofo-pseudomona 5A+Ps42 presentaron diferencias significativas respecto al control.

Se encontró que una de las cepas (Ps31) corresponde a una Stenotrophomonas rhizophila. Las demás pseudomonas caracterizadas pertenecen al grupo de P. fluorescens y P. putida Se encontraron también bacterias relacionadas con Rahnella aquatilis y Pantoea agglomerans; y dos cepas de Bacillus emparentadas con B. butanolivorans El contenido de nitrógeno, potasio, calcio y magnesio en la parte aérea fue mayor que en la parte radicular. En cuanto al contenido de metales pesados, la parte aérea tiene casi cinco veces más de contenido de plomo que la parte radicular; mientras que el contenido de cromo fue mayor en la parte radicular. No se observó ninguna influencia del tipo de suelo en la concentración de glucosinolatos obtenidos. Por otro lado, se encontró que las macas moradas presentaron una mayor cantidad de este principio activo en comparación con las macas amarillas.

De los glucosinolatos analizados se encontró un mayor contenido de Glucotropaeolin (benzylglucosinolato) lo que corresponde a lo encontrado en la bibliografía tanto en hipocotilo como en hojas.

De todos los sistemas probados, substratos y temperaturas ambientales, las jarras leonard, el suelo de Junín y condiciones de temperaturas frías resultaron mejor en la emergencia, crecimiento y desarrollo de plántulas de maca.

Respecto a la difusión y capacitación •Se presentaron 3 resúmenes y 2 pósters a la XXIV RELAR - I IBEMPA. La Habana Cuba. 2009. •Una ponencia en Conference 16 of the FAO Biotechnoloogy Forum, Entitled “Learning from the past: Successes and failures with agricultural biotechnologies in developing countries over the last 20 years”. 8 junio-8 Julio 2009. •Existe un gran interés por parte de los agricultores y de la empresa de adquirir los conocimientos en lo que es agricultura orgánica, Utilizar las bacterias promotoras de Crecimiento vegetal y poner en práctica la inoculación con estos microorganismos en los cultivos nativos Altoandinos.

MUCHAS GRACIAS !!