Bioquimica Laboratorio

 

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

ZOOTECNIA 1 de enero de 2014

EFECTO DE INHIBIDORES DE L C DEN

RESPIR TORI

INTRODUCCIÓN: Como ya fue descrito en un post anterior, los inhibidores de la Cadena de Transporte de Electrones (CTE) son substancias que se enlazan a alguno de los componentes de la cadena de transporte de electrones bloqueando su capacidad para cambiar de una forma reversible desde la forma oxidada a la forma reducida y viceversa. Esta inhibición resulta en una acumulación de los componentes en sus formas reducidas antes del punto de inhibición, y la presencia de las formas oxidadas de los componentes de la CTE después del punto de inhibición.

Debido a que en presencia de estos inhibidores no se libera energía, la síntesis de ATP también se detiene. Los más importantes inhibidores conocidos de la cadena de transporte de electrones son el Amital, la Rotenona, el Antimycin A, el Monoxido de Carbono (CO), la Azidasódica y los Cianuros.

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Material: Material biológico:   Homogenizado de hígado de pollo



Material y equipo de laboratorio:   Pipetas   Tubos de vidrio

 

Reactivos:          

    

Fosfato monosódico 2,6-diclorofenolindofenol Malonato Cianuro de sodio Barbiturato de sodio

Sustratos:   Succinato (natural)   P-fenilendiamina (artificial)

 

A)

SISTEMA DEL SUCCINATO:

COMPONENTES

TUBOS DE VIDRIO 1

2

3

4

5

6

Buffer fosfato de sodio 0.1 M pH 7,4, ml

1,5

1,2

1,0

0,5

0,5

0,5

2,6-diclorofenolindofeol 0,02; ml

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

Succinato 0,1M; ml

0,2

-

0,2

0,2

0,2

0,2

Malonato 0,1M; ml

-

-

-

0,5

-

-

Cianuro de sodio 0,1M ; ml

-

-

-

-

0,5

-

Barbiturato de sodio 0,1M ;ml

-

-

-

-

-

0,5

Homogenizado hepático, ml

-

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

Mezclar el contenido de cada sistema de reacción

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RESULTADOS Y OBSERVACIONES: Tubo 01:  01:  El tubo pres presenta enta el color n natural atural del 2,6-diclorofenolindofeol que es de color azul, se determina que no hubo oxidación ni reducción porque no hubo cambio de color. 02:un Tubo 02: El  El buffer la función amortiguar que noecambie pH. El tubo da color cumple azu azull claro dando adeentender quepara el colorant colorante se ha el rreducido educido (recibido electrones o hidrógenos) pero ¿cuál fue el agente que hizo que se reduzca el colorante? fue la enzima succinato deshidrogenasa que se encuentra en las mitocondrias del homogenizado hepático. Creándose una reacción redox pues el succinato se oxido y 2,6-diclorofenolindofeol 2,6 -diclorofenolindofeol se reducido. Tubo 03: El 03: El tubo se decolora formándose una leuco base. En este tubo hubo una doble carga de sustrato pues se agregó succinato exógeno (Succinato 0,1M; ml) y endógeno (homogenizado hepatico) generando que el colorante se reduzca totalmente. Tubo 04: En este tubo colocamos el buffer, 2,6-Diclorofenol que esta esperando a que llegue al cambio de color, el succinato endógeno mas una sustancia que va a competir un INHIBIDOR donde se une al sitio activo de la enzima porque el succinato con el malonato se parecen estructuralmente, Entonces no deja que se pase los agentes agentes reductores p pero ero estos s se e quedan c con on ganas de recibir por lo tanto hay INHIBICION porque hay menor reducción del agente oxidante o la presencia de inhibidor competitivo. Tubo 05: En este tubo el succinato no tiene interferencia y pierde sus electrones por lo cual se está oxidando y lo está recibiendo el colorante, por lo tanto se reduce el colorante en el tubo cambiando de color en verde claro. Tubo 06: En este tubo el barbiturato está permitiendo el pasaje de electrones por lo tantobloquea el oxidante está reduciendo dependiendo el sitio que actúa el Inhibidor por lo que la cadena respiratoria.

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B) SISTEMA DE LA P-FENILEND P-FENILENDAMINA AMINA (DONADOR ARTIFICIAL DE ELECTRONES ): COMPONENTES

TUBOS DE VIDRIO 1

2

3

4

5

Buffer fosfato de sodio 0.1 M pH 7,4, ml

2,0

1,5

1,0

1,0

1,0

Malonato 0,01M; ml

-

-

0,5

-

-

Cianuro de sodio 0,1M; ml

-

-

-

0,5

-

Barbiturato de sodio 0,1M; ml

-

-

-

-

0,5

p-fenilendamina; ml

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

Homogenizado hepático, ml

-

0,5

0,5

0,5

0,5

Mezclar el contenido de cada sistema de reacción

RESULTADOS Y OBSERVACIONES: Tubo 01: el tubo presenta el color un color translucido Tubo 02: en este tubo el color se torna marrón claro Tubo 03: el tubo presenta un color marrón arenoso Tubo 04: la mezcla toma un color marrón claro Tubo05: el tubo presenta un color marrón más oscuro.

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