bioquimica informe ayuna nosotros

República Bolivariana de Venezuela. Universidad de Oriente. Núcleo Bolívar. Escuela de Ciencias de la Salud “Dr. Francisco Batisttini C.” Departamento de Ciencias Fisiológicas. Asignatura: Bioquímica.

Profesor(a): Aminta Cardozo.

Bachilleres: Mendoza Marinel C.I: 18.665.621 Padrino Marjorie C.I: 19.346.343 Pinto Shachary C.I: 18.886.460 Urbina Carlos C.I: 18.961.381 Velásquez Mónaco C.I: 18.680.992

Ciudad Bolívar, febrero 2008.

INTRODUCCIÓN .

El glucógeno es le polisacárido de almacenamiento en los animales. La amilopectina es una estructura mucho mas ramificada que y posee cadenas de 12 a 14 residuos de α – D – glucopiranosa en enlace α [1—4 glucosidico] con ramificaciones mediante enlaces α [1 – 6] glucosidico, es le principal reservorio energético de los animales. Para su aislamiento se utiliza la técnica clásica Pfluger , método que se basa en la estabilidad notoria de este polisacárido a soluciones concentradas de álcali el cual hidroliza y solubiliza otros componentes hepáticos como proteínas y lípidos sin modificar en modo alguno el glucógeno. Cuando se adiciona alcohol al producto de la acción alcalina, el glucógeno se torna insoluble mientras que las demás sustancias permanecen en la solución (Suttie, 1976 p. 189).

El glucógeno también puede ser medido cuantitativamente por el método de antrona o también se puede hidrolizar convirtiendo la glucosa, esta antrona se encuentra disuelta en acido sulfúrico, este acido tiene por objeto hidrolizar los enlaces glucosìdicos de glucógeno liberando así glucosa. La cual se transforma en 5- OH – CH 3 – Furfural por deshidratación y va a reaccionar con el oxidrilo de dos moléculas de antronas dando un compuesto coloreado (MOSBY p 251).

Teniendo en cuenta el concepto de ayuno como la abstención de alimentos durante un período determinado de tiempo, normalmente con fines terapéuticos o religiosos o de investigación como es el caso de la presente practica, podemos determinar los principales objetivos de la realización de esta práctica, entre los cuales figuran:

 

Describir un método de extracción de glucógeno a partir de un tejido. Explicar que sucede durante dicha extracción con las proteínas, lípidos e hidratos de carbono.



Cuantificar glucógeno hepático en animales de experimentación.



Explicar el fundamento de la reacción de antrona.



Comparar los resultados obtenidos en animales de experimentación en ayunas y alimentación



Referir los resultados obtenidos al metabolismo normal y en ayunas de los hidratos de carbono.



Describir el papel del glucógeno como reservado energético.



Enumerar otros factores que influyen en la glucógenolisis y gluconeogénesis.

REPORTE DE DATOS.

A continuación se presenta los datos correspondientes a la concentración de estándar de glucosa para la curva de calibración.

Tabla 1: Concentración de estándar de glucosa

Nro.

ml estándar

H2O ml

Antrona ml

Absorbancia

1

0.1

0.9

4

0.183

2

0.2

0.8

4

0.266

3

0.4

0.6

4

0.467

4

0.6

0.4

4

0.649

5

0.8

0.2

4

0.998

Una vez establecida la curva de calibración con los datos antes expresados a partir de los resultados arrojados en la práctica del laboratorio, se procedió a establecer un promedio entre las tres experiencias para cada muestra hepática bien sea ayunadas y alimentadas.

Dentro de los cálculos realizados para la obtención de la curva de calibración tenemos: 10mg de glucosa X

100ml de sol 0,1ml de sol

X= 0,01mg de glucosa 10mg de glucosa X X= 0,02mg de glucosa

100ml de sol 0,2ml de sol

10mg de glucosa

100ml de sol

X

0,4ml de sol

X= 0,04mg de glucosa 10mg de glucosa

100ml de sol

X

0,6ml de sol

X= 0,06mg de glucosa 10mg de glucosa

100ml de sol

X

0,8ml de sol

X= 0,08mg de glucosa.

Tabla Nº.2: Datos a graficar para realizar la curva de calibración ml de estándar

Abs.

mg de glucosa

0,1

0,183

0,01

0,2

0,266

0,02

0,4

0,465

0,04

0,6

0,649

0,06

0,8

0,998

0,08

Resultados obtenidos de muestras hepáticas de animales ayunados y alimentados, que fueron diluidas y medidas por un fotocolorímetro.

Tubos

Ayunadas (abs.)

Alimentadas (abs.)

1

0,062

0,885

2

0,098*

1

* Dato obtenido por nuestro grupo práctico

En base al promedio de los resultados obtenidos en la práctica y expresados anteriormente en la tabla numero 2, obtuvimos los siguientes datos, extrapolándolos en la curva de calibración. Teniendo que la masa de glucosa en el tejido hepático del espécimen ayunado 1 son 0,005mg de glucosa; y para la muestra del animal ayunado 2 son 0,008mg de glucosa, he aquí los caculos correspondientes: 1.

Animal en ayuno 1

− Absorbancia obtenida: 0,062 − Extrapolación de la absorbancia en la curva de calibración en mg glucosa: 0,005 − Se multiplica por el factor 0,9 para compensar las pérdidas de agua por la hidrólisis de los enlaces glusídicos, y así obtener la cantidad de mg glucógeno: 0,0045

0,0045 mg glucógeno___________2,5ml de Solución de Glucógeno X ____________10ml de Solución de Glucógeno X= 0,018mg glucógeno −

En la segunda dilución (0,5ml de solución de Glucógeno + 9,5ml de Agua Destilada) 0,018mg de glucógeno _______________ 0,5ml de Solución de Glucógeno

X ______________10ml de Solución de Glucógeno X= 0,36mg de glucógeno

− Como se usó 0,5g de Tejido Hepático de los 100g del Hígado del animal, se puede afirmar que: 0,36mg de glucógeno ________________0,5g de Tejido Hepático X __________________100g de Tejido Hepático X= 72mg de glucógeno en 100g de Tejido Hepático

2. Animal en ayuno 2 − Absorbancia obtenida: 0,098 − Extrapolación de la absorbancia en la curva de calibración en mg glucosa: 0,008 − Se multiplica por el factor 0,9 para compensar las pérdidas de agua por la hidrólisis de los enlaces glusídicos, y así obtener la cantidad de mg glucógeno: 0,0072

0,0072 mg glucógeno___________2,5ml de Solución de Glucógeno X ____________10ml de Solución de Glucógeno X= 0,0288mg glucógeno

−

En la segunda dilución (0,5ml de solución de Glucógeno + 9,5ml de Agua Destilada) 0,0288mg de glucógeno _______________ 0,5ml de Solución de Glucógeno X ______________10ml de Solución de Glucógeno X= 0,576mg de glucógeno

− Como se usó 0,5g de Tejido Hepático de los 100g del Hígado del animal, se puede afirmar que: 0,576mg de glucógeno ________________0,5g de Tejido Hepático X __________________100g de Tejido Hepático X= 115,2mg de glucógeno en 100g de Tejido Hepático

3. Animal alimentado 1 − Absorbancia obtenida: 0,889 − Extrapolación de la absorbancia en la curva de calibración en mg glucosa: 0,072 − Se multiplica por el factor 0,9 para compensar las pérdidas de agua por la hidrólisis de los enlaces glusídicos, y así obtener la cantidad de mg glucógeno: 0,0648 0,0648 mg glucógeno___________2,5ml de Solución de Glucógeno X ____________10ml de Solución de Glucógeno X= 0,259mg glucógeno −

En la segunda dilución (0,5ml de solución de Glucógeno + 9,5ml de Agua Destilada) 0,259mg de glucógeno _______________ 0,5ml de Solución de Glucógeno X ______________10ml de Solución de Glucógeno X= 5,18mg de glucógeno − Como se usó 0,5g de Tejido Hepático de los 100g del Hígado del animal, se puede afirmar que: 5,18mg de glucógeno ________________0,5g de Tejido Hepático X __________________100g de Tejido Hepático X= 1036mg de glucógeno en 100g de Tejido Hepático

4. Animal alimentado 2

− Absorbancia obtenida: 1 − Extrapolación de la absorbancia en la curva de calibración en mg glucosa: 0,082 − Se multiplica por el factor 0,9 para compensar las pérdidas de agua por la hidrólisis de los enlaces glusídicos, y así obtener la cantidad de mg glucógeno: 0,0738 0,0738 mg glucógeno___________2,5ml de Solución de Glucógeno X ____________10ml de Solución de Glucógeno X= 0,295mg glucógeno

−

En la segunda dilución (0,5ml de solución de Glucógeno + 9,5ml de Agua Destilada) 0,295mg de glucógeno _______________ 0,5ml de Solución de Glucógeno X ______________10ml de Solución de Glucógeno X= 5,9mg de glucógeno − Como se usó 0,5g de Tejido Hepático de los 100g del Hígado del animal, se puede afirmar que: 5,9mg de glucógeno ________________0,5g de Tejido Hepático X __________________100g de Tejido Hepático X= 1180mg de glucógeno en 100g de Tejido Hepático

DISCUSIÓN

El glucógeno hepático regula la concentración de glucosa en sangre, y es esta glucosa la que alimenta el cerebro de forma constante (el cerebro no dispone de reservas y sólo puede utilizar glucosa como fuente de energía). Si el cerebro está bien alimentado, funciona bien, lo que garantiza la capacidad de concentración y un buen estado de ánimo. El glucógeno en el hígado alcanza una reserva de 100gramos aproximadamente. Estas reservas son mayores después de las comidas pero disminuyen entre las mismas y especialmente durante la noche y el ayuno, ya que se degrada el glucógeno hepático para mantener normales los niveles de glucosa en la sangre (Hicks, 2001). En base al planteamiento realizado en la sección anterior de este informe, se pudo notar que los resultados para la cantidad de glucógeno presente en el hígado del material biológico alimentado y en ayuna fueron los esperados. Por otro lado, y sabiendo que de 12 a 18 horas de ayuno el hígado casi agota su reserva de glucógeno; cabe decir, que la relación entre la cantidad de glucógeno entre ambos tejidos hepáticos fue la esperada: en el hígado del animal alimentado las reservas de glucógeno fueron mucho más altas que las del animal en ayuno por 48 horas. Es importante saber que al grupo numero 2 de animal alimentado le dio una absorbancia de 1 porque no realizaron la segunda dilución, por lo tanto la cantidad de glucógeno calculada no se obtuvo. En relación a lo ya indicado se explica claramente, porque el hígado actúa fundamentalmente como un "glucostato"; es decir, sensor de las concentraciones de glucosa sanguínea que ajusta en función de ello la síntesis y degradación de glucógeno. En otras palabras, al detener la ingesta de carbohidratos (ayuna), y una vez utilizada la glucosa obtenida por la última comida, se recurre a utilizar las reservas de glucosa que se encuentran en forma del polisacárido glucógeno en el hígado (localizada también en el músculo esquelético).

Una vez transformados éstos en glucosa y habiendo sido utilizados para satisfacer los requerimientos energéticos de otros órganos, la cantidad de glucosa hepática disminuyó. Esta reserva de hexosa podría volver a incrementarse con la ingesta de una dieta rica en carbohidratos al animal ayunado.

EJERCICIOS

1.

¿Cuál es el fundamento teórico de la reacción de la Antrona? La Antrona se encuentra disuelta en ácido sulfúrico concentrado, este ácido tiene por objeto hidrolizar los enlaces glucosídicos del glucógeno, liberando glucosa; la cual se va a transformar en 5-OHCHfurtural, por deshidratación, y va a reaccionar con el oxidrilo de dos moléculas de antrona dando un compuesto coloreado.

2.

¿Por qué se utiliza el factor 0,9 para la conversión del valor de

glucosa a glucógeno? Para compensar las pérdidas de agua por la hidrólisis de los enlaces glusídicos.

3.

¿Qué otras sustancias tienen efecto glucogenolítico? Insulina, glucógeno, epinefrina, entre otros.

4.

¿Qué sucede con el glucógeno del tejido muscular durante el ayuno? Si el ayuno no va acompañado con contracción muscular, el glucógeno permanece igual, ya que solo es degradado cuando existe la contracción vigorosa del músculo y el ATP intracelular se encuentra disminuido, entonces este glucógeno se vuelve necesario para la producción de energía.

5.

¿Cuál es la fuente de energía una vez consumido el glucógeno? Los ácidos grasos.

CONCLUSIONES

Una vez culminada la práctica y habiendo aplicado los cálculos, razonamientos e interpretado los resultados, podemos afirmar que: Se utilizó y comprendió el método de extracción de glucógeno a partir del tejido hepático, tal y como lo fue la técnica de Pfluger para el aislamiento de glucógeno. Durante el proceso, se explicó que el resto de las moléculas durante la extracción fueron solubilizadas y luego descartadas como sobrenadante en la centrifugación. Fue posible cuantificar los niveles de glucógeno en el hígado del material biológico de experimentación y a la vez que se explicó el fundamento de la antrona para hacer posible dicha cuantificación. Se logró comparar los niveles de glucógeno cuantificados obtenidos de animales en ayuna y alimentada, y se tuvo siempre en cuenta el metabolismo de los carbohidratos durante dichas circunstancias, describiendo de esta menara la función del glucógeno como reserva energética. Se pudo establecer la valiosa importancia del glucógeno como reserva energética y destacar la relevancia del los periodos de ayuna en los niveles de concentración de glucógeno hepático, principalmente, y sus diferencia con organismo alimentados normalmente.