Bandeo cromosómico 1

¿PARA QUE? En algunas especies los pares cromosómicos no pueden diferenciarse claramente considerando sólo sus componentes distintivos en sentido longitudinal;  se debe recurrir a técnicas citológicas especiales para la tinción de los cromosomas,  Se evidencian "bandas" transversales (oscuras y claras) que corresponden a los distintos tipos de cromatina. 

TECNICAS MAS USADAS 

Bandeo G



Bandeo Q



Bandeo R



Bandeo C



Bandeo NOR

BANDEO G 

Se utiliza tratamiento con tripsina previo a la utilizacion de Giemsa ya que la tripsina degrada la proteinas y da lugar a bandas claras y oscuras.



Bandas Oscuras: Regiones de ADN ricas en A-T y pobres en genes constitutivos. Bandas Claras: Regiones de ADN con G-C Y en genes constitutivos



Regiones A-T son resistentes a la tripsina lo cual genera una coloración oscura en el bandeamiento.

Mayor nivel de bandas = Mayor calidad del estudio

BANDEO Q 

Se basa en el uso de colorantes fluorescentes como la quinqcrina. Dando a lugar bandas brillantes y oscuras. Técnica similar al bandeo G



Bandas Brillantes: Contienen regiones ricas en A-T. Bandas oscuras: G-C



Regiones con G-C reprimen la fluorescencia y por eso no se tiñen, al contrario que las regiones con A-T

No es muy frecuentemente utilizada

BANDEO R  Técnica opuesta al bandeamiento y se utiliza 

el calor como desnaturalizante o BrdU Bandas oscuras: G-C



Bandas claras: A-T

El calor desnaturaliza las regiones ricas en A-T por eso se visualizan mas las regiones con G-C

BANDEO C 

Marcan las regiones pericentromericas.

Centromericas

y



Permite la tinción de la heterocromatina constitutiva.



Se utiliza hidroxido de sodio e hidroxido de bario para desnaturalizar el ADN.

Se usa principalmente para los cromosmas 1, 9 y 16

BANDEO NOR 

Marcan las regiones de los organizadores nucleolares acrocentricos.( regiones cromosómicas que forman y mantienen el nucléolo)

BASES MOLECULARES DEL BANDEO CROMOSOMICO.

CLASIFICACIÓN QFQ GTG RFA MORFOLOGICOS RHG THG BANDEOS CROMOSOMICOS

CBG GBG RBA DINAMICOS

RBG GB-AAu RB-AAu

 

 1. 2. 3.

4.

Se basan en técnicas inherentes a la heterogeneidad de la cromatina. Importante la relación con proteínas(histónicas y no histónicas) e interacciones ADN. Se subclasifican en: Técnicas de tinción diferencial Métodos de tinción selectiva Coloraciones con fluoroeromos específicos aislados o combinados con colorantes no fluorecentes Tinciones con anticuerpos fluorecentes.

Nomenclatura Bandeos Morfologicos      

1) tipo de bandeo 2) técnica de detección empleada 3) tipo de tinción.

QFQ: Bandas Q por fluorecencia usando quinacrina. GTG: Bandas G por tratamiento enzimático con tripsina utilizando Giemsa. RFA: Bandas R por fluorecencia usando naranja de acridina. RHG: Bandas R mediante desnaturalización térmica utilizando Giemesa. THG: Bandas T por desnaturalización térmica empleando Giemesa. CBG: Bandas C por hidróxido de bario utilizando Giemesa.



Incorporación de una base analoga, (BrdU), en el ADN durante la fase S del ciclo celular. Se denomina también bandeo de replicación debido a la relación existente entre el tiempo de incorporación del BrdU y el patrón de replicación.



Si se incorpora BrdU durante la fase de replicación temprana se obtiene un patrón de bandeo R destacándose las regiones ricas en G-C.



Si se incorpora la base análoga durante la fase tardía de replicación se obtiene un patrón de bandas G, destacándose las zonas de predominio de secuencias A-T.



Los cromosomas pueden visualizarce utilizando distintos métodos de tinción como Giemesa o el naranja de acridina o utilizando anticuerpos específicos

Nomenclatura Bandeos Dinamicos    



GBG: Bandas G por incorporación de BrdU utilizando Giemesa. RBA: Bandas R por incorporación de BrdU empleando naranja de acridina. RBG: Bandas R por incorporación de BrdU utilizando Giemesa. GB-AAu: Bandas G por incorporación de BrdU empleando anticuerpos específicos unidos a partículas deoro coloidal. RB-AAu: Bandas R por incorporación de BrdU usando anticuerpos específicos unidos a partículas deoro coloidal.

Bromo desexiuridina (BrdU)  

     

Análogo mutagénicamente activo de la timina, en que el grupo -CH3 en posición 5' se reemplaza por Br. Tratamiento e investigación del cancer debido a que aumenta la susceptibilidad de las células a la radioterapia porque inhibe la reparación de roturas causadas por la radiación en la doble cadena de ADN Agente mutagenico: altera los patrones de transcripción Aumenta la afinidad de las proteinas cromosomales por las zonas de la cadena que contengan BrdU, Altera la unión de proteínas reguladoras a la cadena de ADN, Inhibe la expresión de algunas funciones de diferenciacion celular Provoca alteraciones en la membrana plasmatica.

1.

PROCEDIMIENTO BANDAS G Envejecer las preparaciones en estufa a 65°C / 14h o 3 dias a temperatura ambiente

Bandeo GTG Tripsina desnaturaliza proteinas de cromosomas Tincion Giemsa o Leishman Bandeo G con colorante Wright Protocolo mas usado. Se introduce la preparacion en solucion salina de 2SSC (Citrato trisodico disuelto en NaCl 0,3M) durante 1 minuto a 65°C. Esto permite que se abra la hebra de ADN Lavar la preparacion con agua destilada y secar al aire. Teñir con colorante Wright al 0.25% y tampon Sorensen en proporcion 1 a 3 duraten 3 minutos

PROCEDIMIENTO BANDA C  1.

2. 3. 4. 5. 6.

CBG bandas C obtenidas con hidroxido Barico usando Giemsa Introducir la preparacion en una cubeta con HCL 0.02N a temperatura ambiente por 10 minutos, lavar con agua y dejar secar al aire Introducir la preparacion en una cubeta a 60°C con Ba(OH)2 saturado durante 1 minuto. Esto despuriniza y desnaturaliza el ADN. Lavar con agua destilada y metanol para eliminar restos de bario dos veces Dejar secar e incubar en 2xSSC a 65°C / 15 min Lavar la preparacion y dejar secar Teñir con colorante Leishman al 20% o Giemsa durate 5 a 10 minutos

Esta tecnica degrada un 50% del material cromosomico lo que dificulta la aplicación posterior de otras tecnicas. El unico material que queda teñido es la heterocromatina constitutiva porque resiste a la degradacion

Procedimiento bandas NOR Añadir 0.2uL de solucion de nitrato de plata al 50% filtrada a la preparacion 2. Adicionar 6 a 8 gotas de formaldehido al 0.3% (acelera la tincion) 3. Incubar a 37°C durante 24h protegido de la luz 1.

BIBLIOGRAFIA  

  

http://www.oocities.org/researchtriangle/lab/25 13/bandeos.htm Cristina Hernando Davalillo, Caracterizacion de Anomalias cromosomicas en diagnostico prenatal y postnatal mediante tecnicas de citogenetica molecular, Tesis Doctoral 2005. http://docentes.cs.urjc.es/~odeluis/Docencia/G enetmed/Bloque_1_2p.pdf http://geneticahumana.tripod.com/libros/page2 01.html http://www.fmed.uba.ar/depto/histo1a/genetica /adm/sg2.pdf