Bacteriología

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONÍA PERUANA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

CURSO DE BACTERIOLOGÍA

Edith Ruiz Sánchez Álvaro Tresierra Ayala 2011

INTRODUCCIÓN Aunque las primeras bacterias fueron observadas por Anthony van Leeuwenhoek en 1683, empleando un microscopio de lente simple diseñado por él mismo, a las que las denominó “animáculos”, el término “bacteria” (bastón pequeño), fue introducido en 1828, por Ehrenberg. Entre la amplia diversidad de microorganismos presentes en los diferentes ecosistemas del planeta, las bacterias o moneras constituyen uno de los grupos más interesantes, dada su gran versatilidad metabólica así como porque algunas constituyen la causa de enfermedades no solo para humanos sino también para animales y plantas. Aunque muchos estudiosos de la vida se muestran escépticos, las bacterias son los organismos más abundantes del planeta, son ubicuas, crecen hasta en los hábitats más extremos como en los manantiales de aguas calientes y ácidas, en desechos radioactivos, en las profundidades tanto del mar como de la corteza terrestre; algunas pueden incluso sobrevivir en las condiciones extremas del espacio exterior. Se estima que se pueden encontrar en torno a 40 millones de células bacterianas en un gramo de tierra y un millón de células bacterianas en un mililitro de agua dulce. Estos organismos procariotas son imprescindibles para el reciclaje de los elementos, pues muchos pasos importantes de los ciclos biogeoquímicos dependen de éstas. Como ejemplo cabe citar, la fijación del nitrógeno atmosférico. Por otro lado, se ha estimado que una gran parte (se supone cerca del 90 a 95%) de las especies de bacterias existentes, todavía no ha sido descrita. Además, en las especies bacterianas conocidas y que mayormente crecen en los medios de cultivo de laboratorio, existen algunas cepas denominadas “bacterias viables pero no cultivables”, las cuales pese a estar presentes en una muestra, no son susceptibles de desarrollar en los medios de cultivo, por lo que su estudio actualmente constituye un reto para los bacteriólogos. En el cuerpo humano existen aproximadamente diez veces tantas células bacterianas como células humanas, con una gran cantidad de bacterias en la piel y en el tracto digestivo. Aunque el efecto protector del sistema inmune hace que la gran mayoría de estas bacterias sea inofensiva o beneficiosa, algunas bacterias patógenas pueden causar enfermedades infecciosas, incluyendo cólera, sífilis, lepra, tifus, difteria, escarlatina, etc. Las enfermedades bacterianas mortales más comunes son las infecciones respiratorias, con una mortalidad sólo para la tuberculosis de cerca de dos millones de personas al año. Afortunadamente, en todo el mundo se utilizan antibióticos para tratar las infecciones bacterianas, sustancias que mayormente son producidas por bacterias y son efectivas mayormente contra otras bacterias, ya que inhiben la formación de la pared celular o detienen otros procesos de su ciclo de vida. También se usan extensamente en la agricultura y la ganadería en ausencia de enfermedad, lo que ocasiona que se esté generalizando la resistencia de las bacterias a los antibióticos; de modo que dentro de poco, el hombre tendrá que 2

verse obligado a buscar otras alternativas para contrarrestar las enfermedades de etiología bacteriana, causadas por agentes multidrogo-resistentes y quizás recurra al empleo de sustancias de origen vegetal. Pero no todo es adverso, puesto que en la industria, algunas bacterias son importantes en procesos tales como el tratamiento de aguas residuales, en la producción de queso, yogur, mantequilla, vinagre, etc., y en la fabricación de medicamentos y de otros productos químicos Por todo lo expuesto, aunque parezca paradójico, existen bacterias perjudiciales (patógenas), menos mal que son pocas y otras tantas son benéficas, pero el ponerse a pensar que algunos de estos organismos tienen como hábitat diferentes partes de nuestro cuerpo, tal es el caso de la flora bacteriana intestinal, permitiéndonos asimilar al máximo los nutrientes que ingerimos, el ponerse a pensar que con el empleo de la tecnología del ADN recombinante, la humanidad dispone de bacterias capaces de sintetizar insulina humana u otras hormonas necesarias para el ser humano, cada vez que escuchásemos el término bacteria no solamente pensemos en perjuicio, pero la idiosincrasia de nuestra sociedad, es muy difícil de cambiar. A fin de facilitar el proceso formativo de nuestros estudiantes, se ha considerado conveniente elaborar esta obra, la cual abarca el estudio de algunas de las bacterias presentes en el ámbito amazónico. Aquí se contemplan no solamente aspectos genotípicos de estos seres microscópicos, sino también aspectos fenotípicos como lo son: la morfología, ecología, bioquímica, patogenia, fisiología, entre otros. En vista que no todas las bacterias incluidas en este documento, son consideradas como patógenas, en algunas de ellas se describen sus potencialidades benéficas utilizadas a nivel industrial, virtudes que hoy en día son aprovechadas por la humanidad a fin de solucionar algunas de sus necesidades.

Los autores

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ÍNDICE: INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 2 ÍNDICE .................................................................................................................... 4 Contenido del Curso de Bacteriología ................................................................. 6 I UNIDAD ................................................................................................................ 6 1.1. Características de las Bacterias .................................................................... 6 1.2. Clasificación de las Bacterias ........................................................................ 6 1.3. Nomenclatura Bacteriana .............................................................................. 8 1.4. Identificación de las Bacterias ....................................................................... 9 1.5. Medios de cultivo......................................................................................... 11 1.6. Clasificación de los medios de cultivo ......................................................... 12 1.7. Mecanismos de Patogenicidad Bacteriana .................................................. 14 1.8. Invasión a las Células del Tejido del Hospedero ......................................... 17 1.9. Las Toxinas Bacterianas ............................................................................. 19 SECCIÓN 1: Las Espiroquetas ........................................................................ 21 Especie: Treponema pallidum......................................................................... 21 Especie: Leptospira interrogans...................................................................... 26 SECCIÓN 4: Bacilos y Cocos Gram Negativos .............................................. 28 Especie: Pseudomonas aeruginosa ............................................................... 28 Microorganismos Fijadores de Nitrógeno: Género: Rhizobium ....................... 31 II UNIDAD ............................................................................................................. 36 Especie: Neisseria gonorrhoeae ..................................................................... 36 Especie: Brucella melitensis ........................................................................... 38 Especie: Brucella abortus ............................................................................... 38 Especie: Brucella suis ..................................................................................... 38 SECCIÓN 5: Bacilos Gram Negativos Facultativos ....................................... 42 Familia: Enterobacteriaceae ........................................................................... 42 Especie: Escherichia coli ................................................................................ 45 Especie: Klebsiella pneumoniae ..................................................................... 48 Especie: Proteus vulgaris ............................................................................... 50 Especie: Proteus mirabilis ............................................................................... 50 Especie: Proteus myxofaciens ........................................................................ 50 Especie: Salmonella typhi ............................................................................... 52 Especie: Shigella dysenteriae ......................................................................... 56 4

III UNIDAD............................................................................................................. 62 Especie: Vibrio cholerae ................................................................................. 62 Especie: Haemophilus influenzae ................................................................... 65 SECCIÓN 9: Rickettsias ................................................................................... 68 SECCIÓN 16: Las Mycobacterias .................................................................... 72 Especie: Mycobacterium tuberculosis ............................................................. 72 SECCIÓN 17: Cocos Gram Positivos .............................................................. 77 Especie: Staphylococcus aureus .................................................................... 77 Especie: Streptococcus pyogenes .................................................................. 79 IV UNIDAD ............................................................................................................ 83 SECCIÓN 18: Bacilos y Cocos Gram Positivos Esporogenos ..................... 83 Especie: Bacillus anthracis ............................................................................. 83 Especie: Bacillus subtilis ................................................................................. 83 Especie: Clostridiun tetani .............................................................................. 87 Especie: Clostridiun botulinun ......................................................................... 90 SECCIÓN 19: Bacilos Gram Positivos Regularmente Asporogenos ........... 92 Especie: Listeria monocytogenes ................................................................... 92 SECCIÓN 20: Los Bacilos Gram Positivos Irregularmente Asporogenos .. 95 Especie: Corynebacterium diphtheriae ........................................................... 95 SECCIÓN 29: Streptomyces y Generos Relacionados .................................. 98 Especie: Streptomyces griseus ....................................................................... 98 SECCIÓN 30: Los Mycoplasmas ................................................................... 103 Especie: Mycoplasma pneumoniae .............................................................. 103 REFERENCIAS SELECCIONADAS ................................................................... 108

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CONTENIDO DEL CURSO DE BACTERIOLOGÍA I UNIDAD: 1.1. Características de las Bacterias Las bacterias o procariotas, son microorganismos que se caracterizan por:  Ser unicelulares.  Reproducirse mayormente por fisión binaria.  Contener información genética, sistema de energía y sistema de biosíntesis necesarios para el crecimiento y la reproducción, hay excepciones: Rickettsias y Chlamydias que no tienen sistema de biosíntesis, por lo que son consideradas como parásitos obligados.  Poseer ribosomas 70S, velocidad de sedimentación en función a su peso molecular.  Mayormente poseer un cromosoma circular desnudo, compuesto de doble cadena de ADN, que se multiplica amitóticamente.  Algunas poseen fimbrias, función de adherencia.  La composición química de su envoltura celular les confiere características tintoriales únicas que permiten dividirlas en 3 grupos: Gram +, Gram – y las denominadas bacterias ácido-alcohol resistentes. 1.2. Clasificación de las Bacterias La clasificación, nomenclatura e identificación son tres áreas separadas, pero interrelacionadas de la taxonomía: La clasificación se puede definir como el ordenamiento de los microorganismos en grupos taxonómicos (taxa), en base a sus semejanzas o interrelaciones. La nomenclatura en dar nombre a un microorganismo, en base a reglas interrelacionadas de acuerdo a sus características. La identificación, se refiere al uso práctico de su sistema de clasificación. Criterios para la clasificación de bacterias: El agrupamiento de cualquier organismo se hace atendiendo sus características comunes respecto a otros, esto implica que el grupo de organismos ha evolucionado a partir de un ancestro común, por lo que este individuo que conforma este grupo, retiene alguna de las características de su antepasado, estableciéndose una “jerarquía filogenética”. 6

La información que se utiliza para clasificar y determinar las relaciones evolutivas en los microorganismos superiores, proviene de fósiles, pero para algunos, en el caso de las bacterias no existen fósiles, por lo que no se disponen de estas evidencias para establecer o determinar las relaciones. Entonces en las bacterias no se puede establecer una jerarquía filogenética; sin embargo, al inicio de la clasificación, se pretendió establecer una jerarquía de reino, división, clase, orden, familia, género y especie. Como las bacterias son seres microscópicos no podían ser observados a simple vista, por lo que se tuvo que esperar la creación del microscopio. Se logró a finales del siglo XVII, por Anthony van Leeuwenhoek, tallador de lentes, quien empleando un microscopio con solo un lente, descubre el mundo microbiano. La clasificación de los seres microscópicos se inicia en 1866, Haeckel crea el reino Protista, incluyendo a microorganismos unicelulares indiferenciados que no forman tejidos especializados, ni sistemas orgánicos, que son características de plantas y animales superiores incluyendo a bacterias, hongos, algas y protozoarios. Recién a mediados de los cincuenta del pasado siglo, se logró inventar el microscopio electrónico, se llegó a la determinación que las bacterias sintetizan estructuras químicas únicas, que el núcleo carece de envoltura y que además carecen de muchas organelas intracelulares. En la década del 60 del siglo XX, se establece que las bacterias difieren a nivel de organización intracelular con las células de vida libre más elevadas. Es así como en 1966, tres investigadores: Murray, Stanier y Van Niel, crearon para las bacterias un nuevo reino Procaryotae, que significa núcleo primitivo, (1°) cianobacterias: bacterias azul verde y (2°) bacterias; y también el reino Eucaryotae. El libro que contiene la clasificación de todas las bacterias es el “Manual de de Bergey”. 1923: 1° Edición, se clasificaba por sus características fenotípicas, con jerarquías de reino, división, clase, orden, familia, género y especie. 1957: 7° Edición, clasificación por sus características bioquímicas, se determinó la composición química de la pared celular. 1974: 8° Edición, entró a tallar la taxonomía genética, se produjo una revolución en la clasificación con jerarquización, existiendo muchas especies que no tenían familia, agrupándolas como especies de afiliación incierta. A las especies conocidas se agruparon en 19 grupos 7

1984: Se empieza a editar 4 volúmenes del manual: Vol. I. Describe las bacterias Gram – de importancia médica e industrial. Vol. II. Describe las bacterias Gram + de importancia médica e industrial. Vol. III. Describe a las cyanobacterias, arqueobacterias o bacterias primitivas y a las Gram – que no estaban consideradas en el Vol. I. Vol. IV. Describe a los actynomycetes. En estos 4 volúmenes no se habla de grupos, si no de secciones, clasificando a las bacterias en 36 secciones. 1994: 9° Edición, síntesis de los anteriores vols., en este manual se consideran 4 rangos o divisiones, en función a su pared celular:    

Gracilicutes Firmicutes Tenericutes Mendosicutes

Gram (-) Gram (+) Sin pared Bacterias primitivas

2001: 10° Edición, siguen establecidos las 4 divisiones y la mayoría de las secciones carecen de la clasificación en familias. 1.3. Nomenclatura Bacteriana Existen millones de organismos vivos, no se puede usar nombre vulgares, porque acarrearía confusión Antiguamente se empleaba el empirismo para nombrar a los animales (creaba confusión), por tal motivo en el siglo XVII, Linneo, estableció las bases para un sistema universal de denominación: Binario, el cual consta de dos nombres: 1° Genérico, 2° Específico. Características que se toman en cuenta para dar nombre a una especie: a) Características Genitívas. Se basa en el nombre del que la descubrió. Ejem. Pasteurella de Pasteur Yersinia de Yersin Escherichia de Escherich Bordetella de Bordet y Gengou

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b) Características Fisiológicas. Sustancias que produce la bacteria. Ejem. P. fluorescens Lactobacillus acidophylus Acetobacter aceti Enterobacter aerogenes

Pigmento verde fluorescente Produce ácido láctico a partir de la glucosa Ácido acético Gas a nivel de enterón

c) Características Ecológicas. Según el lugar en donde se halla. Ejem. Y. enterocolítica E. faecalis C. botulinum S. epidermidis

Infección en el colon. Se encuentra en los restos fecales. En el alimento, botul. (salchicha). En la epidermis.

d) Características Morfológicas. Según su forma Ejem. V. comma Bacillus Streptococcus

Forma de coma Forma de bacilo Cocos en cadena

e) Características Patogénicas. Según la enfermedad que produce Ejem. C. tetani Shigella dysenteriae B. anthracis S. pneumoniae f) Características philos=amor

Tétano Disentería Ántrax Neumonía

Nutricionales.

Haemophilus:

haemo=sangre,

1.4. Identificación de las Bacterias ¿Para qué se identifica una bacteria?  Generalmente para conocer el agente causal de una enfermedad.  Para saber que bacteria es responsable de una cambio determinado en el sustrato. La preocupación de los médicos y micólogos cuando hay una persona, animal o planta enferma, es el aislamiento e identificación rápida del agente causal de la enfermedad para poder iniciar a su vez un tratamiento rápido y adecuado. Para identificar una bacteria, primero hay que aislarla y para esto debemos realizar una buena toma de muestra. La forma de la toma de muestra va a depender del origen de la muestra clínica, si es de la piel, heces, orina, sangre, abscesos, secreciones, etc. 9

Por ejemplo: La sangre, LCR, abscesos cerrados, a partir de estas muestras se puede obtener cultivos puros, con estas muestras no es necesario utilizar algún medio de cultivo selectivo. Las muestras de esputo, piel, heces y ofidismo del cuerpo, generalmente contienen mezclas de microorganismos, donde el microorganismo patógeno se encuentra en mayor número y puede ser pasado por alto si son eliminados por productos metabólicos (ácidos), producidos por los microorganismos no patógenos que generalmente se encuentra en mayor número. En este tipo de muestras es recomendable utilizar medios de cultivo selectivos, en los que se da ventaja de crecimiento de patógenos; generalmente estos medios tienen un pH apropiado para la bacteria patógena o puede contener inhibidores que impidan el crecimiento de la flora de acompañamiento que se encuentra en la muestra, ó también el medio tenga nutrientes apropiados para el crecimiento del patógenos. Una vez que se logra el cultivo puro (cepa), se procede a identificarlo tomando en cuenta las siguientes características. 1. Características Fenotípicas: a) Características Microscópicas.    

Morfológícas. Tintoriales. Tamaño. Presencia de estructuras; flagelos, endospora, cápsula, etc.

b) Características Macroscópicas.  Cultivos líquidos.  Cultivos en medios sólidos: diferenciales.

Medios

comunes,

selectivos,

c) Características Bioquímicas    

Acción sobre carbohidratos. Acción sobre proteínas. Acción sobre lípidos. Producción de toxinas (colerágeno, tetanoespasmina, etc.) y enzimas (hialuronidasa, hemolisina).

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d) Características Nutricionales. Algunos no son exigentes, otros si necesitan de medio enriquecidos. e) Características Fisiológicas. Su necesidad de pH, T°, O2, y potencial de óxido-reducción. f) Características Ecológicas. Si hacen simbiosis o si hacen sinergias, si son parásitas. g) Características Patógenas. Si es patógena para un determinado hospedero y cuáles son sus determinantes de patogenicidad, por ejemplo el caso del S. aureus, produce coagulosa. 2. Características Genotípicas. Se determinan por el estudio de ADN, los genes son secuencias de ADN y se estima que el número total de genes que posee una bacteria es de 1000 a 4000. La información genética del ADN, puede variar o bien por mutación de los genes o por transferencias de nuevos genes. 1.5. Medios de Cultivo En bacteriología se refiere a sustratos que contienen todo lo necesario para el crecimiento de las bacterias. Algunas bacterias pueden crecer satisfactoriamente en medios comunes, otras requieren de medios enriquecidos, es decir son exigentes nutricionalmente. Condiciones que deben reunir el medio de cultivo 1. Deben cubrir todas las necesidades nutricionales de la bacteria en estudio. Es decir, debe tener una fuente nitrogenada (peptonas, aminoácidos, etc.), una fuente de energía (carbohidratos), sales minerales y vitaminas. 2. Debe contener suficiente humedad y oxigeno 3. pH correctamente ajustado. 4. Debe ser estéril.

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1.6. Clasificación de los medios de cultivo A. Por su naturaleza u origen: 1. Definidos o Sintéticos. Cuando su composición química es definida. 2. Indefinidos o No Sintéticos. Cuando su composición química no está definida. Como aquellos que contienen extracto de carne, extracto de levadura, etc. Pueden ser elaborados en laboratorios o también artesanalmente. B. Por su estado físico: 1. Liquido. Cuando tiene una consistencia fluida. Sirve para determinar las características macroscópicas del crecimiento. Por ejemplo: Crecimiento en forma de velo o película en la superficie, crecimiento en forma de turbidez, crecimiento en forma de sedimento, etc. 2. Sólido. Es cuando en su composición se encuentra una sustancia solidificante como el agar-agar, que es un polisacárido complejo no utilizable, que es extraído de algas marinas, cuyas propiedades lo hacen valioso para el trabajo en medios microbiológicos, por ejemplo:  No es fácilmente degradado  Se funde a temperatura de ebullición del agua  Se mantiene liquido hasta los 40°C 3. Semisólido. Cuando contiene pequeñas cantidades de sustancias solidificantes y sirve para determinar la movilidad (agar movilidad) y algunas pruebas bioquímicas (medio de OX/FER, según Hugh y Leifson, este medio tiene 0.25g de agar-agar/100 ml de medio de cultivo). C. Por su utilidad: 1. Medios Comunes. Sirven para el cultivo de bacterias poco exigentes. Por ejemplo; agar plate count, que contiene peptona, glucosa, NaCl. 2. Medios Enriquecidos. Sirve para cultivar nutricionalmente exigentes. En su composición altamente nutritivas, ejemplo: Agar sangre; agar Lowenstein-Jensen; agar carne-hígado: con base 12

microorganismos lleva sustancias chocolate; agar carne e hígado,

glucosa, almidón, hierro (proporciona una oferta rica en nutrientes) y agar-agar. 3. Medios Diferenciales. Son los que contienen algunas sustancias que van a permitir diferenciar un género de otro e incluso diferenciar especies. Ejemplo: Agar manitol-sal común-rojo de fenol, para diferenciar S. aureus de S. epidermidis. Agar SS (SalmonellaShigella), contiene lactosa y rojo neutro (lactosa - = colonias transparentes, lactosa + = colonia roja) + tiosulfato de sodio y citrato de hierro (diferencia las bacterias que reducen el tiosulfato a sulfuro + citrato de hierro= sulfuro de hierro). 4. Medios selectivos. Contienen algunas sustancias inhibidoras que impiden el crecimiento de algunos grupos de bacterias. Ejemplo: Caldo púrpura de del Enterococcus microorganismos Pseudomonas se agua.

bromocresol azida, que selecciona el crecimiento faecalis en muestras que pueden contener otros como S. aureus, S. agalactiae, E. coli y usa para recuento de Enterococcus faecalis en

Caldo brila, que contiene verde brillante y sales biliares que inhiben el crecimiento de bacterias Gram (+) o Gram (-), que normalmente no se encuentran en el enterón por lo que no están acostumbradas a la presencia de la bilis. 5. Medios de Enriquecimiento. Medios líquidos que actúan dificultando el crecimiento de algunas bacterias y de esta manera favorecen el crecimiento de otras. Ejemplo: Caldo de enriquecimiento para Enterobacterias o caldo Mossel; sirve para enriquecimiento selectivo de todas las enterobacteriáceas, particularmente para la investigación simultánea de Salmonella y coliformes a partir de alimentos. La glucosa favorece el crecimiento de enterobacterias L(+) y L(-), la bilis y el verde brillante inhiben la flora indeseable, el hidrógeno fosfato disódico y el dihidrógeno potásico impiden la muerte de los gérmenes enriquecidos debido a los ácidos producidos a partir de la glucosa. Caldo de enriquecimiento selectivo según Leifson, el selenito inhibe el crecimiento de bacterias intestinales coliformes y de los Enterococcus principalmente en las primeras 6 a 12 horas de incubación, mientras que no inhibe a Salmonella y Proteus. Entre su contenido tenemos:

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peptona, lactosa, selenito sódico, hidrógeno fosfato dipotásico y dihidrógeno fosfato monopotásico. 6. Medios de Transporte. Sirven para transportar una muestra clínica, conservando la sobrevivencia de los microorganismos contenidos en la muestra. Ejemplo: Medio de Stuart modificado por Ringertz conserva microorganismos patógenos como: Neisseria (hasta 3 días), Trichomonas (hasta 1 día), Haemophilus y Streptococcus (de 3 a 5 días), Salmonella y Shigella (de 8 a 12 semanas). Mantiene la composición de la flora inicial, carece de fuente de nitrógeno y azúcares (lo que impide la multiplicación de los microorganismos). En su composición contiene: glicerol fosfato sódico, tiosulfato sódico, cloruro de calcio, azul de metileno, agar-agar. 7. Medios de Identificación. Sirven para determinar los diferentes productos metabólicos microbianos a partir de un sustrato determinado que se utiliza en el proceso de identificación bacteriana. Ejemplo: agar citrato de Simons, agar TSI, caldo glucosado con fosfato dipotásico (VP y RM).

1.7. Mecanismos de Patogenicidad Bacteriana Existen miles de especies bacterianas, pero solo un aproximado de 300, han adquirido características genéticas que les dan la capacidad de producir enfermedad en el hombre, animales y plantas. Robert Koch, en 1884, propuso una serie de postulados que sirvieron de base para vincular especies bacterianas específicas con una enfermedad particular: 1. El microorganismo debe encontrarse en todos los casos de la enfermedad en cuestión y su distribución en el cuerpo debe concordar con las lesiones observadas. 2. El microorganismo debe ser aislado en cultivo puro in vitro, durante varias generaciones. 3. Debe ser capaz de producir la enfermedad típica en animales susceptibles cuando se les inocula un cultivo puro. 4. Debe ser aislado a partir de las lesiones producidas en el animal experimental. Estos postulados han permanecido como el sostén o soporte principal de la Microbiología, pero a finales del siglo XIX se ha demostrado que muchos de los microorganismos patógenos no satisfacen los criterios de los 14

postulados. (Ejemplo: El Treponema pallidium (sifilis) y el Mycobacterium leprae (lepra) no crecen in vitro; sin embargo, existen modelos animales de la infección con estos agentes. En otro ejemplo, la Neisseria gonorrhoeae (gonorrea), no existe un modelo animal de la infección, pero la bacteria puede cultivarse con facilidad in vitro; se ha producido infección experimental en el ser humano, la cual substituye al modelo animal. Las bacterias patógenas incluyen las siguientes características:     

Capacidad de transmisibilidad. Adherencia a las células del hospedero.. Invasión de células y tejidos del hospedero. Toxigenicidad. Capacidad para invadir el sistema inmunitario del hospedero.

Transmisión de la Infección Las bacterias residen normalmente en determinados ambientes, por ejemplo en animales y humanos donde se adaptan y aseguran su supervivencia e incrementan su posibilidad de transmitirse. Cuando una bacteria que vive normalmente en las personas produce una infección asintomática o leve, aumenta la posibilidad de transmitirse de una persona a otra. Algunas bacterias que habitan sobre todo en animales pueden infectar a los humanos de manera accidental; por ejemplo: Salmonella, Campylobacter y Brucella infectan animales y se transmiten al ser humano a través de los alimentos. Otras bacterias como la Y. pestis que es un microorganismo no adaptado a los humanos, muestra un ciclo biológico bien establecido en los roedores y las pulgas de los mismos y, la transmisión por la pulga a los humanos es inesperada produciendo una enfermedad grave (la peste). Otro microorganismo como B. anthracis, que vive en el ambiente, a veces infecta animales y se transmite al ser humano a través de los pelos desprendidos de los animales. Otra formas de transmisión es por las secreciones que se producen en las enfermedades (diarreas, tos, secreción genital); estos productos con frecuencia promueven la transmisión del agente causal. Ejemplo: V. cholerae, M. tuberculosis, E. coli.

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Transmisión de persona a persona a través de las manos. Ejemplo: S. aureus, muchos patógenos oportunistas que causan infecciones nosocomiales. La puerta de entrada más frecuente de las bacterias patógenas son: Mucosas de las vías respiratorias, la vía digestiva, genital y urinaria, también la piel en caso de lesiones como heridas y quemaduras. Una vez que la bacteria entra al cuerpo del hospedero, como segundo paso, debe adherirse a las células de la superficie de un tejido; si no se adhiere será arrastrada por el moco y otros líquidos que bañan las superficies del tejido. La adherencia: Es solo un paso del proceso infeccioso y va seguido del desarrollo de las microcolonias. Las bacterias se adhieren a las células de la superficie de un tejido por acción de unas estructuras llamadas adhesinas, que se unen a receptores específicos conformados generalmente por azúcares específicos en la superficie tisular y evitan ser eliminados. Muchas de estas proteínas de adhesión están en las fimbrias o pelos (pili). Streptococcus pyogenes (A) utiliza el acido lipoteicoico y la proteína M para adherirse a las células del epitelio, estos compuestos se encuentran envolviendo las fimbrias. El acido lipoteicoico y más específicamente la porción lipídica (ligando) promueve la adherencia de Streptococcus a las células epiteliales de la boca a través de la fibronectina, que actúa como molécula receptora de las células hospederas. La proteína M actúa como molécula antifagocítica. Otro ejemplo de la adherencia son los pelos de la N. gonorrhoeae. La colonización: Se logra a través de una parte estructural de las bacterias patógenas conformada por una biopelícula que es una membrana viscosa compuesta por polisacáridos que mantienen unidas a las bacterias entre si y también a la superficie de la célula del hospedero. La cápsula: De estructura polipeptídica o polisacárida. Ejemplo: S. pnemoniae, Haemophilus influenzae, N. meningitis, y otros que también forman cápsula, hace que no puedan ser fagocitadas fácilmente y las protegen de las repuestas inmunes.

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1.8. Invasión a las Células del Tejido del Hospedero Una vez que la bacteria coloniza las superficies de las mucosas, las bacterias producen una o más proteínas bacterianas que se conocen con el nombre de invasinas y que están implicadas en la penetración celular. Estas invasiones o antígenos de invasión, interactúan con un receptor de la célula epitelial; por ejemplo: las invasinas de Yersenia interactúan con unas proteínas de adhesión de las células epiteliales llamadas integrinas; en el caso de la Salmonella el receptor puede ser el factor de crecimiento epidérmico y en el caso del S. pneumoniae, el receptor es el factor de agregación plaquetaria. Por lo tanto, las bacterias aprovechan para sus fines, las estructuras funcionales de las células. La interacción de las invasinas con su receptor, provoca la transmisión de una señal a través de la membrana citoplasmática, ocasionando la polimerización de la actina y miosina que forman el citoesqueleto y que finalmente son responsables de la invaginación de la membrana citoplasmática para englobar a una bacteria y formar una vacuola fagocitaria. Una vez en su interior, las bacterias pueden seguir distintas estrategias:  Multiplicarse intravacuolarmente  Salir al citoplasma y multiplicarse en él.  Salir al exterior de la célula por exocitosis, es decir, atravesar la mucosa.

Penetración a través de la piel: Esto se produce por toxinas o enzimas que degradan la matriz extracelular que cementa los tejidos o lisan las células. Por ejemplo: la matriz de los tejidos es rica en colágeno y acido hialurónico y algunas bacterias como C. perfringens, causante de la gangrena, produce enzimas colagenasas y hialuronidasas; la elastina que da elasticidad al tejido pulmonar puede ser degradada por la elastasa de P. aeruginosa, etc. Otra de las características de las bacterias patógenas, es su capacidad de producir enzimas, que son sustancias extracelulares, no tóxicas que permiten destruir los tejidos y logran el acceso a fuentes nutritivas e invadir el sistema inmunitario. A. Enzimas Destructoras de Tejidos 1. Lecitinasa: Que destruye la lecitina, que es una mezcla de fosfolípidos que se encuentra en los tejidos de animales, principalmente en el tejido del sistema nervioso. 17

2. Colagenasa: Que degrada el colágeno, que es una proteína que se encuentra en el tejido fibroso conjuntivo, debajo de la piel, cartílago y diferentes órganos. Esta permite a la bacteria diseminarse en estos tejidos. 3. Hialuronidasa: Que hidroliza el ácido hialurónico, que es una sustancia fundamental del tejido conjuntivo, esta enzima también favorece la diseminación en los tejidos. Ejemplo: Staphylococcus, Streptococcus y anaerobios. 4. Coagulasa: Coagula el plasma debido a la conversión del fibrinógeno en fibrina. Contribuye a la formación de paredes de fibrina alrededor de las lesiones formadas por Staphylococcus y esto le ayuda a persistir en la infección localizada; también se forma la pared de coágulo alrededor de los Staphylococcus, lo que les ayuda a protegerse contra la fagocitosis. 5. Estreptocinasa: (Fibrinolisina) Activa una enzima proteolítica del plasma, disolviendo el plasma coagulado y favoreciendo la diseminación de los Streptococcus a través de los tejidos. 6. Citolisinas: Son sustancias que disuelven eritrocitos (hemolisinas) o que destruyen las células tisulares o leucocitos (leucocidinas), por ejemplo: Streptococcus del grupo A producen estreptolisina que hemolisa los eritrocitos. También las producen cepas de Staphylococcus y de otras bacterias. B. Proteasa Ig A Producida por un gen codificador de enzimas que divide las uniones específicas (prolina-treonina o prolina-serina), que se encuentran en la región de la bisagra de la cadena pesada de la Ig A, inactivándola como anticuerpo. La producen Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, H. influenzae, S. pneumoniae y otras. Otra actividad de las bacterias patógenas es la producción de toxinas que se diseminan mediante la sangre u otros fluidos corporales (LCR).

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1.9. Las Toxinas Bacterianas Existen muchas toxinas elaboradas por diferentes cepas bacterianas. Son sustancias que tienen efecto toxico en el hospedero.  Son sustancias que interfieren en los mecanismos de defensa del hospedero.  Se diseminan mediante la sangre u otros fluidos corporales (LCR)  Se dividen en 2 grupos: A. Exotoxinas, que se liberan fácilmente de la célula bacteriana. B. Endotoxinas, que están íntimamente conectadas a las células bacterianas y son liberadas por lisis de la bacteria. A. Toxinas Extracelulares (Exotoxinas) Son de naturaleza proteica y tienen actividad enzimática, se dividen en 2 grupos: a) Toxinas proteicas con 2 componentes De 2 componentes, en la cual uno de ellos está asociado con la adsorción a la superficie de una célula susceptible (específica) y sirve de fuente o canal para que el otro componente sea transferido a la membrana celular (se sugiere que es un mecanismo de formación de un túnel con canales hidrófilos). Ejemplo: En la toxina producida por el agente del cólera, el componente B se une a los gangliósidos de la superficie celular para que la porción o componente A atraviese la membrana celular, efecto que produce una profusa diarrea con pérdida de electrolitos, la cual es potencial y letal. También es una cualidad de algunas cepas de E. coli. b) Citolisinas bacterianas Citolisinas, que lesionan las membranas de los eritrocitos, produciendo hemólisis. También lesionan las células blancas (leucocitos). Ejemplo: Clostridium. Staphylococcus, Streptococcus. B. Endotoxinas  Que están íntimamente ligadas a las células bacterianas (bacterias Gram -). 19

 Se requiere de gran manipulación química para extraerlas de la pared celular bacteriana.  Están compuestas de proteínas polisacáridas y lípidos. La acción toxica se adjudica a la porción lipídica.  Son menos estables al calor que las exotoxinas y no forman toxoide.  Son menos tóxicas y menos especificas.

Todos estos mecanismos ocasionan síntomas, cuya gravedad depende de: 1. De la importancia del órgano afectado 2. De la extensión del daño causado por la infección. Por ejemplo: las infecciones del SNC son siempre graves. 3. De la cepa bacteriana y el tamaño del inóculo. Estos dos son factores fundamentales para determinar si se va a producir la infección, sin embargo el tamaño del inóculo puede variar desde relativamente pequeño (por ejemplo: menos de 200 células de Shigella – Shigelosis o disentería bacilar), hasta inóculos grandes (por ejemplo: 108 células de V. cholerae o Campylobacter). Los factores del hospedero también pueden desempeñar un papel determinante, por ejemplo si la dosis infectante (DI) de Salmonella es de 106 para que produzca enfermedad en una persona sana, esta dosis disminuye cuando el pH del jugo gástrico del individuo es neutro. Otros factores que también incrementan la susceptibilidad del individuo son:  Los efectos congénitos.  Las situaciones de Inmunodeficiencia y las alteraciones producidas por otras enfermedades.  Patógenos oportunistas.

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SECCIÓN 1: LAS ESPIROQUETAS Género: Treponema Especie: Treponema pallidum (agente causal de la sífilis) Características Morfológicas:  Tiene forma de espiras delgadas.  Tiene movilidad activa, girando constantemente alrededor de su filamento axial, incluso después de haberse fijado a la célula del huésped.  Las espiras son tan delgadas que no pueden ser observadas al microscopio con facilidad a menos que al frotis se le aplique nitrato de plata y se observe en campo oscuro, o se tiña con suero antitreponémico marcado con fluoresceína y se examine al microscopio en busca de espiroquetas fluorescentes típicas. Cultivo: Solo se hacen cultivos tisulares utilizando células epiteliales de conejo e incubándolas en una atmósfera de oxígeno reducida; en estas condiciones mantiene su virulencia y su tiempo de generación es de 30 horas. Estructura Antigénica: Estimulan la producción de una sustancia extracelular similar a un anticuerpo que se le denomina “Reagina” y que es determinado en el diagnóstico serológico. También producen anticuerpos Ig G e Ig M, igualmente válidos para el diagnóstico serológico. A pesar que se da una enérgica respuesta inmunológica por parte del hospedero frente a la infección, sin embargo la infección no es controlada ni erradicada. Durante la infección inicial, hacia el momento que aparece el chancro, pueden detectarse anticuerpos humorales Ig G e Ig M, que persisten largo tiempo en el paciente no tratado. Si el paciente es tratado en forma adecuada, los anticuerpos Ig M declinan durante los 2 años siguientes, pero los anticuerpos Ig G habitualmente persisten durante toda la vida del paciente. La inmunidad natural se ha visto incrementada, no se sabe si se debe a un cambio de la virulencia del microorganismo o por que las poblaciones han desarrollado una resistencia relativa a la infección. Patogenia: En Sífilis Adquirida, la infección natural se adquiere por contacto sexual y las lesiones primarias o “chancro duro” se encuentran generalmente sobre la piel o las mucosas de los genitales. Sin embargo en 10 a 20 % de los casos la lesión 21

primaria es intrarrectal, perianal u oral. Esta bacteria puede atravesar las mucosas intactas o penetrar a través de una herida en la epidermis. Las espiroquetas se multiplican localmente en el sitio de entrada y algunas se propagan a los ganglios linfáticos cercanos y después alcanzan la circulación sanguínea. De 2 a 10 semanas después de la infección, aparece en el sitio infectado una pápula, la cual se rompe para formar una úlcera de base dura y limpia denominada “chancro duro”. Esta lesión siempre cicatriza espontáneamente. Luego de 2 a 10 semanas más tarde aparecen las lesiones secundarias que consiste en exantema maculopapular eritematoso en cualquier parte del cuerpo, incluso manos y pies, también aparecen los “condilomas” que son pápulas pálidas y húmedas en la región anogenital, axilas y boca. Las lesiones secundarias también ceden espontáneamente. Tanto las lesiones primarias y secundarias son ricas en espiroquetas y muy infectantes y esto puede prolongarse de 3 a 5 años después de la infección, pero a partir de ese momento la persona ya no es infectante. La infección sifilítica puede permanecer sub-clínica y el paciente puede pasar por las 2 etapas sin síntomas hasta desarrollar las lesiones terciarias. En casi 30% de los casos, la infección avanza espontáneamente hasta la curación completa. En otro 30% la infección no tratada permanece latente. En el resto, la enfermedad progresa hasta la etapa terciaria, caracterizada por el desarrollo de lesiones granulomatosas llamadas “gomas” en piel, huesos e hígado, cambios degenerativos en el sistema nervioso central o lesiones cardiovasculares. En esta etapa las treponemas son poco frecuentes, sin embargo pueden encontrarse en los, ojos o el sistema nervioso central. Sífilis Congénita. Una mujer sifilítica embarazada, puede transmitir el T. pallidum al feto a través de la placenta, la infección se inicia entre la 10 a 15 semanas de gestación. Algunos fetos infectados mueren y el resultado es un aborto; otros nacen muertos a término. Otros nacen vivos, pero desarrollan signos de sífilis congénita en la infancia: queratitis intersticial, dientes de Hutchinson, nariz de silla de montar y varias anormalidades del sistema nervioso central. La destrucción asea tardía y la sífilis cardiovascular, son frecuentes en niños que no son tratados y que sobreviven a la presentación inicial de la enfermedad. Los resultados positivos de las pruebas serológicas en los hijos de la madres infectadas, pueden representar la transferencia pasiva de anticuerpos o una respuesta inmunológica específica a la infección. Estas dos posibilidades se distinguen midiendo el titulo de anticuerpos en los sueros del niño durante 6 meses. El título de anticuerpos en niños no infectados disminuye hasta valores no detectables a los 3 meses de nacer. En los niños con sífilis congénita permanecen elevados. 22

Sífilis: Penetran a través de mucosas y piel y se localizan en la piel, mucosas de órganos genitales u otros lugares. Del 10 al 20% es intrarrectal, perineal o bucal. Se multiplica localmente en los ganglios linfáticos regionales. En 2 a 10 semanas aparece una pápula en el sitio de entrada con características de una ulcera limpia y dura (chancro duro). La inflamación se caracteriza por el predominio de linfocitos y células plasmáticas que se cura espontáneamente. En 2 a 10 semanas después se desarrollan lesiones secundarias con exantemas mucocutáneas generalizadas en todas las partes del cuerpo y pápulas húmedas y pálidas (condilomas) en la región ano-genital, en las axilas y en la boca; además presentan un síndrome pseudogripal con dolor de garganta, cefaleas, fiebre, mialgia y anorexia. Las dos etapas de las lesiones son ricas en espiroquetas muy infecciosas. Después de 3 a 10 años, el 40% de los pacientes evoluciona hacia el periodo terciario que se caracteriza por lesiones granulomatosas (gomas) en la piel, huesos e hígado, produciendo cambios degenerativos en el SNC o lesiones cardiovasculares (pobres en espiroquetas). Diagnóstico de Laboratorio: Muestras. Líquidos de las lesiones superficiales en la sífilis temprana para demostrar la presencia de las espiroquetas. Suero sanguíneo, para pruebas serológicas. Observación microscópica en campo oscuro de la extensión hecha con el líquido de las lesiones a la cual se le trata con nitrato de plata o inmunofluoresceina. Pruebas serológicas para Sífilis (PSS): A. Antígenos no Treponémicos: Se usa como antígeno, la cardiolipina, que un lípido purificado, extraído del corazón de mamíferos. Con este antígeno se detecta la presencia de reaginas que se encuentra en el suero del paciente, después de 2 a 3 semanas de la infección no tratada y en líquido cefalorraquídeo después de 4 a 8 semanas de la infección. a) Floculación (VDRL= Venereal Disease Research Laboratory)

Cardiolipina Reagina (formando flóculos) La prueba positiva se vuelve negativa en 6 a 18 meses, luego de un tratamiento eficaz de la sífilis.

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b) Fijación de Complemento (FC = Wasserman - Kolmer)

Suero con Reagina Cardiolipina (+ GR de carnero) Complemento

Si el paciente es sifilítico, la reagina presente en el suero del paciente se une con la cardiolipina que se usa como antígeno y por ende hay fijación de complemento (no se produce lisis de glóbulos rojos). Si el paciente no es sifilítico, el complemento queda libre, por lo que se produce la lisis de glóbulos rojos de carnero. En ambas pruebas se puede obtener un resultado cuantitativo (estimación de la cantidad de reagina presente en el suero), cuando se utiliza diluciones progresivas, expresando el título como la más alta dilución que aún da resultado positivo; esto es valioso para establecer un diagnóstico y para valorar el efecto del tratamiento. Estas pruebas pueden dar resultados falsos positivos, debido a dificultades técnicas de la prueba, o a presencia de reagina en una gama de trastornos (sarampión, paludismo, lepra, trastornos reumáticos, etc.). Los falsos negativos se dan en sífilis terciaria, o sea un VDRL negativo no descarta dicha actividad patológica. B. Antígenos Treponémicos: a) Pruebas con Anticuerpos Treponémicos Fluorescentes (FTA) Se hace una extensión de microorganismos liofilizados de la cepa Nichols que va actuar como antígeno y que se fija a la lámina porta objetos, luego se aplica el suero en estudio (si tiene anticuerpos estos se fijan al antígeno), se lava nuevamente y se aplica ¥-globulina anti-humana marcada con fluoresceína. T pallidum muerto + suero del paciente + ¥-globulina antihumana marcada con fluoresceína. Se observa al microscopio en busca de treponemas fluorescentes. Este método es excelente para el diagnóstico en sífilis temprana y también para sífilis congénita, determinando la presencia de Ig M.

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b) Prueba del TPI Demuestra la inmovilización del T. pallidum por anticuerpos específicos del suero del paciente, después de la segunda semana de infección. Se utiliza suero del paciente con complemento + T. pallidum vivo y móvil extraído de chancros testiculares de conejo, luego se hace una observación microscópica en campo oscuro. Esta prueba se basa en la capacidad del anticuerpo y el complemento de inmovilizar una suspensión de Treponemas vivas y móviles, pero también da positivo en treponematosis no venéreas como: Pinta, Bejel y Frambesia.

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Género: Leptospira Especie: Leptospira interrogans Leptospira interrogans es la causa de la leptospirosis. Se divide en serogrupos que causan enfermedad en diferentes animales y áreas geográficas. Cada serogrupo se divide a su vez en serotipos. Las leptospiras infectan varios animales, incluyendo la rata y otros roedores, ganado doméstico y animales de compañía. En los Estados Unidos, los perros son el reservorio más importante. Los animales eliminan leptospiras en la orina, que contamina los cuerpos de agua. Nadar en aguas contaminadas o consumir bebidas o comida contaminadas son los principales mecanismos de infección en los seres humanos. Las personas que trabajan en alcantarillas presentan un riesgo elevado. La infección en seres humanos se produce cuando las leptospiras son ingeridas o pasan a través de las membranas mucosas o la piel. Características Morfológicas:  Son espiroquetas delgadas y flexibles, enrolladas estrechamente  Presentan un activo movimiento de rotación por la presencia de dos filamentos axiales, insertados una en cada extremo de la célula.  Este microorganismo solo se observa cuando se aplica al extendido nitrato de plata y observado al microscopio en campo oscuro. Cultivo:    

Es aerobio. Su temperatura óptima de crecimiento está entre 28 a 30 ºC. Su pH óptimo es de 7.2 a 7.4. El medio de cultivo selectivo para su crecimiento en el laboratorio es el medio de Fletcher, es semisólido rico en proteínas, donde crece al cabo de 6 a 10 días, formando colonias redondas de 1 a 3 mm. de diámetro. El tiempo de generación en este medio es de 12 a 16 horas. También crece en la membrana corioalantoidea de huevos embrionados y en animales inoculados, en este último tiene un tiempo de generación de 4 a 8 horas.

Determinantes de Patogenicidad: Endotoxina.- Que produce toxemia (toxicidad en sangre) Hemolisina.- Probablemente de naturaleza proteica, termolábil y soluble; causante de las hemorragias. Antígeno leptospirósico.- Que sensibiliza a las células del tipo W de la conjuntiva produciendo irritación. 26

Además las cepas virulentas son menos sensibles al efecto leptospirocida del suero inmune y el complemento. Los macrófagos no son bactericidas para las leptospiras virulentas a menos que estén en presencia de Ig. Patología: La infección se produce por ingestión de agua y alimentos contaminados con leptospiras, luego pasa por un período de incubación de 1 a 2 semanas. La enfermedad es bifásica: 1ª fase.- Se inicia con fiebre y la presencia de leptospiras en la sangre, luego se establecen en órganos parenquimatosos (hígado y riñón) por lo que son eliminados también por la orina, produciendo necrosis y hemorragia en estos órganos originando disfunción de los mismos, produciendo ictericia, hemorragia y retención de nitrógeno con acumulación de úrea y creatinina en los riñones. 2ª fase.- Coincide con el aumento de Ig M. Generalmente se presenta con meningitis aséptica, con cefalea intensa, rigidez de cuello y pleocitosis (aumento de leucocitos en LCR). También puede volver a presentarse nefritis y hepatitis. Diagnóstico de Laboratorio: Muestras: a) Sangre.- Para la observación directa en campo oscuro o frotis grueso teñido con Giemsa. b) Orina.- Para examen en campo oscuro de la orina centrifugada. c) Suero.- Para realizar aglutinaciones: macroscópica empleando como antígeno leptospiras formolinizado y microscópicamente empleando como antígeno leptospiras vivas. d) Cultivo.- En medio de Fletcher, a partir de la sangre total o de la orina. e) Inoculación en animales.- Se inocula la sangre o la orina intraperitonealmente a cobayos; al cabo de 10 días el animal muere y se obtiene leptospiras de la cavidad intraperitoneal o de las lesiones hemorrágicas de los tejidos.

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SECCIÓN 4: BACILOS Y COCOS GRAM NEGATIVOS Género: Pseudomonas Especie: Pseudomonas aeruginosa Está entre los tres bacilos Gram negativos más frecuentemente aislados a partir de la sangre. Tiene una amplia distribución en la naturaleza, preferentemente en ambientes húmedos. Constituye un saprófito cuando coloniza individuos sanos. Es un patógeno en personas inmunodeficientes, representando la causa más común de las neumonías hospitalarias. Características Morfológicas:    

Es un bacilo Gram negativo. Presenta movilidad por flagelo polar único. Presenta capa de polisacárido extracelular semejante a la cápsula. Posee cilios que promueve la adherencia a la superficie celular del huésped.

Cultivo:  Para su crecimiento es extremadamente adaptable a más de 80 compuestos orgánicos diferentes; crece en medios para enterobacteriáceas y por tolerar condiciones alcalinas también crece en medios para Vibrio.  Es aerobio.  Produce β-hemólisis en agar sangre.  Temperatura óptima de crecimiento es de 35 a 42 ºC, esta propiedad la diferencia de las demás especies del género.  Temperatura óptima a 37°C.  En los medios de cultivo sólidos, forma colonias húmedas, redondas y lisas con cierto olor a uvas y de un color verde azulado.  Produce pigmentos de color verde fluorescente (fluoresceína) y azul (piocianina).  A veces puede formar muchos tipos de colonias en un solo cultivo, como si se tratara de un cultivo mixto: cada tipo puede tener actividad bioquímica y enzimática diferente, así como diversos patrones de sensibilidad quística, formando colonias mucoides por excesiva producción del exopolisacárido.  El agar cetrimide es el medio de cultivo selectivo para esta bacteria, siendo el compuesto inhibidor el bromuro de N-cetil N,N,N- trimetil amonio, que inhibe a los microorganismos que no son idénticos a P. aeruginosa.

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Estructura Antígena:  Antígeno somático que determina hasta 17 serotipos diferentes  Tipificación con fases y con piocianina (bacteriocina), que es más compleja.  Antígeno K en la capa mucosa. Determinantes de Patogenicidad:  Pelos o fimbrias.- Que sirven para la fijación a la célula epitelial del hospedero.  Cápsula o capa mucosa.- Sirve para la adherencia lo que permite la formación de microcolonias en el lugar de la infección. También impide la fagocitosis.  Ambos (pelos y cápsula) constituyen factores de colonización, pero no se adhieren a células normales ni en proceso de regeneración, sino únicamente a células lesionadas.  La pared del cuerpo que está constituida por LPS, es causante de muchas propiedades endotóxicas.  Produce 2 hemolisinas y una de ellas contribuyen a la invasividad del microorganismo por destrucción del tejido pulmonar.  Produce 2 proteasas que son las responsables de las lesiones hemorrágicas cutáneas.  La Exoenzima A, que produce necrosis tisular mortal: bloquea la síntesis de proteína de la célula produciendo necrosis y el órgano más afectado es el hígado.  Enterotoxina.- Que puede producir infección de transmisión alimentaria. Patogenia: P. aeruginosa sólo es patógena cuando se introduce en regiones desprovistas de defensas normales, por ejemplo, mucosas y piel lesionadas por daño tisular directo (quemaduras); empleo de catéteres intravenoso o urinario; o cuando hay neutropenia como en la terapia contra el cáncer. Las bacterias se unen a las mucosas o a la piel y las colonizan; invaden localmente y producen enfermedad sistémica. P. aeruginosa produce infección en heridas y quemaduras, formando pus color azul verdoso; cuando se produce por punción lumbar causa meningitis, e infección del aparato urinario cuando la vía de entrada son catéteres, instrumentos o soluciones irritantes. Las afecciones del aparato respiratorio, en especial por aparatos respiradores contaminados, producen neumonía necrosante. Esta bacteria se observa con frecuencia en la otitis externa leve de los nadadores. En pacientes con diabéticos puede causar otitis externa invasora (maligna). La infección del ojo, que puede conducir a una destrucción rápida de ese órgano, ocurre con mayor frecuencia después de procedimientos o lesiones quirúrgicas. En lactantes y personas debilitadas puede invadir el torrente sanguíneo y causar septicemia mortal. 29

Diagnóstico de Laboratorio: 1. Muestra. Puede ser pus de las lesiones cutáneas, orina, sangre (en caso de septicemia, osteomielitis, endocarditis, meningitis y neumonía), líquido cefalorraquídeo (en caso de fibrosis quística y neumonía), esputo y otros materiales, según lo indique el tipo de infección. La toma de muestra en caso de neumonía es importante que sea esputo y no saliva. Una muestra es fiable si tiene más de 25 leucocitos y menos de 10 células epiteliales por campo de 100X. Si el paciente no puede toser es necesario hacer lo siguiente: Inducir el esputo, hacer una aspiración trans-traqueal, un lavado branquial o una biopsia de pulmón. Sistema respiratorio ==> fibrosis quística, quemaduras ==> piel. 2. Observación microscópica. Haciendo un extendido y coloreando con la técnica de Gram, donde se observa sus características morfológicas y su afinidad al Gram negativo. 3. Aislamiento. Siembra en agar nutritivo y en agar cetrimide para ver características de las colonias y producción de pigmentos. 4. Cultivo. En agar sangre y en los medios diferenciales que se emplean para bacilos entéricos, creciendo como colonia transparente, no fermentadora de la lactosa. 5. Identificación:  Prueba de la oxidasa  Prueba de OX/FER con glucosa (la metaboliza oxidativamente), lo cual nos permite diferenciarlas de las Plesiomonas, Aeromonas y Vibrio que tienen metabolismo fermentativo.  Prueba de OX/FER con maltosa; se utiliza para diferenciar especies: P. aeruginosa, P. alcaligenes, P. putida, P. fluorescens, estas especies se diferencian por la temperatura de crecimiento a 42°C, por ejemplo: P. aeruginosa crece y P. alcaligenes no crece. Pruebas GRAM Oxidasa Ox/Fer Gluc.

Ox/Fer Malt Crec. 42°C

Pseudom. -+

Enterobac. ---

Vibrio -+

Aerom. -+

Plesiom. -+

Ox

Fer

Fer

Fer

Fer

P. putida d --

P. fluorescens d --

P. aeruginosa -+

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P. alcaligenes --

Microorganismos Fijadores de Nitrógeno: Familia: Rhizobiaceae. Género: Rhizobium Entre las especies fijadoras de nitrógeno se encuentran las cianobacterias (Anabaena y Nostoc), arqueobacterias (Methanococcus), bacterias grampositivas (Frankia y Clostridium), enterobacterías (Klebsiella) y otras proteobacterias (Rhizobium, Azospirillum y Acetobacter, entre otras). Algunas familias de plantas emparentadas entre sí, gozan de la capacidad para asociarse en simbiosis con bacterias fijadoras de nitrógeno. Las plantas en cuestión alojan a las bacterias en estructuras especiales llamadas nódulos que se forman en sus raíces. En los nódulos, las bacterias fijan el nitrógeno. Individuos de los géneros Rhizobium, Bradyrhizobium y Azorhizobium, penetran en las raíces y a veces en los tallos de las leguminosas, mientras que Frankia (Gram positiva) y otros actinomicetos son las responsables de la fijación de nitrógeno en Casuarina y otras especies. Características: Son bacilos ciliados, aerobios que pueden presentarse bajo 3 formas: pequeños bastoncitos, pequeñas células globosas o micrococos o como bastoncitos mayores sin flagelos muchas veces con gránulos prominentes de β-hidroxibutirato. Son heterótrofos, comprenden formas gran negativas, móviles en estado juvenil pasando a la forma de bacteroide durante la simbiosis en los nódulos o en medios artificiales que contienen alcaloides. Viven como saprófitos en el suelo hasta hallarse en la proximidad de una raíz viva de leguminosa, a la que penetra a través de los pelos radiculares. Se desarrollan en forma optima entre 25 - 30°C y a un pH de 6.7. Descripción General de la Simbiosis de Rhizobium con las Leguminosas: Los Rhizobium son bacterias Gram negativas y aerobias que se conocen con el nombre de bacterias fijadoras de nitrógeno. Los demás organismos de la naturaleza no pueden asimilar el N2 de la atmósfera. Estas bacterias pertenecen a la familia: Rhizobiaceae. Entre ellos se encuentran los géneros Rhizobium, Bradyrhizobium y Azorhizobium. Estos microorganismos del suelo, forman una asociación simbiótica con distintas especies de plantas tetraploides y durante la simbiosis son capaces de llevar a cabo la fijación de nitrógeno molecular. En la simbiosis, las bacterias se encuentran en las raíces de las plantas dentro de estructuras llamadas nódulos rizoidales. Ni las plantas ni estas bacterias aisladamente fijan el nitrógeno molecular (N2) para convertirlo en amonio. La simbiosis es inhibida si existe un exceso de nitrato o amonio en el suelo. Dentro de los nódulos, las bacterias se convierten en bacteroides que son células de forma irregular y más grandes que los Rhizobium que se encuentran 31

en el suelo, estas llevan a cabo la fijación de nitrógeno porque son capaces de formar la enzima nitrogenasa que es responsable de la conversión del nitrógeno molecular en amonio, además de la hidrolasa del ATP. Debido a esta simbiosis, la planta recibe nitrógeno que puede utilizar para sí misma, mientras que las bacterias utilizan moléculas (carbohidratos, producto de la fotosíntesis) que les proporciona la planta. Se ha confirmado que la información genética que determina la especificidad de los Rhizobium para cada especie de leguminosa es de origen extracromosómico, es decir del plásmido y que además existen muchos genes de Rhizobium característicos de la simbiosis como por ejemplo los genes nod, nol, nif y fix. Los nódulos aparecen rojos por causa de una proteína llamada leghemoglobina. Después de la fase de fijación de nitrógeno, el color del nódulo llega a ser verde debido a la conversión de leghemoglobina en biliverdina. La leghemoglobina protege a la nitrogenasa de los altos niveles de oxígeno y evitan la inactivación de esta enzima. Cada tipo de Rhizobium tiene un espectro específico de plantas con las que es capaz de formar nódulos. Por ejemplo, Bradyrhizobium japonicum forma una simbiosis con Glycine max, Rhizobium leguminosarum bv.viciae con Pisum sativum o Vicia faba, Rhizobium (Sinorhizobium) meliloti con Medicago sativa y Azorhizobium caulinodans con Sesbania rostrata. Azorhizobium caulinodans es capaz de fijar nitrógeno también fuera de su planta hospedadora. Por eso, en presencia de estas bacterias simbióticas las leguminosas pueden crecer en suelos que no tienen suficiente nitrato o amonio para un desarrollo normal de la planta. Por esta razón los Rhizobium pueden ser utilizados como inoculantes para mejorar el crecimiento de leguminosas en lugar de abonos. Reconocimiento entre planta y Rhizobium: Las raíces de plantas forman exudados que inducen la expresión de genes rhizobiales que son característicos para el comienzo de la simbiosis. Uno de esos factores son flavonoides que producen una interacción con la proteína codificada por el gen nodD. La proteína NodD y las substancias flavonoides forman parte del reconocimiento hospedador-específico debido a que no todos los flavonoides pueden interactuar con una NodD de una especie bacteriana dada. Después, las proteínas codificadas por los genes nod catalizan la formación de los metabolitos nod. Esos son oligómeros de N-acetil glucosamina con algunas alteraciones químicas. Invasión: La invasión de las plantas se lleva a cabo por los pelos radiculares. Las bacterias inducen una curvación de esos pelos mediante el contacto con la planta y la producción de metabolitos nod. Las bacterias invaden las plantas mediante el desarrollo de canales de infección, por lo que se forman túneles transcelulares. Durante la penetración, y la simbiosis, las bacterias no quedan alojadas directamente dentro del citoplasma de las células de la planta 32

hospedadora, sino que permanecen alojadas en “vesículas” rodeadas por una membrana derivada de la membrana citoplasmática de la célula de la planta. Nitrogenasa: La nitrogenasa es la enzima responsable de la reducción de nitrógeno atmosférico a amonio en la simbiosis entre Rhizobium y leguminosa. Se compone de las proteínas NifH, NifD y NifK. La nitrogenasa contiene dos proteínas NifD y dos proteínas NifK. Esas cuatro proteínas forman la dinítrogenasa. Además, la nitrogenasa contiene dos proteínas NifH que sirven como reductasa de la dinítrogenasa. Para la reducción del nitrógeno, se transportan electrones de reductasa de la nitrogenasa a la dinítrogenasa y finalmente al nitrógeno. El amonio formado durante la fijación, del nitrógeno es proporcionado a la planta en forma de aminoácidos. Hidrogenasa: Esta proteína no es sintetizada por todas las especies de la familia Rhizobiaceae y cataliza la reacción de oxígeno con el hidrógeno formado durante la fijación del nitrógeno. De esta forma reduce la concentración del hidrógeno y del oxígeno dentro del nódulo. Existen especies de Rhizobium que tienen la posibilidad de utilizar la energía que resulta de esa reacción para formar ATP. Leghemoglobina: Leghemoglobina es una proteína que contiene una porción hemo. La subunidad hemina es formada por las bacteroides, mientras que la globina es formada por la planta. Leghemoglobina es responsable del color rojo de los nódulos activos. Sirve para limitar la concentración de oxígeno dentro del nódulo. De esta forma los bacteroides reciben suficiente oxígeno para sobrevivir y se evita que la nitrogenasa pueda ser inactivada por el oxígeno. Genes nod: Se diferencian en genes comunes de nodulación, nodA, nodB y nodC, y en genes nod que son del hospedador-específico. Existe una regulación de los genes de la fijación de nitrógeno a base al gen nodD. El producto de este gen interactúa con los flavonoides característicos producidos por la planta hospedadora y por eso es responsable de la especificad de las simbiosis. Debido a la interacción con los flavonoides de la planta, la proteína NodD activa la transcripción de genes, que por su parte tienen una “caja de nodulación”. Esta se encuentra en la región donde está el promotor de los genes regulados por nodD. La expresión de estos genes es específica para la simbiosis. En el grafico 1, se pueden apreciar los siguientes eventos:

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Figura 1. Dinámica de formación de un nódulo en la raíz en una leguminosa causado por Rhizobium. 1. Rhizobium libre. 2. Rhizobium atraído por el pelo radical. 3. Inicio de la infección por Rhizobium en el pelo radical. 4. Cayado del pastor (pelos radicales, infectados por Rhizobium) 5 y 6. El cordón de infección de Rhizobium invade la matriz de células corticales de la leguminosa en la raíz. 7. Rhizobium se reproduce en células haploídes de la raíz y pierde su pared celular. 8. Sobreproduce auxína. 9. Resultado se da la hipertrofia radical y aparece el nódulo. 10. Rhizobium sin pared (bacteroíde) en las células corticales fija nitrógeno. 11. El nódulo con leghemoglobina fija N2.

Recordar:  Se determinó que el Rhizobium es una bacteria que forma nódulos con las leguminosas y fijan nitrógeno atmosférico.  Los nódulos son estructuras que se forman en las raíces de las leguminosas, alojan a las bacterias en su interior. En estas estructuras las bacterias se trasforman en bacteroides, que son los encargados de fijar el nitrógeno atmosférico.  El bacteroide es mayor que la bacteria, posee una forma irregular y se muestra más sensible a cambios de presión osmótica. Además, los bacteroides llevan a cabo la fijación de nitrógeno porque son capaces de formar la enzima nitrogenasa que es responsable de la conversión del nitrógeno molecular en amonio.  No todas las especies de leguminosas forman simbiosis con Rhizobium. Las más conocidas son las que tienen valor comercial y alimentario para el ser humano o para el ganado, como el fríjol, la soja, el chícharo, la lenteja, el haba y la alfalfa.  La fijación biológica del nitrógeno es una biotecnología agrícola respetuosa con el medio ambiente y representa una alternativa a la fertilización nitrogenada, evitando la contaminación de suelos y aguas por nitratos. 34

Aislamiento de Rhizobium: 1. Raíz leguminosa 2. Seleccionar los nódulos Rojos (pigmento rojo = presencia de leghemoglobina) 3. Lavar en agua de caño 4. Lavar en agua destilada estéril (2 veces) 5. Desinfectar en alcohol de 95° por 30 minutos 6. Lavar 7. Sumergirlo en HgCl2 al 1/1000 x 3 a 4 min o lejía al 10% 8. Lavar con agua destilada x 5 veces (escurrir bien) 9. Triturar los nódulos con 2 gotas de agua destilada estéril. Se puede realizar coloración Simple para observación microscópica 10. Sembrar en Medio de YMA con Rojo de Congo. Incubar a temperatura ambiente x 4-5 días. 11. Colonias rosadas y mucosas transparentes. (Bacilos con cápsula) Composición de Medio YMA: (Agar Manitol - Rojo de Congo y extracto de levadura) Extracto de levadura 0.4g K2HP04 0.5g Mg2S04, 7 H20 0.2g NaCl 0.1g Manitol. 10g Rojo de Congo 0.05g Agar-Agar 17g Agua destilada 1 litro pH 6.8-7 Medios de Cultivo: Rhizobium crecen bien en medios que contengan extracto de levadura manitol, extracto de plantas, pero no se multiplican bien en medios que contienen peptona (que es utilizado por muchas bacterias como fuente de nitrógeno). En el medio mencionado, la levadura es la fuente de nitrógeno, el manitol es fuente de carbono que puede ser sustituido por glucosa o sacarosa. Siembra: Colocar 1ml. de la dilución 10-1 y 10-2, depositarlas en las placas petri con agar-agar fundido y mezclar por rotación un sentido de las agujas del reloj y en sentido contrario. Incubación: A 25°C por 5 días para rizobios de crecimiento rápido y durante 10 días para los de crecimiento lento. Crecimiento: Colonias incoloras o blancas con moderada a mucha formación de goma en agar levadura, y en agar levadura-Manitol-rojo de congo; generalmente presentan un aspecto incoloro o levemente rosado. La nodulación es la prueba confirmativa al 100%. 35

II UNIDAD: Género: Neisseria Especie: Neisseria gonorrhoeae Características Morfológicas: Tiene forma de cocos Gram negativos, no móviles. Individualmente tiene forma de riñón, pero generalmente se emparejan por los lados cóncavos.

Cultivo:  En agar chocolate ya que requiere de hemina y otras proteínas animales  Se incuba en una atmósfera con oxigeno reducido, con 2 a 8% de CO 2, que además le da el beneficio del aumento de humedad. Las colonias se desarrollan como mucoides, convexas, elevadas y pueden ser transparentes u opacas, de 1 a 5 mm. de diámetro, no pigmentadas y no hemolíticas.  Thayer Martín es un medio selectivo que permite el aislamiento de neiserias, de muestras contaminadas con otros microorganismos debido a que contiene: vancomicina que inhibe a las bacterias Gram positivas, colistina que inhibe a las Gram negativas y nistatina que inhibe el desarrollo de levaduras. Determinantes de Patogenicidad: Los Pelos.- Las neiserias que presentan pelos son virulentos y forman en los cultivos colonias pequeñas y densas, las que no presentan pelos son avirulentas y forman colonias grandes y granulosas. Los pelos confieren a la pared celular de esta bacteria una mayor capacidad de adherirse a la célula del huésped y entre sí. Las neiserias virulentas pueden ser fagocitadas por los leucocitos polimorfos nucleares, pero la fagocitosis no resulta exitosa, por lo tanto no ocurre la lisis del microorganismo dentro del fagocito; el polimorfo nuclear puede ser fagocitado por el gonococo, llevándole intracelularmente vivo. Esto es una característica que se observa en el frotis de una secreción de un paciente con gonorrea. Ig A proteasa.- Es una enzima que rompe la Ig A, que es el anticuerpo que constituye la defensa primordial en las superficies mucosas; presumiblemente esta enzima le permite al gonococo adherirse a las superficies mucosas, incluso en presencia de una respuesta de anticuerpos secretores.

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Los LPS de la pared celular, a la cual se le asume los efectos endotóxicos de esta infección. Diagnóstico de Laboratorio: 1) Muestra :     

Secreción uretral. Secreción endocervical. Secreción conjuntival. Líquido sinovial purulento. Sangre – infección diseminada.

2) Examen microscópico. Tinción Gram, en que lleva a diagnósticos equivocados debido a la presencia en la muestra de microorganismo saprofitas morfológicamente similares. 3) Cultivos. las muestras derivadas de sitios normalmente estériles deben ser inoculados en medios no selectivos como agar chocolate. Para muestras contaminadas se utiliza medios selectivos de Thayer Martín (agar chocolate + vancomicina que inhibe a las Gram (+), colistina que inhibe a las Gram (-) y nistatina que inhibe levaduras), a este medio se recomienda agregar almidón, colesterol o albúmina para neutralizar el efecto inhibidor de las Ac. grasos.  Se inocula 2 – 8 % de CO2 (favorece la humedad necesaria por el cultivo liberados a partir de los eritrocitos).  A las 48 horas desarrollan colonias mucoides, convexas elevadas, pequeñas, típicas, un asilamiento primario (bacterias con pili). Se presentan variantes opacas y transparentes. Se identifican a partir de cultivos :

Diplococos Gram (-) Oxidasa (+) Catalasa (+) Fermenta la glucosa. No fermenta la maltosa, lactosa, sacarosa.

4) Serología. el suero y liquido genital contienen anticuerpos Ig G y Ig A contra los pili, la proteína de la membrana externa y el LPS del gonococo. Se identifica la presencia utilizando la prueba de ELISA y el radio inmunoensayo. 37

Género: Brucella Especie: Brucella melitensis Especie: Brucella abortus Especie: Brucella suis Son pequeños parásitos obligados de animales y humanos que producen la Brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de malta). En general:

   

B. melitensis, infecta a cabras. B. abortus, ganado bovino. B. suis, infecta a cerdos. B. canis, perros.

Todos ellos infectan al hombre. Otras especies se encuentran solo en animales de acuerdo a estudios de similitud del ADN demuestran que solo existe una especie en el género: B. melitensis con múltiples biovariedades. Esta bacteria penetra en el cuerpo humano mediante la ingestión de derivados lácteos contaminados, o a través de la piel mediante contacto directo con animales infectados, como por ejemplo en mataderos. Características Morfológicas:  En cultivos jóvenes varían desde cocos hasta bacilos con predominio de las formas coco bacilares cortas.  Son Gram (-) tiñéndose en forma irregular, requiriendo 3 minutos con safranina.  Son inmóviles y no esporulados.  Cápsula pequeña en variantes lisas o mucoides. Cultivo:  Aerobios estrictos.  Solo B. abortus requiere entre 5 – 10 % de CO2.  Como están adaptadas al hábitat intracelular, requieren de medios complejos para el aislamiento primario, que contengan vitaminas, sales, aminoácidos y glucosa, tales como: agar suero dextrosa o agar tripticasa y soya donde crecen lentamente, al cabo de 2 – 5 días desarrollan colonias pequeñas, convexas, lisas y húmedas.  Utilizan los carbohidratos pero no producen ácidos ni gas en cantidades suficientes para ser utilizados en su clasificación; para esto se utiliza su capacidad de producir H2S y el crecimiento en presencia de colorantes como 38

tiónica y la fucsina básica. Las 4 especies que infectan al hombre son: Catalasa +, oxidasa + y reduce NO3 – NO2.  Las Brucellas son moderadamente sensibles al calor y a la acidez, la pasteurización las matan.

Variantes:  Se presentan variantes lisas, mucoides y rugosas por el aspecto de la colonia, lo cual está en relación con la virulencia.  Los microorganismos virulentos típicos forman colonias lisas y transparentes; bajo cultivo tienden a experimentar mutación hacia la forma rugosa que es avirulento.  El suero de los animales sensibles contiene una globulina y una lipoproteína que suprime el crecimiento de los tipos avirulentos pero favorece el crecimiento de los tipos virulentos. Estructura Antigénica: Es probable que se encuentren 2 antígenos de LPS, que son el A y el M, en diferentes proporciones en las 4 especies y además un antígeno L superficial que se parece al antígeno Vi de la Salmonella en total se ha llegado a determinar antígenos A, M y G en diferentes proporciones en cada especie Determinantes de Patogenicidad: 1. Su capacidad de sobre vida y multiplicación intracelular, lo que le permite llegar a los ganglios y otros tejidos, aunque se desconoce el mecanismo por el cual lo logra. Los microorganismos lisos son fagocitados más lentamente que los microorganismos rugosos y además no son destruidos en la célula hospedera, pudiendo incluso multiplicarse dentro de ella. Las bacterias están protegidas en el fagosoma y ni los microorganismos. lisos, ni los rugosos pueden estimular la producción de enzimas necesarias para la ingesta. Los primeros experimentos atribuían la sobrevida en fagocitos a la pared celular de las brucelas. 2. Las cepas rugosas de Brucella (no virulentas) poseen antígenos accesibles a los anticuerpos, mientras que esto no ocurre con las cepas lisas. Las cepas rugosas parecen unirse con Ig G y otras proteínas séricas en forma no específica mientras que las cepas lisas no lo hacen. Estas observaciones son compatibles con la hipótesis que a medida que los microorganismos se toman rugosos quedan expuestas las proteínas de 39

la membrana externa; y estos cambios en la superficie se relacionan con la pérdida de la virulencia. 3. la composición de LPS de la pared celular varía entre un microorganismo liso y rugoso. Los microorganismos presentan fracciones de LPS solubles en fenol y agua. los microorganismos rugosos presentan fracción de LPS únicamente solubles en agua. 4. B. abortus presenta predilección por los tejidos fetales de los bovinos debido a que es rico en eritritol, alcohol, que las cepas virulentas utilizan como una fuente de carbohidratos para incrementar su crecimiento, esto no lo hacen las cepas avirulentas. Hay una significativa correlación del órgano tropismo de las vacunas con la presencia del eritritol. La infección se produce por consumo de leche fresca y productos lácteos preparados con leche sin pasteurizar, o por contacto con el animal infectado, ya sea en granjas o mataderos. Una vez ingresado la bacteria al hospedador, tiene un periodo de incubación de 1 a 6 semanas. Los microorganismos avanzan hacia los conductos linfáticos, ganglios linfáticos regionales, hasta el conducto torácico y la corriente sanguínea, la cual las distribuye a los órganos parenquimatosos (hígado y bazo). Los anticuerpos Ig M aumentan durante la primera semana de la enfermedad aguda y alcanzan su máximo a los 3 meses y puede persistir durante la enfermedad crónica. Los anticuerpos Ig G aumentan casi 3 semanas después de iniciada la enfermedad aguda, alcanzan su máxima producción de 6 a 8 semanas y permanece así durante la enfermedad crónica. La producción de la Ig A es paralela a la de la Ig G. Diagnóstico de Laboratorio: 1. Muestra: Sangre, LCR (un caso de complicaciones nerviosas), medula ósea, hígado, ganglios linfáticos, suero para el diagnostico serológico. 2. Cultivo: Agar suero dextrosa, agar papa infusión de carne, agar tripticasa de soya, agar Brucella con suero o agar 5% de sangre de oveja.  Siembra por duplicado para incubar uno en presencia de oxigeno libre y el otro para incubar 5 – 10 % de CO2 (B. abortus).  Se puede usar medios distribuidos en botellas de Castañeda con medio bifásico, para poder incubar hasta 21 0 35 días, realizando resembrar c/ 3 ó 5 días).

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3. Puebas de Identificación: Producción de H2S y crecimiento en presencia de tionina y fuscina básica. Especies

Requerimiento de CO2

Producción de H2S

+ -

+ + -

B. melitensis B. abortus B. suis B. canis

Crecimiento en 1: 100. 000 de fuscina básica. + + -

Crecimiento en tionina 1 : 25,000 + +

4. Prueba Serológica: Utilizando como antígeno cepas de colonias lisas de Brucella, estandarización, muestras por el calor y fenolizadas. Los títulos de aglutinación de 1:160 indican infección activa.  Prueba de Coombs, usando globulina antihumana.  Produce reacción cruzada con la tularemia, cólera y Yersinia. 5. Prueba Cutánea Inoculación intradérmica de una proteína de extracto de Brucella. Prueba (+) a las 21 horas a parece un edema e induración. Se recomienda hacer la prueba después de la prueba de aglutinación ya que puede estimular el nivel de aglutinación.

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SECCIÓN 5: BACILOS GRAM NEGATIVOS FACULTATIVOS Familia: Enterobacteriaceae Características Generales:  Las enterobacteriáceas se componen de un gran número de especies de bacilos Gram negativos que habitan en el intestino grueso del hombre y muchos animales. También se encuentran en el suelo, agua y materia en descomposición.  Es el grupo más común de bacilos Gram negativos cultivados en el laboratorio.  Incluye microorganismos que forman parte de la flora normal y microorganismos patógenos como la Salmonella y Shigella. La E. coli forma parte de la flora normal aunque incidentalmente causa enfermedad; algunos son saprofitos en su hábitat normal; pero cuando invaden otros tejidos se convierten en patógenos. Clasificación:  La taxonomía de las enterobacteriáceas es compleja y ha cambiado con rapidez desde el desarrollo de las técnicas de determinación del secuenciamiento del ácido nucleíco y las técnicas de hibridación.  En la actualidad están definidos más de 25 géneros y muchas especies; sin embargo las enterobacteriáceas clínicamente significativas comprenden no más de 25 especies, otras aparecen con poca frecuencia. Morfología:  Cuando crecen sobre medios de cultivo, son bacilos cortos, Gram negativos; pero en muestras clínicas la morfología es muy variable, algunos son móviles por la presencia de flagelos perítricos, algunas especies presentan cápsula.  Las cápsulas son grandes y regulares como en la Klebsiella., menos en el Enterobacter y poco común en otras especies.  Pueden poseer fimbrias.  Poseen pared celular compleja compuesta de mureína, lipoproteína, fosfolípidos, proteínas y LPS dispuestos en capas. Fisiología:  Facultativos  Fermentan la glucosa  Catalasa + 42

   

Oxidasa negativos Reducen los NO3- a NO2Algunas producen gas a partir de la glucosa Además de la glucosa, fermentan muchos otros CH, lo que permite la diferenciación de los grupos: lactosa + y lactosa negativa.

Cultivo:  En medios sólidos--> colonias húmedas, lisas, grises ó rugosas, con bordes bien definidos.  En medios liquido--> turbidez  Β-hemolíticas y no hemolíticas  Gran variedad de medios selectivos y diferenciales: Mac Conkey, desoxicolato, EMB y otros que permiten distinguir las colonias fermentadoras de la lactosa (pigmentadas) de las no fermentadoras de la lactosa (no pigmentadas). Resistencia:  Relativamente sensibles al calor y a bajas concentraciones de germicidas y desinfectantes comunes--> cloro en agua las mata.  Toleran sales biliares y tinturas bacteriostáticas en grado variable.  Relativamente sensible a la desecación. Estructura Antigénica: 1. Presenta antígeno “O” conformado por LPS que está compuesto de 3 regiones iguales -->el antígeno “O” está contenido en la región I. 2. Antígenos K--> polisacárido capsular. 3. Antígenos H--> proteína flagelar. Determinantes de Patogenicidad: Endotoxina: Conformada por la porción de LPS de la pared celular--> efectos: fiebre, shock fatal, alteraciones leucocitarias, --> cito toxicidad, alteraciones en la respuesta del huésped y diversos cambios metabólicos. Su papel no está claro en infecciones urinarias o de las heridas; sin embargo cuando los microorganismos llegan a la sangre; producen un shock endotóxico en el 30% de estos pacientes, con una tasa de mortalidad del 40%-90%. Enterotoxina: Ejercen efecto toxico en el intestino delgado, causando un pasaje de liquido en el ileon. Otros factores: La cápsula, el antígeno Vi impide la destrucción intracelular del microorganismo, algunos producen hemolisinas u otras enzimas. 43

Diagnóstico de Laboratorio: 1. Muestras--> esputo, tejidos, pus, líquidos corporales, escobillado rectal y heces. 2. Transporte--> medio de Stuart. 3. Relativo realizar--> coloración Gram. 4. Cultivo--> en caso de muestras no fecales cualquier aislamiento entérico podría ser patógeno; en este caso se debe emplear un medio de baja selectividad, es decir que permita crecer a la mayoría de las bacterias entéricas, pero que inhiba bacilos Gram+ o Gram- no entéricos. En caso de muestras fecales, lo que se busca es aislar patógenos intestinales, Salmonella, Shigella, Yersinia; por lo que se hace un tratamiento previo a la muestra, además se acostumbra usar un medio de cultivo de alta selectividad. 5. Pruebas de identificación--> se selecciona de acuerdo al criterio del laboratorio, basándose en las tablas de identificación de Ewing y el Manual de Bergey’s pero 1º se debe diferenciar de otros microorganismos no entéricos como Pseudomonas, Vibrio, Aeromonas y Plesiomonas y para esto es válido la prueba de la oxidasa.

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Género: Escherichia Especie: Escherichia coli Se encuentra ubicado en la tribu Escherichieae que comprende 2 géneros: Escherichia y Shigella (patógeno). El género Escherichia comprende 2 especies: E. coli y E. hermanii. Escherichia coli. Es más predominante en el intestino grueso del hombre. Patógeno oportunista asociado con enfermedad gastro intestinal humana (particular) en niños y en viajeros. Esta infección se adquiere por la ingesta de aguas contaminadas con heces humanas. Algunas cepas son enterohemorrágicas y causan diarrea sanguinolenta, generalmente por la ingesta de carnes mal cocidas. Es la causa más común de las infecciones del aparato urinario y de sepsis por bacilos Gram negativos. Una de las causas más importantes de la meningitis neonatal. Características Morfológicas: Bacilo Gram negativo, móvil y no pigmentado. Características Biológicas y de Cultivo:  Crece en muchos medios comunes.  Algunas son β hemolíticas en agar sangre, principalmente en las cepas aisladas de la orina.  Fermentan la lactosa, con excepción de la cepa E. coli enteroinvasiva.  No pigmentadas, móviles, descarboxilan la lisina.  Utilizan el acetato como única fuente de carbono.  Es indol positiva y no utiliza el citrato. Estructura Antigénica:     

Antígenos “O” que permiten distinguir hasta 150 serotipos diferentes. Antígenos “K” que permiten clasificar 90 tipos serológicos. Antígenos “H” que permiten clasificar hasta 50 tipos serológicos. Se puede realizar más de 1000 combinaciones de tipos antígenos. Existen serotipos específicos asociados a ciertas enfermedades.

Determinantes de Patogenicidad:  Antígenos superficiales. Presenta 2 tipos de fimbrias, una sensible a la manosa y otra resistente a la manosa. Ambos son importantes para la colonización de tejidos. Se han demostrado la presencia de estas fimbrias 45

en microorganismos aislados de vías urinarias y se cree que es necesario para la unión de los microorganismos a las células uroepitelial.  Antígeno capsular. Parece que interfiere con la fagocitosis de los microorganismos por los leucocitos.  Enterotoxinas. 2 tipos: termoestable (TE) y termolábil (TL) --> la producción de las mismas se asocia con 2 plásmidos. La TL es semejante a la toxina del cólera que estimula la adenil ciclasa en las células epiteliales de la mucosa del intestino. Otros factores de patogenicidad son la hemolisina y su capacidad de penetración. Clasificación del E. coli de Acuerdo a su Mecanismo de Patogenicidad Infección del Tracto Intestinal: 1. Enterotoxigénica. Que produce la enfermedad por medio de 2 enterotoxinas: termolábil y termoestable. Produce diarrea voluminosa, sin sangre y de corta duración (1 a 3 días). A menudo está asociada con los viajes (diarreas del viajero), en países en vías de desarrollo. 2. Enteroinvasiva. Tiene carácter invasivo por la presencia de fimbrias, es lactosa negativa, no presenta movilidad. Produce diarrea con moco y sangre, semejante al de la Shigella. Se acompaña de células inflamatorias (leucocitos) en las heces. 3. Enterohemorrágica o verotoxigenica. Produce diarrea con sangre por acción de una toxina llamada toxina shiga o Verotoxina, que es una citosina especializada, que lisa las líneas de células Vero, que son células que se cultivan en laboratorio. La infección con este serotipo está asociada con la ingesta de hamburguesas poco cocidas en restaurantes de comida rápida. Algunos pacientes que presentan infección con la cepa O157:H7, sufren una complicación mortal denominada síndrome hemolítico urémico que aparece cuando la verotoxina en el torrente circulatorio. 4. Enteropatógena clásica. Que produce la diarrea infantil por acción de una citotoxina. 5. Enteroagregativa. Estudios recientes han definido algunas características de estas cepas, como es el fenómeno de la autoagregación, que está determinado por un plásmido de 55 a 65 mdaltons, que codifica para una 46

fimbria de adherencia, un lipopolisacárido uniforme y una nueva enterotoxina termoestable (TE) denominada toxina enteroagregativa estable (TEAE).133 Se han detectado algunas cepas que elaboran una segunda toxina termolábil antigénicamente relacionada con la hemolisina de Escherichia coli, la cual puede causar necrosis de las microvellosidades, acortamiento de las vellosidades intestinales e infiltración mononuclear de la submucosa. 6. De adherencia difusa. Se adhiere a la totalidad de la superficie de las células epiteliales y habitualmente causa enfermedad en niños inmunológicamente no desarrollados o malnutridos. No se ha demostrado que pueda causar diarrea en niños mayores de un año de edad, ni en adultos y ancianos. Infección Sistémica: Los componentes estructurales que desarrollan un papel más importante en la patogenia de la enfermedad sistémica son la capsula y la endotoxina. Por ejemplo, las cepas de E. coli que causan meningitis neonatal normalmente poseen un tipo capsular específico denominado antígeno Kl. La endotoxina de E. coli es el lipopolisacárido de la pared celular, que causa algunas manifestaciones características de la sepsis por bacterias gramnegativas, como fiebre, hipotensión y coagulación intravascular diseminada. Infecciones del Aparato Urinario: Algunos serotipos O de E. coli causan preferentemente infecciones del aparato urinario, que se caracterizan por presentar pili con proteínas adhesinas que se unen a receptores específicos en el epitelio del aparato urinario. Diagnóstico de Laboratorio: Las muestras asépticas se pueden sembrar en agar sangre y en un medio diferencial como el agar EBM o el agar Mac Conkey. En agar EBM, E. coli tiene un aspecto verde tornasolado. Una colonia característica se aísla en agar común y se realizan las pruebas de identificación bioquímica TSI: Producción de indol a partir del triptófano.  Utilización del acetato  Movilidad positiva  El E. coli O157:H7 no fermenta en sorbitol, lo que la diferencia de otras cepas de E. coli. 47

Género: Klebsiella Especie: Klebsiella pneumoniae TRIBU KLEBSIELLAE    

K. pneumoniae – el más comúnmente aislado. K. oxytoca – similar en su infección a K. pneumoniae. K. ozaenae – produce atrofia progresiva y fétida de las mucosas. K. rhinoscleromati – rinosclerona que es un granuloma destructor de la nariz y faringe.

Estos dos últimos están asociados a infecciones crónicas de las mucosas nasales y faringe. Klebsiella pneumoniae: Se encuentra de manera normal en el tracto intestinal del hombre y algunos animales, pero está en menos numero que el E. coli lo que puede dificultar su crecimiento en los medios de cultivo cuando se incuba por solo 24 horas, pero si se incuba 48 horas se puede observar el crecimiento. Produce neumonía que es la responsable de aproximadamente el 2 % de las neumonías bacterianas y puede causar condensación hemorrágica necrosante extensa del pulmón. En las infecciones de las vías urinarias puede derivar en una bacteria generalmente en pacientes debilitados. Características Morfológicas:  Similar a las de la familia.  Inmóviles.  Presenta glicocálix que está formada por polímeros de polisacáridos que forma una maraña de fibras que se extiende fuera de la célula semejando una cápsula. Características Bioquímicas y de Cultivo: La presencia de cápsula hace que las colonias de Klebsiella, aparezcan grandes, húmedas, y mucosas. Utilizan el citrato como única fuente de carbono, para su aislamiento se está utilizando con bastante éxito el agar Mac Conkey, inositol y carbenicilina, sugerido por Bagley y Seidler, cuya selectividad se basa en la resistencia del microorganismo a la carbenicilina.

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Estructura Antigénica: Presenta antígeno O, compuesto LPS y antígeno K que es un polisacárido que ha demostrado ser más útil para la tipificación serológica debido a que es un antígeno estable al calor, al contrario del antígeno O. Se han descrito hasta 82 antígenos K diferentes ene el ultimo manual de Bergey. La mayoría de los antígenos K contiene solo un constituyente monosacárido que puede ser generalmente el ácido glucurónico y de 2 a 4 de los siguientes azúcares: galactosa, D- glucosa, manosa, fucosa, y L- ramnosa. Ningún tipo serológico único de K. pneumoniae es más virulento que otro, ni se le asocia más frecuentemente con diferentes infecciones; sin embargo la tipificación serológíca proporciona un marcador único para investigar diferentes epidemias causadas por este microorganismo. Determinación de Patogenicidad:  Cápsula. Que le previenes contra la fagocitosis y le ayuda a establecerse en las vías aéreas.  Endotoxina. LPS de la pared celular.  Enterotoxina. Similar a las toxinas TE y TL de E. coli y su producción esta mediada por plásmido. Diagnóstico de Laboratorio: Produce neumonía primaria en hombres de edad media y ancianos con problemas médicos como alcoholismo, enfermedades broncopulmonar crónica y diabetes mellitus. Es patógeno oportunista y causa neumonía, infección de las vías urinarias y de heridas, bacterianas y meningitis. Se puede aislar de muestras: orina, secreción de las heridas, resistentemente se ha incrementado las infecciones en hospitales con cepas resistentes a gran diferentes de antibióticos.  Coloración Gram.  Cultivo: agar Mac Conkey – colonia mucoides, grandes y rosadas.  Pruebas bioquímicas para diferenciarlas de las demás especies de Klebsiella.

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Género: Proteus Especie: Proteus vulgaris Especie: Proteus mirabilis Especie: Proteus myxofaciens Proteus vulgaris. Es la especie más importante dentro del género. Se encuentra en el intestino humano y en una gran variedad de animales, en el suelo y agua de polución. Se convierte en patógeno causando trastornos en las vías urinarias, también son invasores secundarios en infecciones en diversos sitios del cuerpo. Características Morfológicas: Bacilo recto, Gram negativo, presente movilidad por flagelos peritrícos Características de Cultivo:  Crecen en una gran variedad de medios de cultivo comunes y selectivos para enterobacteriáceas.  En agar gelatina desarrolla el fenómeno de swarming, que consiste en un crecimiento con ciclos periódicos de migración y concentración alrededor de un punto de inoculación.- En el periodo de migración las células se alargan alcanzando de 20 - 30 µm. y presentan mayor número de flagelos.En la fase de consolidación las células se dedican a multiplicarse y no migran. Se desconoce el mecanismo por el cual se lleva a cabo el swarming, pero se cree que los factores críticos para la iniciación es el desarrollo9 de células alargadas, el aumento de flagelos y la producción de ciertas sustancias extracelulares.  Puede crecer también formando una fina película.  Estas formas de crecimiento del Proteus, hace difícil que se pueda aislar otras especies existentes en la muestra. En los laboratorios entéricos, los medios han sido elaborados para inhibir el swarming, adicionando sales biliares o detergente, reduciendo la concentración de NaCl o aumentando la concentración de agar-agar al 4% ó al 7%, ó, adicionando nitroglicerol entre 0.1 - 0.3%, que no inhibe la flagelación o movilidad y es de baja toxicidad para Proteus y otras bacterias.  Para su identificación se aplican las siguientes pruebas:  Desaminación oxidativa de una gran variedad de aminoácidos como la fenilalanina y el triptófano.  Producción de ácidos a partir de monosacáridos y disacáridos. No produce ácidos a partir del inositol ni alcoholes de cadena recta como tetra, penta ó hexahidroalcoholes.  Hidroliza la urea.  Produce H2S en TSI y en agua pepenada 50

Estructura Antigénica:  Presentan antígenos O y H y algunas cepas de P. vulgaris y P. mirabilis presentan antígenos K.  La serotipificación se hace mediante el sistema de Kauffman y Perch, que considera 49 antígenos somáticos “O”, de los cuales 17 están presentes en P. vulgaris., 27 en Proteus mirabilis y 5 en ambas especies.- Además 3 antígenos “O” (A, B, C) y además antígenos somáticos designados con números que van del 101 al 104 y del 200 al 205.  El número de antígenos flagelares según Kauffman y Perch es de 19.  Las cepas de Proteus vulgaris designadas como OX-K, OX-2 y OX-19, pueden producir reacción cruzada con los anticuerpos de Rickettsia, por lo que se usa para el diagnóstico de la enfermedad producida por Rickettsia. Determinantes de Patogenicidad:  Capacidad de invasividad.  Producción de endotoxina.  Producción de ureasa, que en las infecciones de las vías urinarias, degradan la urea en amoniaco elevando el pH de la orina, ocasionando la precipitación de las sales de calcio y magnesio originando la formación de cálculos. La ureasa también es importante en la severidad de la enfermedad. Cuando no hay actividad de ureasa, el número de microorganismos en los riñones y la extensión de la enfermedad renal son menores que cuando la enzima está presente. Las evidencias indican que la alcalinización de la orina por ureasa, incrementa la lesión del epitelio renal Diagnóstico de Laboratorio:    

Patógeno del tracto urinario y de allí produce bacteriemia. Muestra.- Orina y sangre. Coloración Gram a partir de la muestra. Siembra en agar desoxicolato, que contiene desoxicolato de sodio, lactosa, rojo neutro y da lugar a la formación de colonias incoloras. Otro medio que se puede emplear es el agar SS, que contiene lactosa, rojo neutro, verde brillante, bilis de buey, tiosulfato de sodio y citrato de hierro; las colonias en este medio son incoloras con centro negro.  La identificación de las colonias se hace mediante las siguientes pruebas:  Ureasa, para diferenciarla de Salmonella.  Desaminación oxidativa de aminoácidos, para diferenciarla de Providencia y Morganella.

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Género: Salmonella Especie: Salmonella typhi Especie patógena cuando se ingiere por vía oral causando enteritis, infección sistémica y fiebre entérica.

Características Morfológicas: Similar a todas las enterobacteriáceas, son móviles por flagelos peritricos con excepción de S. pullorum. Características de Cultivo:  No fermentan la lactosa.  Forman ácido y a veces gas a partir de la glucosa.  Suelen producir sulfuro de hidrógeno a partir del tiosulfato, sin embargo S. typhi no produce gas a partir de la glucosa y produce escasa cantidad de sulfuro de hidrógeno. Estructura Antigénica:  Presentan antígenos “O” y “H”, que son útiles para la serotificación. Los antígenos “H”, presentan 2 fases: En la primera fase son compartidos por pocos microorganismos y cuando el antígeno “H” se encuentra en la fase 2, se comparte con muchos microorganismos.  Algunas salmonellas poseen antígeno K, conocido como antígeno Vi, que son vinculados con la invasividad.  Variación. Los microorganismos pueden perder el antígeno H y perder la movilidad.  Cuando pierden el antígeno “O”, las colonias lisas se transforman en colonias rugosas.  El antígeno Vi también puede perderse en parte o en su totalidad.  Estas pérdidas u obtención se producen en el proceso de transducción Clasificación:  La clasificación es compleja debido a que los microorganismos constituyen una continuidad más que especies definidas.  Hasta 1982, Swing y col., habían propuesto sólo 3 especies de Salmonella: S. cholerae suis (con 1 serotipo), S. typhi (también con 1 serotipo) y S. enteritidis con más de 1500 serotipos.  A partir de 1983, se han clasificado a las salmoneras en base a estudios de hibridación del DNA y considera que el género Salmonella presenta 7 sub 52

grupos, cada subgrupo con sus propias características e historia fenotípica; ésta clasificación aún no se emplea.  La nomenclatura simplificada considera los nombres de los serotipos como nombres de especies, por ejemplo: el nombre del género Salmonella y el serotipo typhimurium.  En laboratorios clínicos se identifican mediante pruebas bioquímicas y serológicas 4 especies de salmoneras que causan fiebres entéricas: typhi, paratyphi A, paratyphi B y cholerae suis. Resistencia a Agentes Físicos y Químicos: Toleran concentraciones elevadas de bilis. Son resistentes al verde brillante, tetrationato de sodio y desoxicolato de sodio; éstos compuestos son de utilidad para la formulación de los medios selectivos. Determinantes de Patogenicidad: 1. Antígenos de superficie (O) Cumple la función de adherencia y permite la sobrevivencia intracelular; en el caso de la S. typhi es el antígeno Vi, las salmonellas que presentan éste antígeno son más virulentas. 2. Invasividad. Al igual que la Shigella, es invasora, atraviesa el revestimiento epitelial del intestino delgado y pasa directamente al tejido sub epitelial; se desconoce el mecanismo, pero el proceso parece ser similar a la fagocitosis. Las salmonellas atraviesan las células epiteliales. Ocasionalmente, ocurre penetración epitelial a nivel de la unión intercelular. Luego de la penetración, los microorganismos se multiplican y pueden pasar hacia otros sitios del cuerpo. La destrucción epitelial se observa en los estadios tardíos de la enfermedad, pero se desconoce los mecanismos por los cuales ocurre esta destrucción. 3. Endotoxina. Es responsable de la fiebre observada en las afecciones por salmonellas; actúan directa o indirectamente a través de la liberación de pirógenos. 4. Enterotóxina. Tiene las mismas propiedades que la enterotóxina TL y Te del E. coli. Su actividad está relacionada con la pared celular o la membrana externa de la célula bacteriana. Manifestaciones Clínicas: Gastroenteritis. Ocurre 18 horas después de haber ingerido alimento contaminado. Se caracteriza por presentar diarrea, fiebre, dolor abdominal. La causa más común es la S. enteritidis serotipo typhimurium. Septicemia. Se caracteriza por fiebre, escalofríos, anorexia y anemia. Puede desarrollarse lesiones focales en cualquier tejido, produciendo osteomielitis, 53

neumonía, abscesos pulmonares, meningitis y endocarditis. En este tipo de enfermedad con frecuencia se aísla S. cholerae – suis. Fiebre tifoidea y otras fiebres entéricas. La fiebre tifoidea es la más severa y el agente causal es la S. typhi. Las fiebres entéricas son producidas por los serotipos paratyphi A y paratyphi B; en estas, los síntomas son más leves y la tasa de mortalidad es menor. Tifoidea: 1ª semana. Fiebre, malestar, letargo, dolores generalizados. El microorganismo penetra la pared intestinal e infecta los linfáticos regionales y son transportados a través del torrente circulatorio. 2ª Semana. Se multiplican en los tejidos intracelularmente y reingresan al torrente circulatorio produciendo bacteriemia; también se da la infección del sistema biliar, la fiebre es sostenida de 39 ºC, el abdomen se presenta sensible y también pueden presentarse otros síntomas. 3ª Semana. Los pacientes se mantienen exhaustos, con fiebre, pero comienzan a mejorar si no se presentan complicaciones: perforación, severa hemorragia, tromboflebitis, colecistitis, formación de abscesos, neumonía. Diagnóstico de Laboratorio: Muestra.  Heces.- Aunque las salmonellas no son tan sensibles al ácido de las heces como las shíguelas, es aconsejable amortiguar las heces si no se va a sembrar inmediatamente en los medios de cultivo. En la primera semana se obtiene el 25% de aislamiento y en la cuarta semana el 85% de aislamiento.  Sangre. Se utiliza para el hemocultivo durante las 2 primeras semanas de la enfermedad. Luego de la negativización de los hemocultivos (cuarta semana), los cultivos de médula ósea pueden ser positivos; la orina puede ser positiva en el 25% de los pacientes con fiebre tifoidea. Cultivo:  Cuando la muestra es heces, se hace un tratamiento previo de enriquecimiento en caldo selenito o tetrationato.  El aislamiento se realiza en un medio de cultivo selectivo y diferencial, como EMB, Mac Conkey, desoxicolato de sodio, agar SS, o agar entérico de Hektoen.  La identificación se realiza mediante reacciones bioquímicas y pruebas serológicas de aglutinación rápida en frotis. 54

Pruebas serológicas: Prueba de aglutinación por dilución en tubo (Prueba de Widal). Las aglutininas aumentan durante la segunda y tercera semana de la infección por salmonera. Se requiere al menos dos muestras de suero obtenidas a intervalos de 7 a 10 días para demostrar un aumento en el título de anticuerpos. Los resultados se interpretan de la siguiente manera: 1. Los títulos altos o en aumento de “O” (igual o mayor de 1: 160) sugiere que hay infección activa. 2. Los títulos grandes de “H” (igual o mayor a 1: 160) sugiere inmunización pasada. 3. El título alto de anticuerpos al antígeno Vi, se presentan en algunos portadores.

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Género: Shigella Especie: Shigella dysenteriae Shigella Descripción General: El género Shigella, perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, está formado por bacilos gramnegativos, no esporulados e inmóviles, facultativos. Las especies de este género tienen un patrón antigénico complejo y su clasificación se basa en sus antígenos O somáticos, muchos de los cuales son comunes a otros bacilos entéricos, como E. coli. Hay cuatro especies: S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii y S. sonnei. Las distintas especies de Shigella constituyen la principal causa de disentería bacteriana, diarrea caracterizada por eliminación frecuente de heces conteniendo pus, sangre y/o mucus. El ser humano es el único reservorio conocido de este agente. La mayoría de los casos ocurren en niños, en general transmitidos por contacto directo. Los brotes a gran escala, vinculados a alimentos, son más raros. A pesar de ello, constituye un importante problema de salud pública mundial, debido fundamentalmente a su elevada transmisibilidad, la emergencia de cepas resistentes a antimicrobianos y la falta de vacunas efectivas. Características Microbiológicas – Taxonomía: Shigella es un bacilo gram negativo perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, que se encuentra estrechamente relacionada con el género Escherichia, por sus propiedades bioquímicas, serológicas y por similitudes genéticas. Se caracteriza por ser inmóvil, no produce lisina descarboxilasa y raramente produce gas a partir de hidratos de carbono. Su identificación se basa en características bioquímicas y antigénicas. En base a ello, se describen cuatro especies, todas ellas pueden causar disentería, aunque con diferente gravedad. ESPECIE Serogrupo Indol Manitol Ornitina decarboxilasa Tartrato de Jordan

S. dysenteriae A ± -

S.flexneri B ± +

S.boydii C ± +

S.sonnei D +

-

-

-

+

-

-

-

+

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Clasificación: Hay varias especies diferentes de bacterias Shigella, clasificados en cuatro subgrupos:    

Serogrupo A: S. dysenteriae (12 serotipos), es un tipo que se encuentra en los países del mundo en desarrollo donde ocasiona epidemias mortíferas. Serogrupo B: S. flexneri (6 serotipos), causante de cerca de una tercera parte de los casos de shigelosis en los Estados Unidos. Serogrupo C: S. boydii (23 serotipos). Serogrupo D: S. sonnei (1 serotipo), conocida también como Shigella del grupo D, que ocasiona más de dos terceras partes de todos los casos de shigelosis en los Estados Unidos.

Los grupos A–C son fisiológicamente similares, S. sonnei (grupo D) puede ser distinguida del resto en base de pruebas de metabolismo bioquímico. De estas especies la representativa del género es S. dysenteriae. Fisiología y Metabolismo: En los medios de cultivo diferenciales, empleados habitualmente para cultivo de bacilos gram negativos entéricos, aparecen como colonia no fermentan la lactosa en medios de cultivo diferenciales (agar Mac Conkey, agar Salmonella Shigella, etc.), con excepción de algunas cepas de S. sonnei, que lo hacen en forma lenta. No producen H2S y la producción de gas a partir de la glucosa sólo se observa en algunas cepas de S. flexneri, lo que las diferencia de Salmonella. A diferencia de E. coli, no producen lisina descarboxilasa, utilizan acetato como fuente de carbono. Son más lábiles a condiciones desfavorables que Salmonella, su viabilidad se ve comprometida frente a ácidos, sales biliares, desecación y muchos desinfectantes. Aún así pueden sobrevivir a temperatura ambiente durante meses. Estructura Antigénica: Todas las especies presentan antígeno O, termoestable y pueden o no poseer antígeno K, termolábil. Este último no interviene en la serotipificación, pero puede interferir en la determinación antígeno O; lo cual se evita mediante la ebullición de la cepa. Los cuatro serogrupos se corresponden con las especies, tal como se observa en el cuadro anterior. A su vez, cada serogrupo puede subdividirse en tipos, en base a variantes del antígeno O, estos serotipos se designan mediante números arábigos. Pueden diferenciarse además serovares, en algunas especies. El conocimiento detallado de la estructura antigénica resulta de utilidad para estudios epidemiológicos y en la formulación de vacunas. 57

Atributos de Virulencia: La disentería bacilar resulta de la adherencia, e invasión de células epiteliales de la mucosa del íleon terminal y colon, con inflamación y ulceración de la misma. Modelos Experimentales: Dado que se trata de un patógeno exclusivamente humano, no existen buenos modelos experimentales animales, con la excepción de primates. La queratoconjuntivitis lograda al inocular Shigella en la conjuntiva de cobayos (test de Sereny) ha sido usada para demostrar la adherencia y capacidad invasiva de las cepas. El modelo de asa ligada de conejo se ha empleado para estudiar acumulación de líquido en la luz del segmento. La mayoría de nuestro conocimiento en la patogenia de la infección por Shigella se ha logrado mediante el empleo de cultivos celulares, en especial la línea celular HeLa. Invasividad: La invasión es la penetración activa de la bacteria en la célula hospedera. Las lesiones inflamatorias en la mucosa colónica afectada por Shigella se hallan fundamentalmente a nivel de las placas de Peyer, lo que sugiere que la bacteria podría ingresar inicialmente por las células M, naturalmente fagocíticas, encargadas de captar antígenos de la luz intestinal y presentarla al tejido linfoide de la placa de Peyer subyacente. Pero también se observa el ingreso a través de células no fagocíticas. En cultivos celulares, la bacteria inicialmente se adhiere a la célula, provoca la reorganización de la actina del citoesqueleto celular en las inmediaciones y la formación de pseudópodos. La célula huésped, normalmente no fagocítica engloba e ingiere a la bacteria adherida, la cual a su vez escapa del fagosoma y se multiplica en el citoplasma de la célula HeLa. Continúan produciéndose reordenamientos de actina en la vecindad de la bacteria que le permiten moverse a través de la célula y luego pasar otra contigua. Una vez en libre en el citoplasma, la bacteria exhibe dos tipos de movimiento, por un lado, la polimerización de actina en un extremo de la bacteria crea una estructura tipo “cola de cometa”, que propulsa a la bacteria a través del citoplasma, por otro lado, también se ha observado movimiento unidireccional de la bacteria lo largo de filamentos de actina. Muchos genes involucrados en la invasión han sido identificados (ipa: invasion plasmid antigens) y se localizan en plásmidos de peso molecular 120 - 140 MD. Algunas proteínas codificadas por esos plásmidos, intervienen por ejemplo en la ruptura de la pared del fagosoma, o bien son exportados a la superficie de la bacteria. Las integrinas, proteínas de superficie celular podrían ser los receptores de las proteínas Ipa. Las proteínas Ipa sólo parecen actuar luego de que las bacterias han ingresado a través de las células M. Muerte celular: El crecimiento bacteriano intracelular causa cesación de la síntesis proteica. Inicialmente se atribuyó la muerte celular a la toxina de Shiga, pero luego se demostró que mutantes que no la poseen, también son capaces 58

de determinan la muerte celular. Más recientemente se ha señalado a la inducción de apoptosis o muerte celular programada como responsable de la muerte celular. Toxinas: La llamada toxina de Shiga, es potente neurotoxina, que determina convulsiones. Clásicamente se creía era producida exclusivamente por S. dysenteriae tipo 1. También se han encontrado toxinas similares en otras especies de Shigella y en ciertas cepas de E. coli (Shiga like toxin). Es una toxina de tipo A-B, que se libera al medio durante la lisis bacteriana. Esta toxina se une a las células de mamíferos, es internalizada por endocitosis y finalmente detiene la síntesis proteica a nivel ribosomal. Tiene múltiples actividades tóxicas: induce la acumulación de liquido en el modelo de asa ileal ligada de conejo, (aunque no se relaciona ni desde el punto de vista antigénico ni por su mecanismo de acción con toxina colérica o toxina termolábil de ETEC), actúa como neurotoxina, e induce la apoptosis, aunque como se dijo, esta ocurre aún con mutantes no productoras de toxina. Su papel más relevante es en el Síndrome hemolítico urémico, donde el efecto principal es el daño a nivel de vasos sanguíneos. Al menos dos toxinas más, con actividad de endotoxina han sido descritas y que pueden hallarse en especies distintas de S. dysenteriae. Se denominan ShET1 y ShET2 y serían responsables de la acumulación de líquidos en el asa intestinal y de la diarrea acuosa que puede observarse en la fase inicial de la shigelosis. Lipopolisacárido: Su efecto principal es contribuir al daño celular, y no parece intervenir ni la invasión, replicación intracelular ni en la diseminación entre células. Cepas rugosas de Shigella, que no poseen antígeno O conservan su capacidad de invadir y replicarse en cultivos celulares, pero son incapaces de causar inflamación en el test de Sereny. Efectos Sobre la Salud Humana: Shigella sp. puede ocasionar enfermedades intestinales graves, incluida la disentería bacilar. Cada año se producen más de dos millones de infecciones que ocasionan unas 600 000 muertes, sobre todo en países en desarrollo. La mayoría de las infecciones por Shigella se producen en niños menores de diez años. El periodo de incubación de la shigelosis suele ser de 24 a 72 h. La ingestión de tan solo 10 a 100 microorganismos puede producir una infección, una dosis infectiva sustancialmente más baja que la de la mayoría de las demás bacterias entéricas. Al comienzo de la enfermedad aparecen cólicos, fiebre y diarrea acuosa. Todas las especies pueden producir enfermedades graves, pero la enfermedad producida por S. sonnei es, por lo general, relativamente leve y de resolución espontánea. En el caso de S. dysenteriae, las manifestaciones clínicas pueden desembocar en la formación de úlceras con diarrea hemorrágica y una concentración alta de neutrófilos en las heces. Estas manifestaciones están relacionadas con la producción de la toxina shiga por el microorganismo patógeno. Las especies del género Shigella están, al parecer, mejor adaptadas a la infección del ser humano que la mayoría de las demás bacterias entéricas patógenas. 59

Fuentes y Prevalencia: Según parece, los únicos hospedadores naturales de las shigelas son las personas y otros primates superiores. Las bacterias permanecen contenidas en las células epiteliales de sus hospedadores. Las epidemias de shigelosis se producen en núcleos con alta densidad de población y en lugares con higiene deficiente. Muchos casos de shigelosis están asociados con guarderías, cárceles y hospitales psiquiátricos. Los militares que trabajan sobre el terreno y las personas que viajan a zonas con saneamiento deficiente también son propensos a infectarse. Vías de Exposición: Shigella sp. son agentes patógenos entéricos que se transmiten predominantemente por vía fecal-oral, mediante el contacto entre personas o por el agua y los alimentos contaminados. Se ha comprobado también que las moscas son un vector de transmisión del microorganismo presente en residuos fecales contaminados. Relevancia de su Presencia en el Agua de Consumo: Se ha documentado cierto número de grandes brotes de shigelosis transmitidos por el agua. Estos microorganismos no son particularmente estables en medios acuáticos, por lo que su presencia en el agua de consumo indica contaminación reciente con heces humanas. Es probable que los datos disponibles hayan subestimado su prevalencia en los sistemas de abastecimiento de agua, porque las técnicas de detección que se han utilizado en general tienen una sensibilidad y fiabilidad relativamente bajas. El control de Shigella spp. en los sistemas de abastecimiento de agua de consumo tiene una especial importancia para la salud pública, por la gravedad de la enfermedad que ocasiona. Las especies del género Shigella son relativamente sensibles a la desinfección. En un PSA pueden aplicarse como medidas de control para gestionar el riesgo potencial la protección de las fuentes de agua bruta de los residuos humanos, un tratamiento adecuado y la protección del agua durante su distribución. El análisis de Escherichia coli (o bien de coliformes termotolerantes) es un índice por lo general fiable de la presencia o ausencia de Shigella spp. en las aguas de consumo. Diagnóstico de Laboratorio: Para certificar el diagnóstico etiológico se requiere la demostración de su presencia en materias fecales, ya sea por técnicas de cultivo clásicas o bien por la demostración de su material genético mediante biología molecular. Una muestra de materias fecales del paciente debe ser obtenida, en lo posible al inicio de la enfermedad y previo al suministro de antimicrobianos. Una dificultad habitual es la conservación de la muestra hasta su procesamiento, ya que retardos en el mismo pueden afectar la viabilidad de germen, Se dispone 60

para ello de medios de transporte (p. ej. Cary Blair y otros) para conservar la muestra a temperatura ambiente y de esa manera aumentar las posibilidades de aislamiento. El examen microscópico con tinción de azul de metileno o Gram permite detectar la presencia de leucocitos polimorfonucleares que sugieren infección por Shigella aunque no es exclusivo de este germen. En la shigelosis usualmente se observan abundantes polimorfonucleares. Para el cultivo se utilizan diversos medios de cultivo incluyen medios selectivos y diferenciales (agar Salmonella-Shigella, agar Mac Conkey, agar Hektoen). Las colonias lactosa negativas son estudiadas mediante pruebas bioquímicas y aglutinadas con antisueros para completar su caracterización. Se han utilizado diversas técnicas de biología molecular: sondas de ADN para detectar genes de virulencia, localizados plásmido de 120 MD, sin amplificación y PCR. Esta última técnica puede detectar cantidades muy pequeñas de bacterias, sus desventajas radican en su complejidad y costos. Sensibilidad a Antimicrobianos – Tratamiento: La resistencia antimicrobiana fue descrita inicialmente en Shigella, en Japón en 1955; actualmente cepas resistentes a uno o varios antibióticos han sido aisladas prácticamente en todo el mundo. Este problema es especialmente dramático en países subdesarrollados o en vías de desarrollo, donde las tasas de resistencia son mayores y el acceso a antimicrobianos de segunda y tercera línea es más dificultoso. La resistencia suele deberse a la adquisición de plásmidos a partir de cepas la misma especie o género pero también de bacterias de géneros diferentes. Estos plásmidos de resistencia pueden albergar genes que codifican más de un mecanismo de resistencia y pueden a su vez ser transferidos a otras bacterias.

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III UNIDAD: Familia: Vibrionaceae Género: Vibrio Especie: Vibrio cholerae Características Morfológicas: Bastones cortos Gram (-), inicialmente tiene forma de coma, es móvil por un flagelo polar. Fisiología:        



Facultativa. Tº de crecimiento de 18 – 37º C Metabolismo respiratorio. Pueden crecer en medio simple si se le proporciona hidrato de carbono utilizable, nitrógeno inorgánico, S, P, minerales y amortiguadores adecuados. pH óptimo 7, tolera 9.5. Sensibles a pH ácido menor a 6, auto-esteriliza. En agar extracto de carne recién aislada son translucidos, verde iridiscente con luz oblicua. Cultivos viejos opacos y rugosos. Medio para aislamiento primario TTGA (agar gelatina, taurocolato, telurito). TCBS (tiosulfato, citrato, sales biliares, sacarosa, donde el tiosulfato y citrato inhiben enterobacteriaceas, mientras que la bilis y colato inhiben enterococos). Para diferenciarlos de los demás miembros de la familia: se emplea la hidrólisis de arginina.

Son negativos: V. cholerae, V. parahaemolyticus, V. alginolyticus y V. vulnificus; para diferenciarlos de estos vibrios mencionados se realiza el crecimiento en 0% de NaCl; solo V. cholerae crece, las otras 3 especies no crecen. Estructura Antigénica: 1. Antígeno somático “O”. Es de mayor importancia, se clasifican en 6 serogrupos. El serogrupo “O - 1”, contiene los biotipos cholerae y el Tor que son los agentes causales del cólera clásico. El “O – 1 “se subdivide de acuerdo a sus factores antigénicos A, B, C, en 3 serótipos : Ogawa, Inaba e Hikojima”.

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Diferenciación bioquímica de los biotipos cólera y el Tor:

VP a 22º C Aglutinación de eritrocitos de pollo. Sensibilidad a 50 UI de polimixina B. Sensibilidad a fagos del cólera grupo IV.

Cholerae --

El Tor +

--

+

+

--

+

--

La diferenciación bioquímica de V. cholerae O – 1 en los biotipos cholerae y el Tor es epidiologicamente útil y puede llevarse acabo por medio de las pruebas VP, aglutinación de eritrocitos de pollo, sensibilidad a 50 UI de polimixina B y sensibilidad a fagos de cólera grupo IV. 2. Antígenos flagelares “H”.- que son compartidos por todas las cepas de V. cholerae. Determinación de Patogenicidad: 1. Enterotoxina extracelular.- responsable de los síntomas clínicos. El colerágeno es compleja, está constituido predominantemente de proteína (98 %), 1 % de lípido y 1 % de hidrato de carbono. Presenta 2 sub. Unidades: “A” es la responsable de la actividad biológica constituida por 2 péptidos desiguales: A1 con actividad toxica. “B” es la que sirve de unión de la toxina con la membrana celular. El péptido A1 provoca un aumento de la actividad de la enzima adenilciclasa incrementando el nivel de AMPc intracelular, el cual lleva a la rápida secreción de electrolitos hacia la luz del intestino delgado. El resultado es la secreción de un liquido isotónico con una concentración de bicarbonato que es el doble de lo normal y una concentración de potasio, 4 – 5 veces mayor que la concentración plasmática. La pérdida de liquido puede ser de hasta 1 l/ h. 2. Adherencia. Las células virulentas penetran en el moco intestinal y se adhieren a los microvellosidades de las células epiteliales del intestino, esto relacionado con la movilidad ya que las cepas inmóviles que producen toxinas son incapaces de producir enfermedad.

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Diagnóstico de Laboratorio: 1. Muestra: Heces Diarreicas. 2. Siembra: Enriquecimiento: esto solo en caso de buscar portadores convalecientes. Caldo peptonado alcalino – incluir 0.5 – 1 g de muestra 37º C / 6 – 8 horas. Tº ambiente

1 asada se siembra en agar TCBS incubación a 37º C (se puede aprovechar en buscar otros patógenos entéricos como E. coli enteropatogénica y V. parahaemolyticus)

Colonias amarillas Siembra en Agar TSA incubación a 37 º C / 18 – 24 horas La identificación se realiza mediante las siguientes pruebas:

GRAM

Oxidasa

String Test o Prueba de Cordón

Bacilos GRAM +

(+)

(utilizando 1 gota de desoxicolato de Na al 0.5%)

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TSI

A/A

LIA

K/K

INDOL

Serología

(+)

(con suero polivalente)

Familia: Pasteurellaceae Género: Haemophilus Especie: Haemophilus influenzae Se encuentra en la mucosa de las vías respiratorias del hombre y otros vertebrados. En niños se asocia como causa de la meningitis bacteriana aguda y algunas otras enfermedades pediátricas. En adultos se asocia primeramente con enfermedad pulmonar crónica, también ocasiona enfermedades invasivas como meningitis, diartrosis, celulitis, neumonía, y epiglotitis aguda, sin embargo los H. influenzae, no capsulado generalmente se asocian con enfermedades respiratorias crónicas principalmente e n adultos, pero también causan infección sistémicas en pacientes inmunodeprimidos. Morfología:  En LCR, líquido articular o cultivos primarios de estos materiales en medios enriquecidos, los microorganismos son predominantemente cocobacilares y uniformes, puede observarse capsula retráctil débil, demostrables por reacciones de impregnación con antisueros específicos de tipo.  Los microorganismos no capsulados que provienen de esputo o material aspirado del oído, generalmente son más alargadas y pueden presentar una tinción bicolor con coloración gran y como además pueden aparecer como gran variables, pueden ser confundidos con Streptococcus pneumoniae.  Los microorganismos de colonias rugosas son muy pleomórficos apareciendo como largos hilos y filamentos.  Se debe realizar una cuidadosa coloración Gram, decolorando rigurosamente con alcohol acetona, contrastando si fuera posible con carbol fucsina. Cultivo:  Generalmente se usa agar chocolate, debido a que este microorganismo requiere de factores X y V para su desarrollo.  El factor X, hemina que es termoestable.  Las especies independientes de hemina, como el H. parainfluenzae, sintetizan la hemina por la vía de la tetrapirroles.  Las especies dependientes de hemina parecen carecer de todas las enzimas en la síntesis de tetrapirroles, que son grupos prostéticos en los citocromos que contienen hierro o en enzimas como grupo hemo, como catalasa y peroxidasas.  El factor V, es termolábil, es un dinucleótido de nicotinamida y adenina que actúa como una coenzima para deshidrogenasas unidas a piridinas. 65

 El agar chocolate se prepara calentando el agar sangre a 80°C y en este proceso se libera la hemina a partir de la lisis de los glóbulos rojos.  El crecimiento se da a 37°C/ 36 a 48horas, alcanzando 1mm de Ө.  En agar sangre se puede sembrar en forma cruzada con S. aureus, que libera los factores X y B, creciendo las colonias como satélites.  En medio de Levinthal y Filder (BHI + iso vitalex), es un medio enriquecido y transparente y sirve para diferenciar las colonias capsuladas de las no capsuladas. El crecimiento es evidente en 18 a 24horas. Las colonias de especies de H. influenzae capsuladas del tipo b, son mucoides, brillantes, iridiscentes, grandes, de 3-4mm de Ө. Después de las 24 horas se presentan una umbilicación central, debido a la pérdida del polímero capsular y se vuelven rugosas, su mantenimiento en el laboratorio es muy difícil, debido a su tendencia de autólisis, se logra con frecuentes transferencias en agar chocolate o mejor, en medio de liofilización. Estructura Antígena: 1. Antígenos capsulares. Polisacáridos, presenta 6 tipos de antígenos: a, b, f, se tipifican mediante la prueba de hinchazón de la capsula impregnando el cultivo o en las muestras clínicas con antisueros específicos, esta es una prueba similar a la Prueba de Quellung, para el neumococo. Casi todas las cepas asociadas al serotipo b, es el único que contiene pentosas, ribosa y ribitol fosfato, en lugar de hexosas o hexosaminas que contienen los otros serotipos. 2. Antígenos somáticos. La envoltura celular de H. influenzae consiste en una membrana externa y una interna que contienen antígenos proteicos y LPS. Determinantes de Patogenicidad: 1. Cápsula. Fosforriboril ribitol fostato de H. influenzae tipo b. tiene proclividad a producir infecciones, se cree que es debido a su estructura de polisacárido capsular, el cual en ausencia de anticuerpos específicos imparte al microorganismo. una resistencia efectiva al complemento. 2. Componentes de la membrana externa. Aunque la cápsula es el determinante crítico de la virulencia, es probable que sea multifactorial y que intervengan las proteínas y los LPS, de la membrana externa. Diferentes moléculas de superficie pueden ser asociadas a la virulencia como son: La adherencia, la invasividad y resistencia a la fagocitosis. 3. Ig. A proteasas. Endopeptidasas. 66

Infecciones clínicas: Meningitis, neumonía, bactericemia sin foco, celulitis, epiglotitis, pericarditis y proantrosis.

Diagnostico de Laboratorio: 1. Examen Directo. Las muestras adecuadas son: LCR, artrocentesis, toracocentesis, material aspirado del oído medio y muestras de esputo. 2. Cultivo. La muestra debe cultivarse de inmediato, debido a que el microorganismo tiende a morir rápidamente, es recomendable sembrar en agar chocolate y Levinithol, incubarse en aerobiosis y en atmósfera de 10% de CO2. Además debe hacerse hemocultivo en pacientes con meningitis u otra enfermedad invasiva. 3. Detección de antígenos polisacáridos. Impregnando la muestra clínica con antisueros específicos, es de gran ayuda, diagnóstico rápido, también se puede hacer aglutinaciones y contra inmunoelectroforesis, efectivo en el 90% de casos de meningitis por H. influenzae tipo b.

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SECCIÓN 9: RICKETTSIAS  Se caracterizan por ser parásitos intracelulares obligados cuyos reservorios son los artrópodos (piojos, pulgas y ácaros).  Las rickettsias son microorganismos pleomórficos, de forma de bastón a cocoides y se presentan aislados en pares, más cortas en filamentos.  La ultraestructura y la composición química se asemejan a las de las bacterias Gram negativas, teñidas son fáciles de visualizar con el microscopio de luz, con Giemsa, muestra color azul, con la de Macchiavello presenta color rojo en contraste con el color azul del citoplasma de la célula hospedadora  Pared celular de tres capas, una membrana plasmática trilaminar y material nuclear. En el citoplasma granular se encuentran partículas de tipo ribosomal y organelos citoplasmáticos  Poseen ARN v ADN Características de los Cultivos:  Debido a los riesgos de infección del personal de laboratorio, los procedimientos de cultivos deben emprenderse en establecimientos especialmente equipados.  Excepto R. quintana, todas las Rickettsias requieren células vivas para su crecimiento.  Pueden propagarse en el saco vitelino de que llega a contener hasta 10 9 por ml. en huevos embrionados, cultivos de tejidos, animales de laboratorio (cobayos, ratones, ratones de las praderas) y en ciertos artrópodos.  La temperatura óptima para su crecimiento es de 32 a 35°C, si los embriones se mantienen a 40°C, la multiplicación de las Rickettsias es lenta.  El glutamato es la principal fuente de carbono y energía de Rickettsias Resistencia: Son inestables extracelularmente en condiciones ambientales ordinarias, y se requiere una cuidadosa técnica para el aislamiento del microorganismo a partir de líquidos y tejidos corporales. Las rickettsias permanecen viables durante largos periodos cuando se almacenan a 20°C o se liofilizan de medios apropiados. Estructura Antígena: Las diferencias en la composición antigénica de las rickettsias han hecho posible su clasificación en géneros, grupos y especies. No hay un antígeno común. 68

Se han detectado dos clases principales de antígenos:  Antígenos específicos de grupo, solubles en éter, que representan material capsular desprendido.  Antígenos de tipo específico, que se asocian con la pared celular. Diagnóstico Serológico: En casos fulminantes con un resultado letal, pueden o no aparecer anticuerpos. La detección de anticuerpos del tipo IgM e IgG, obtenidos a través de la muestra del paciente puede ayudar a dilucidar si la infección es reciente o remota. Los anticuerpos fijadores de complemento son útiles para identificar diferentes géneros de rickettsias. Incluyen microaglutinación, hemaglutinación indirecta; y técnicas con anticuerpos fluorescentes. La técnica indirecta de anticuerpos fluorescentes puede ser la más utilizada, debido a la disponibilidad de los reactivos y a la facilidad con la cual se puede realizar. En ella se emplea Rickettsias parcialmente purificadas, provenientes de un saco vitelino infectado, esto se confronta con diluciones de suero del paciente, con esta prueba se detecta IgG e IgM Reacción de Weil-Felix (Para diagnósticos serológicos): Se basa en reacciones cruzadas entre los antígenos de las rickettsias y el antígeno o polisacárido de Proteus. Así, los anticuerpos para rickettsias pueden aglutinar a ciertas cepas no móviles de Proteus (OX-19, OX-2, OX-K) Las aglutininas para Proteus 0X2 y/o 0X19 habitualmente aparecen 5 a 8 días después de la infección con R. rickettsii. Una elevación en cuatro veces la producción de anticuerpos son signos de presentar una infección reciente. Algunas enfermedades por rickettsias (como rickettsiosis pustulosa y fiebre Q) no se asocian con aumento de anticuerpos de Weil-Felix, y las infecciones de las vías urinarias por Proteus, pueden dar resultados falso- positivos Las pruebas de fijación de complemento, de tipo específico pueden no hacerse positivas hasta 2 a 3 semanas después del comienzo. Determinantes de Patogenicidad:  Sólo las rickettsias viables son capaces de penetraren la célula huésped.  La infección por ricketsias de una célula individual del huésped es un proceso en dos pasos: la absorción a receptores que contienen colesterol, precede la penetración en la célula. Ambos pasos dependen de la energía producida por las rickettsias infectantes.  Una vez dentro de la célula del hospedero, causan poco daño detectable a la célula parasitaria, hasta que la célula se rompe Las rickettsias del grupo tifus son capaces de hemolizar eritrocitos de diversas especies animales. Esta actividad hemolítica se correlaciona con la infectividad de las rickettsias y 69

con sus actividades metabólicas. Diferentes microorganismos aislados de la misma especie de ricketsias varían en la virulencia. Patogenia: La infección produce una lesión endotelial diseminada, que da como resultado una oclusión de los pequeños vasos, microtrombos, microhemorragias, cambios secundarios en los líquidos y electrólitos, y en los casos severos, necrosis, shock y muerte. Sin embargo todavía se desconoce el mecanismo preciso por el cual la infección por rickettsias produce la lesión endotelial. Manifestaciones Clínicas:  El periodo de incubación varía de 3 a 12 días. La enfermedad comienza en forma brusca con cefaleas, fiebre y malestar. Puede haber escalofríos y las mialgias difusas son comunes  La erupción aparece 2 a 4 días después del comienzo y en muchos casos, aparece primero en tobillos y muñecas y luego se hace generalizada.  En algunos casos se presentan molestias gastrointestinales, artralgias, conjuntivitis, rigidez de cuello y edema periorbital.  Los factores que incrementan la posibilidad de muerte son edad avanzada, mayor tiempo entre el comienzo y la institución de tratamiento efectivo y, quizás, la virulencia del agente infectante Tifus Epidémico (tifus transmitido por piojos): Es una enfermedad transmitida por piojos causada por la R. prowazekii. Puede infectar el piojo del cuerpo humano y el piojo de la cabeza, siendo el primero el vector más significativo. El piojo del cuerpo se alimenta sólo en humanos, y los tres estadios de su ciclo de vida (huevo, ninfa y adulto) ocurren en el mismo hospedero. Los piojos se infectan luego de ingerir sangre de un humano con rickettsias. Vanos días después, la rickettsias ingeridas se han multiplicado lo suficiente en el piojo y aparecen ricketsias infecciosas en las heces del artrópodo. Si el piojo encuentra un humano susceptible en este momento, puede haber transmisión de R. prowazeckii. Es más probable que la infección sea adquirida por personas en clima fríos. Los piojos buscan lugares de una temperatura de 20°C, y pueden abandonar al huésped si tiene una T° corporal de 40°C o más. Manifestaciones Clínicas: El periodo de incubación varía de 10 a 14 días. Los síntomas son cefaleas, malestar, fiebre, mialgias generalizadas, escalofríos o sensación de frío. A menudo se presentan otros síntomas: molestias gastrointestinales, debilidad y tos. No tratada la enfermedad puede durar hasta 3 semanas. 70

La mortalidad ha variado del 10 al 40% en diferentes brotes. Se ha demostrado que la mortalidad aumenta con la edad. Los sobrevivientes de tifus epidémico son inmunes durante años luego de su infección primaria, aunque pueden ocurrir recaídas leves (enfermedad de Brill-Zinsser) años más tarde. Enfermedad de Brill-Zinsser: Los individuos que han presentado tifus epidémico previamente pueden desarrollar una infección recrudescente muchos años más tarde. La enfermedad lleva los nombres de Nathan Brill, quien reconoció y describió por primera vez los aspectos clínicos de la enfermedad y de Hans Zinsser, quien sugirió por primera vez en 1934 que la enfermedad podía ser una recaída de una infección previa por tifus epidémico. Desde entonces se han publicado evidencias epidemiológicas, clínicas y experimentales que confirman la hipótesis de Zinsser.

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SECCIÓN 16: LAS MYCOBACTERIAS Género: Mycobacterium Especie: Mycobacterium tuberculosis Agente Causal de la Tuberculosis: Es una enfermedad antigua, reconocible en esqueleto de la edad de piedra y en huesos de algunas momias egipcias. Aunque la naturaleza infecciona de la tuberculosis fue establecida por Villemin aproximadamente en 1865; la naturaleza proteiforme de sus manifestaciones clínicas demoró la comprensión de la enfermedad hasta el descubrimiento del informe causal en 1883 por Koch: Encontró que el bacilo estaba constantemente asociado con la enfermedad clínica; lo aisló en cultivo puro, reprodujo la enfermedad en cobayos y conejos, y recuperó el bacilo en cultivos puros de animales experimentalmente infectados. Estos rígidos requerimientos, denominados los postulados de Koch, han proporcionado criterios considerados esenciales para la aceptación total de un microorganismo en particular como causa de una enfermedad infecciosa especifica. Características Morfológicas: El Mycobacterium tuberculosis es un bastón delgado, recto o ligeramente curvo, con extremos redondeados, el microorganismo varia en ancho de 0.20.5µm y en longitud de 1-4µm. Ocasionalmente se observan ramificaciones verdaderas en cultivos viejos y en frotis de ganglios linfáticos caseosos. Los bacilos son ácidos resistentes, no formadores de esporas y no capsulados. La coloración Acido resistente de Ziehl Neelsen es útil para la tinción de organismos de cultivos o de secreciones de pacientes. Con esta tinción los bacilos aparecen como bastones teñidos de rojo brillante contra un fondo azul. Son frecuentemente incolora, aeróbica estricta. Su crecimiento está subordinado a la presencia de oxigeno y al valor del pH circundante. Es muy resistente al frío, la congelación y la desecación y por el contrario muy sensible al calor, la luz solar y la luz ultravioleta. Su multiplicación es muy lenta (se divide cada 16 a 20 horas) y ante circunstancias adversas puede entrar en estado latente, pudiendo retrasar su multiplicación desde algunos días hasta varios años. El reservorio natural del M. tuberculosis es el hombre, tanto el sano infectado como el enfermo. Morfología e Identificación: Bacilos delgados, con extremos redondeados. Son bacilos aerobios no esporuladores o inmóviles. 72

Tienen requerimientos nutricionales exigentes y crecimiento laboratorio. La pared celular es rica en lípidos, por lo que su hidrófoba, esta es la razón por la que las mito bacterias son muchos desinfectantes y a tinciones de laboratorio comunes, Gram y Giemsa.

lento en el superficie es resistentes a como las de

Aproximadamente el 25% del peso seco de la bacteria está constituido por los lípidos libres de las capas exteriores de la célula. Estos lípidos contienen ceras, micósidos específicos de especie y el factor de cordón (6,6”-dimicolaio de trehalosa). El factor de “cordón” se asocia al alineamiento en paralelo de las filas de bacilos. Cuando se observa el frotis a partir de colonias desarrolladas en medios artificiales se aprecian formas cocoides o formas ramificadas, especialmente cuando el cultivo es viejo, estas formas también se pueden observar en muestras tomadas de ganglios linfáticos caseosos. En extendidos a partir de tejidos o esputo, generalmente los organismos se tiñen irregularmente tomando apariencia de rosario, por la presencia de gránulos metacromáticos debido presumiblemente a su contenido de polifosfatos y vacuolas. Los bacilos tuberculosos son difíciles de teñir y con la técnica de Gram, se colorea de manera irregular y pobre, debido a la falta de penetración del colorante a través de la pared celular, por lo que es necesario aplicar una técnica de coloración en la que se somete al calor con el colorante carbol fucsina y que luego de enfriarlo se decolore la muestra con el alcohol- ácido. El bacilo tuberculoso se comporta como ácido alcohol resistente debido a su contenido lipídico de su pared celular que impide que el colorante carbol fucsina se pierda en el proceso de decoloración. Esta técnica recibe el nombre de Ziehl Neelsen, y el M. tuberculosis aparece de un color rojo brillante contra un fondo de color azul. Cultivo: La T° óptima de crecimiento es de 37°C, su pH óptimo es de 7, con un rango de 6-7, es aerobio. El medio de cultivo más usado y más adecuado es el de Lowenstein Jensen. También se está utilizando el medio Ogawa. Al medio líquido se recomienda agregar un detergente no iónico polisorbato (Tween 80), con el fin de obstaculizar la agregación de las células y permitir su crecimiento disperso, lo que permite analizar turbidimétricamente. La bacteria requiere por lo menos de 15 días para presentar un desarrollo visible macroscópicamente sobre el medio de cultivo y necesita hasta 8 semanas de incubación debiéndose incubar un promedio de 30 días. Sus 73

colonias son de color blanco cremoso, son esféricas, secas, rugosas, opacas, polimorfas y de dimensiones variables. Características de Crecimiento: Las micobacterias son aerobios obligados y derivan su energía de la oxidación de muchos compuestos simples de carbono. El incremento de la tensión del C02 aumenta el crecimiento. Es muy resistente al frío, la congelación y la desecación y por el contrarío muy sensible al calor, la luz solar y la luz ultravioleta. Su multiplicación es muy lenta (se divide cada 16 a 20 horas) y ante circunstancias adversas puede entrar en estado latente, pudiendo retrasar su multiplicación desde algunos días hasta varios años. Reacción a los Agentes Físicos: Las micobacterias tienden a ser más resistentes a los agentes químicos en comparación con otras bacterias, debido a la naturaleza hidrófoba de la superficie celular y a su crecimiento en grumos. Estructura Antigénica: Lípidos: Las micobacterias son abundantes en lípidos. Estos incluyen ácidos micólicos (ácidos guisos de cadena larga C78-C90), ceras y fosfátidos. En cierto grado los lípidos son los causantes de la resistencia al ácido. Proteínas: Cada tipo de micobacterias contiene varias proteínas que inducen la reacción de la tuberculina. Polisacáridos: Las micobacterias contienen varios polisacáridos. Su función en la patogenia de la enfermedad es incierta. Pueden inducir hipersensibilidad de tipo inmediato y a veces sirven como antígeno en las reacciones con el suero de personas infectadas. Determinantes de Patogenicidad: Factor de cordón: hace que el microorganismo se desarrolle en forma de agregados laterales semejantes a cordones. El crecimiento en cordones puede correlacionarse con la presencia de un glucolípido: Trehalosa 6-6 dimicolato, ubicado periféricamente en el microorganismo. Se sospecha que este factor inhibe la fusión de los lisosomas de los macrófagos con los fagosomas, fenómeno que se considera clave para la supervivencia de M. tuberculosis dentro de los macrófagos. Sulfátidos: son dentados aniónicos de sulfato de trehalosa que contienen ácidos grasos de cadena larga, ubicados en la superficie más externa de las micobacterias y que a pesar de ser compuestos no tóxicos, potencian sinérgicamente la toxicidad del factor cordón.

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El complejo superóxido dismutasa (SOD)/ catalasa, que neutraliza el poder oxídame de los iones superóxido (O2) y del peróxido de hidrógeno (H202), presente en los lisosomas de los fagocitos. Patología: Dos lesiones principales: 1. Tipo exudativo: esta lesión es una reacción inflamatoria aguda con líquido de edema, leucocitos polimorfonucleares y después monocitos que rodean a los bacilos tuberculosos. Este tipo de lesión se observa particularmente en el tejido pulmonar, donde se asemeja a la neumonía bacteriana. 2. Tipo productivo: cuando la lesión está totalmente desarrollada consiste en un granuloma crónico que consta de tres zonas: I) una región central de células gigantes y multinucleadas que contiene bacilos tuberculosos; 2) una zona media de células epitelioides pálidas, con frecuencia dispuestas radialmente, y 3) una zona periférica de fibroblastos, linfocitos y monocitos. Posteriormente se desarrolla tejido fibroso en la periferia, y la región central sufre necrosis caseosa. A esta lesión se le denomina tubérculo Detección y Diagnóstico de Laboratorio: Prueba de Tuberculina: Está basada en la respuesta de hipersensibilidad retardada por células frente a antígenos específicos del bacilo. Pruebas diagnósticas de laboratorio: El diagnóstico definitivo de tuberculosis sólo puede establecerse cuando se cultiva M. tuberculosis. Sin embargo, existen otras pruebas diagnósticas, que ayudan a plantear el diagnóstico de esta enfermedad. Pruebas microbiológicas. Las características tintoriales de M. tuberculosis permiten su rápida visualización (baciloscopia) en muestras clínicas mediante el uso de diferentes técnicas de tinción. La baciloscopia es la herramienta fundamental para el diagnóstico de la TBC y para el seguimiento del tratamiento de los pacientes con tuberculosis. Muestras: Las muestras consisten en esputo fresco, lavado gástrico, orina, liquido pleural, liquido cefalorraquídeo, líquido articular, material de biopsia, sangre u otro material sospechoso. Frotis: EI esputo, los exudados u otro material se examina en busca de bacilos acidorresistentes mediante la tinción de Ziehl-Neelsen. La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos.

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Por esto se denominan bacilos ácido-alcohol resistente o BAAR. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Cultivo, identificación y pruebas de susceptibilidad: Las muestras procesadas recolectadas de sitios no estériles y las muestras centrifugadas de sitios estériles se pueden cultivar directamente sobre medios selectivos y no selectivos. El caldo de cultivo selectivo es con frecuencia el método más sensible y proporciona resultados con mayor rapidez. Un medio agar selectivo (p. ej. Lowenstein-Jensen o Middlebrook 7H10/7H11 en biplaca con antibiótico) se debe inocular paralelamente con los medios de caldo de cultivo. La incubación se efectúa de 35 a 37°C en 5 a 10% de CO2 durante ocho semanas. Si los cultivos resultan negativos en presencia de una tinción acidorresistente positiva, o se sospecha de micobacterias atípicas con crecimiento lento, entonces se debe incubar un conjunto de medios inoculados a temperaturas menores (por ejemplo: 24 a 33 °C) e incubar ambos grupos durante 12 semanas.

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SECCIÓN 17: COCOS GRAM POSITIVOS Género: Staphylococcus Especie: Staphylococcus aureus La intoxicación de origen alimentario que se presenta con mayor frecuencia, es la producida por la ingestión de toxina formada cuando crecen en los alimentos ciertas cepas de S. aureus. A esta toxina se le denomina enterotoxina y produce en el individuo síntomas caracterizados por nauseas, vómitos, diarreas, malestar y debilidad general. Estos síntomas comienzan a manifestarse de 1 – 6 horas después de haber consumido el alimento y aunque en algunos casos la recuperación puede durar varios días. Se han determinado hasta 6 tipos de enterotoxina producidas por S. aureus que son serológicamente distintas, designadas como A, B, C1, C2, D, E y que tienen diferente grado de toxicidad; la mayoría de las intoxicaciones son producidas por el tipo A. Y se requiere de un microgramo de esta toxina para producir los síntomas de intoxicación en el hombre y para que exista esta cantidad de enterotoxinas en el alimento es necesario que s e haya proliferado más de 1’000,000 de células por gramo de alimento. La inactivación por calor es influenciada por el pH y la composición del medio Ej. El tiempo necesario para inactivar el 90 % de la Enterotoxina B es una solución. Amortiguada a 110º C es de 18’, mientras que en caldo de buey es de 60’, debido a que las proteínas ejercen un efecto protector sobre las toxinas. Condiciones de Producción de la Toxina Estafilocócica:  El margen del pH para la producción de la toxina es de 5 – 9 aproximadamente.  Se produce la toxina enana velocidad importante cuando el alimento se encuentra conservado a una temperatura entre 15.6 – 46.1º C.  Además es más probable su producción cuando no hay microorganismos competidores. También su producción se halla influenciada por el tipo de alimento, se produce grandes cantidades en carnes y en alimentos con un pH de baja acidez (menor de 4.6) y una actividad acuosa de 0.86 o más.  En general cuanto mejor medio de cultivo sea el alimento más amplio será el margen de temperatura, pH y aw.  Una importante característica de la enterotoxina es su marcada termo resistencia.

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 No se destruye a temperatura de pasteurización, ni cocción, ni es inactivada a 117º C. la toxina parcialmente inactivada puede reactivarse en alimentos mantenidos a 25º C/ 24 horas.  El cocinado normal del alimento no destruye la toxina formada antes del calentamiento; estos alimentos podrían dar lugar a intoxicaciones, aunque no se hubiera llegado a demostrar la presencia de estafilococos. Alimentos Responsables: Productos de pastelerías, jamón, carne, alimentos mal refrigerados, leche y productos lácteos, salsas enlatadas, cremas, empanadas y aderezos de ensalada. En alimentos cuya naturaleza no permita la proliferación de los St. el problema se presenta si estos alimentos son utilizados como ingredientes en otros alimentos donde los St. si pueden multiplicarse: Ejemplo la gelatina que son utilizados en adornos de pastelería o rellenos de tortas, igualmente ocurre en el queso. Por otro lado en alimentos fluidos como la leche cruda que se mantiene sin refrigeración (se multiplica y elabora su toxina) al pasteurizarla se inactiva a la mayoría o a todos los Stpahylococcus pero no a la toxina que es termorresistente.

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Género: Streptococcus Especie: Streptococcus pyogenes Los Streptococcus están conformados por un grupo heterogéneo de bacterias y no hay un sistema apropiado para clasificarlos, hasta ahora se ha utilizado algunas combinaciones características para ello, como son:  Característica morfológica de la colonia.  Patrones de hemólisis sobre agar sangre. (α, β, ninguna hemólisis).  Composición antigénica de las sustancias de pared celular.  Reacciones bioquímicas y resistencia a factores físicos y químicos). Características Morfológicas de Streptococcus pyogenes:  Cocos Gram (+) que se disponen en cadena, debido a que se dividen en un solo plano; esta cadena presenta un aspecto diplocócico y su longitud depende de factores ambientales, por ejemplo en medio liquido las colonias las cadenas son más largas. En cultivos viejos pueden perder su gran positividad.  Produce una cápsula que está compuesto de ácido hialurónico que impiden la fagocitosis.  La pared celular está compuesta de proteínas, carbohidratos y presenta peptidoglucano.  Vellosidades conformado por proteína M, recubierto de ácido lipoproteico y sirve para adherirse. Cultivo e Identificación de Laboratorio:  Crece en medios sólidos formando colonias discoides de 1 – 2 mm de diámetro.  Las cepas capsuladas del grupo A forman colonias mucoides.  El crecimiento tiende a ser pobre tanto en medios sólidos como líquidos a menos que se enriquezcan con sangre o líquidos de tejidos, además el crecimiento y la hemólisis se incrementa cuando se incuba con 10 % de CO 2.  Son facultativos.  Tº optima, 37º C, 7.4 – 7.6.  Puede formar 2 tipos de colonias :  Amarañadas, formada por células que elaboran mucha proteína M, son virulentas y poco sensible a la fagocitosis por leucocitos humanos.  Lustrosas, formadas por células con poca proteína M, son avirulentas. 79

 Produce β hemólisis en agar sangre.  Los cultivos pueden identificarse mediante pruebas de detección de antígenos específicos del grupo A.  Presenta susceptibilidad a la bacitracina que sirve para la identificación de los Streptococcus del grupo A con 95% de seguridad.  Tiene metabolismo fermentativo siendo el principal producto de este el ácido láctico.  Son catalasa y oxidasa negativas.  Los requerimientos nutricionales son complejos, debido a su capacidad del microorganismo para sintetizar muchos de sus aminoácidos, purinas, pirimidinas y vitaminas.  Son destruidos a 60º en 30 min.

Estructura Antigénica:  Un antígeno especifico de grupo de la pared celular, que está compuesto por un polímero ramificado de L – ramnosa y N – acetil glucosamina, que produce reacción de precipitación en tubos capilares.  Proteínas.- Los Streptococcus del grupo A, producen 3 antígenos proteicos de superficie: M, T y R; que son útiles para la tipificación serológica. Más del 90 % de las cepas estreptocócicas pueden ser clasificadas empleando los antígenos M y T. La proteína M, es el principal factor de virulencia de los estreptococos del grupo A, y con este antígeno se han determinado más de 60 serotipos. Los microorganismos que producen proteína M, son resistentes a la fagocitosis en ausencia de anticuerpos específicos. Los antígenos T, no se asocian con el vello de superficie ni con la virulencia, son tipificados mediante pruebas de aglutinación en portaobjeto.  Antígeno capsular.- compuesto de ácido hialurónico y que resulta ser menos importante como factor de virulencia que la proteína. Determinación de Patogenicidad: 1. Ácido lipoteicoco responsable de la adherencia a las células epiteliales. 2. Proteína M, resistencia a la fagocitosis y a la destrucción entra celular por los tejidos locales y contiguos. También de tejidos alejados, a través del torrente sanguíneo. 3. Hemólisis: estreptolisina O y estreptolisina S. 80

 Estreptolisina O, responsable de la β hemólisis; es inactivada por oxigeno, pero se revierte con agentes reductores como la cisteína o beta mercaptoetanol; también es irreversible, inactivada por colesterol.  Estreptolisina S, también produce hemólisis, ejerce acción lítica sobre glóbulos rojos, blancos y forma de L y protoplastos bacterianos. 4. Toxina eritrogénica, responsable del enrojecimiento de la piel en la escarlatina. Causa bloqueo del retículo endotelial, necrosis miocárdica y hepática y shock en conejos. 5. Enzimas, su papel en la patogenia no está claro, estreptoquinasa, hialuronidasa, proteinasa, etc. Manifestaciones Clínicas:  Faringitis.  Escarlatina. Infecciones Cutáneas:    

Impétigo. Celulitis. Erisipela. Infecciones de heridas y gangrena.

Otras Infecciones:  Sepsis puerperal. Secuelas de Infecciones Estreptocócica Aguda: 1. Fiebre reumática aguda (FRA).- Es una reacción inflamatoria no supurativa que esta epidemiológica y serológicamente relacionada con una infección previa con Streptococcus del grupo A. Se manifiesta con artritis, carditis, eritema marginado o noduloso subcutáneo. Se diagnostica detectando un aumento del título de anticuerpos para por lo menos uno de los diversos antígenos estreptocócicos (estreptolisina O, DNasa o estreptoquinasa). 2. Glomérulo nefritis post estreptocócica aguda (GNA).-S e asocia como una complicación de faringitis o de una infección cutánea y se caracteriza por edema de comienzo agudo, oliguria, hipertensión, insuficiencia cardiaca congestiva o convulsiones.

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Diagnóstico de Laboratorio:  El diagnóstico definitivo de una faringitis estreptocócica solo puede hacerse por cultivo directo. Los hisopados pueden inocularse en caldo de cultivo y examinarse por anticuerpos fluorescentes o en agra sangre, con agrupamiento posterior por sensibilidad a la bacitracina en discos o técnicas serológicas.  De lesiones impetiginosas. El liquido vesicular o pustular inoculado en agra sangre puede proporcionar un crecimiento puro de estreptococos. A medida que las lesiones envejecen, pueden aislarse en forma concominante estreptococos y estafilococos.  Los microorganismos de celulitis y erisipela se cultivan mejor por aspiración con aguja de líquidos histicos. Especialmente del borde que avanza en la erisipela o por inyección salina estéril seguida de respiración.  También pueden aislarse estreptococos de la sangre de pacientes con infecciones más profundas.

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IV UNIDAD: SECCIÓN

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BACILOS Y COCOS ESPOROGENOS

GRAM

POSITIVOS

Género: Bacillus Especie: Bacillus anthracis Especie: Bacillus subtilis Ubicuos, la mayor parte no son patógenos, pero algunas especies causan enfermedad importante en el humano. Bacillus anthracis: El ántrax es una enfermedad importante en animales y el hombre, B anthracis puede ser el agente principal de la guerra biológica, retraso de refutación final de la teoría de la generación espontánea. En estudio de B. anthracis, Koch demostró por primera vez un conjunto de postulados que deben ser satisfechos antes de que un microorganismo pueda ser acreditado como agente etiológico, también introdujo el uso de microorganismos vivos atenuados como una forma de inmunización. Características Morfológicas:  Bastón recto, Gram +, sus extremos aparecen cuadrados y sus ángulos a menudo son tan agudos, que los bacilos en cadenas están en contacto en esos puntos.  Cuando se examina frotis de sangre o tejidos de un animal infectado, los microorganismos generalmente se encuentran solos o en pares, pero cuando el frotis procede de un cultivo, se presentan formando largas cadenas.  No es móvil.  En animales infectados, forma cápsula, pero in vitro no lo forma a menos que sean cultivados en un medio con bicarbonato y en presencia de 5% de CO2.  Presenta esporas en cultivos, en el suelo y en los tejidos y exudados de animales muertos, pero no en la sangre ni tejido de animales vivos. Cultivo:  Aeróbico, aunque puede crecer de manera escasa en ausencia de oxígeno, pH. Óptimo de 7 a 7.4.  T° optima de crecimiento 37°Ccon un rango entre 12 a 45°C. 83

 Crece en medios comunes de laboratorio, pero las características morfológicas de las colonias se observan mejor en agar con 5% de sangre libre de antibióticos (no hemolítico).  Característica de la colonia en medio simples: Blanco + grisáceo, de 2-3mm de diámetro, elevadas, opacas, con borde irregular, estas colonias al microscopio aparecen como masas enmarañadas de largos tirabuzones, son de consistencia membranosa y poco emulsionables. Identificación de Laboratorio:  Con la reacción de sarta de perlas, que separa B. anthracis virulento y avirulento de B. cereus, y otros aerobios formadores de esporas. La reacción de Sarta de perlas se realiza inoculando la cepa en la superficie de un medio sólido al que se agrega entre 0.05 a 0.5 unidades de penicilina g/ml. Se incuba durante 3 a 6horas y aparecen células grandes y esféricas formando cadenas en la superficie del medio como un collar de perlas.  Otra prueba para diferenciar B anthracis, de B cereus, se basa en la susceptibilidad de B. anthracis, a un bacteriófago variante, fago gamma, las células de B. anthrasis se lisan.  La diferencia entre B. anthracis y B. subtilis: Fermentación del manitol (B. anthracis no fermenta, B. subtilis fermenta).  B. anthracis virulentos son los únicos microorganismos que producen colonias rugosas en ausencia de CO2 y colonias mucoides cuando crecen en un medio con bicarbonato de sodio en la atmósfera con 5% de CO 2.  Prueba Biológica: Inoculando a un ratón una suspensión de un cultivo en agar de B. anthracis. El ratón muere habitualmente de 2 a 5 días, después de la inoculación con síntomas de ántrax y los microorganismos se pueden recuperar de la sangre del corazón. Resistencia:  Extremadamente resistentes a agentes físicos y químicos, una T° de 120°C/ 15min es adecuada para activar las esporas.  La forma vegetativa es diferente a la de otras bacterias, no formadas de esporas y es destruida a 54°C/30min.  En tierra seca y pastos resisten durante años.  Los productos animales contaminados con esporas del ántrax, solo puede esterilizarse en autoclave.

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Estructura Antigénica:  1 Polipéptido capsular compuesto de ácido D-glutámico  1 Antígeno somático, que es un polisacárido componente de la pared celular compuesto de N-acetilglucosamina y D-galactosa.  La toxina de ántrax que es una proteína compleja compuesta de: Un antígeno protector (AP), un factor letal (FL), un factor de edema (FE). Otra forma es el ántrax pulmonar, y se conoce también como la “enfermedad de los cardadores de lana”, y se adquiere por la inhalación de la espora, su síntomas son típicamente cono una infección respiratoria, es pocos días se hace muy severa y en esta forma el paciente muere generalmente en 24 horas. Otra forma es el ántrax intestinal, con manifestaciones de nauseas, vómitos y diarreas asociadas con una profunda postración y eventualmente con shock y muerte. De cualquiera de las formas puede haber invasión del torrente circulatorio y localización en las meninges produciendo meningitis fatal. Diagnóstico de Laboratorio:  Muestra: Liquida de la pústula maligna, esputo o sangre.  Tinción Gram. Fuertemente presuntivos, pero más insuficientes para un diagnóstico definitivo, para empezar un tratamiento inmediato por la gravedad del cuadro.  Anticuerpos precipitantes o hemaglutinantes en el suero de las personas o animales infectados o vacunados.  Cultivo. Diferenciación con los antracoides, gérmenes saprófitos muy similares pertenecientes al mismo género. Hemocultivo, posible existencia de una septicemia fuerte. Para llegar a género: Movilidad (-), formación de esporas (+), catalasa (+), crecimiento en aerobiosis (+). Determinantes de Patogenicidad: Cápsula: Que interfiere en la fagocitosis y parece ser un importante factor en la patogenia del microorganismo, especialmente en los estudio primarios, forma anticuerpos pero no patógenos contra la enfermedad. Toxina del ántrax. A quien se atribuye los signos y síntomas de la enfermedad, éste se acumula en el organismo hasta llegar a un nivel máximo en el momento de la muerte del animal que se produce por insuficiencia respiratoria y anoxia por acción de la toxina sobre el SNC.

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Infección Clínica: En animales la enfermedad, ocurre en los bovinos en los cuales el microorganismo ingresa a través de microscópicos cortes en la mucosa de la boca o estómago, el animal permanece asintomático hasta unos días o unas horas antes de su muerte, la tasa de mortalidad el del 80% y los campos contaminados con esporas continúan siendo fuente de infección durante unos 20 – 30 años. En humanos, la forma más común es el ántrax industrial, en la que la espora penetra a través de la piel y se manifiesta en 2 a 5 días luego de la infección con la aparición de pústula que en pocos días se convierte en una vesícula llena de un líquido oscuro, negro azulado, que se denomina pústula maligna. La lesión generalmente se encuentra en las manos, antebrazos o cabeza.

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Género: Clostridiun Especie: Clostridiun tetani Clostridiun tetani: Agente causal del tétano, raro en países desarrollados; en países en vías de desarrollo el tétano es neonatal y tiene una buena representatividad en la mortalidad total. La tasa de mortalidad tanto en los neonatos como en los demás es bastante alta, especialmente en niños y ancianos. Características Morfológicas:    

Es un bacilo bastante largo y delgado cuando se le compara con otros Cl. Gram + en cultivos jóvenes Habitualmente gran – en cultivos viejos y en frotis de heridas. Produce una espora terminal y deformante (palillo de tambor), la espora no se colorea con gran, apareciendo como una estructura redondeada e incolora, en incubación prolongada las células se lisan dejando la espora con restos de la célula vegetativa adheridos.  Movilidad muy activa por flagelos peritricos. Características de Cultivo:    

Anaerobio. T° óptima de crecimiento 37°C pH óptimo de crecimiento 7.4 Requiere medios que contengan cierto número de aminoácidos y vitaminas que son cubiertos con agar sangre.  Desarrolla Swarming  También crece en caldo de carne cocida, con escaso crecimiento en 48horas.  En medio tioglicolato, sustancias reductoras, cisteína y tioglicolato de sodio, se siembre por picadura hasta el fondo.  Caldo de Tarozzi.

Identificación de Laboratorio: 1. Se debe transportar en recipientes con dióxido de carbono 2. Cultivarse en medios reducidos

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3. Incubar en condiciones anaeróbicas. A veces el aislamiento es difícil por la presencia de otros microorganismos en la muestra clínica. Para facilitar el aislamiento se procede de la siguiente manera:  Siembra de la muestra en caldo, incubar por 24 a 37°C.  Calentar el cultivo a 80°C/20, para destruir las formas vegetativas y no a las productoras de esporas, de esta manera se recupera C. tetani 4. Sembrar en medio sólido en la mitad de la placa por 24horas a 37°C, y se observa un fino crecimiento que avanza a la parte del medio no sembrado. 5. La prueba final del aislamiento de C. tetani, consiste en ver si es capaz de elaborar la toxina. Prueba en vivo, incubando a los ratones una cepa del cultivo, previamente a uno de ellos se administra antitoxina tetánica. El ratón no protegido muere con los síntomas del tétano. Resistencia: La espora no es destruida por ebullición durante 20 minutos, se destruye en autoclave a 120°C/15 minutos. Estructura Antigénica: Antígeno de espora Antígeno somático

Único en todas las cepas

Antígeno flagelar Antígeno de toxina

10 diferentes tipos de antigénicos Único en todas las cepas y su neutralización con una antitoxina.

Determinación de Patogenicidad:  Parece que es necesario la asociación con otras bacterias en la infección local que ayudan a disminuir el potencial de óxido /reducción en el sitio de la lesión.  C. tetani, no es invasivo (no invade otros tejidos), produce un infección localizada  Toxina tetánica Toxina Tetánica: Tetanospasmina, neurotoxína extremadamente tóxica, liberada por autólisis celular. La forma molecular intracelular consiste en una cadena polipeptídica, con un peso molecular de 150,000, durante su liberación se acompaña de una 88

muesca, formando 2 cadenas polipeptídicas: una de peso molecular de 100,000 y otra de peso molecular de 50,000, responsable de la actividad tóxica La toxina liberada por las células vegetativas puede alcanzar el SNC, mediante transporte axonal retrógrado o por la corriente sanguínea. En el SNC, la toxina se fija a los gangliósidos en la médula espinal y en el tallo celular e inhibe la liberación desustancias transmisoras inhibitorias provocando hipereflexia y espasmos musculares a veces generalizados.  Trismus: Contracción del músculo masetero (maxilar inferior), risa sardónica.  Contracción de los músculos de la espalda: Posición opistótonos.  Flexión de brazos y piernas. Cualquier estímulo produce un espasmo, el dolor es intenso, el paciente permanece plenamente consciente hasta el momento de su muerte, que generalmente se da por falla respiratoria. La tasa de mortalidad es alta. Diagnóstico: Se basa en el cuadro clínico, las heridas que se ven en la placa, son heridas punzantes simples, sin embargo puede ser por fracturas compuestas, levantamiento de la piel en drogadictos, la otitis externa, extracciones dentarias, cordón umbilical. Prevención: 1. Inmunización activa, con toxoide, la toxina inactivada en cuanto a su actividad tóxica, pero no es su capacidad inmunógena (en el 1° año de vida DPT o triple). 2. Atención apropiada de las heridas contaminadas. 3. Empleo profiláctico de la antitoxina, preparada en animales o humanos, ésta bloquea la toxina que aún no se ha fijado en el SNC. 4. Administración de penicilina.

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Género: Clostridium Especie: Clostridiun botulinun Agente etiológico del botulismo que es una intoxicación alimentaría con un síndrome neurológico grave. Características Morfológicas:  Bacilo recto o ligeramente curvo Gram positivo  Presenta flagelos peritricos  Produce esporas termorresistentes, ovales, sub terminales, cuya formación se estimula sembrando en medios alcalinos con glucosa e incubándolo entre 20 a 25 ºC. No se produce esporas a temperaturas mayores. Cultivo:  Anaerobio.  Sus requerimientos nutricionales del microorganismo son complejos y una de las condiciones es que se cultive únicamente en medios que contienen sustancias reductoras de oxigeno e incubarlas en condiciones anaeróbicas. Produce β-hemólisis en agar sangre con excepción del tipo serológico G. Resistencia:  La espora es termorresistente, resistiendo por horas a 100 ºC, hasta 10 minutos a 120 ºC. También resisten a las irradiaciones.  Su resistencia disminuye en presencia de pH ácido y en presencia de NaCl.  El tipo A es el más letal que todos los demás tipos serológicos y también es más termorresistente que los tipos B y C. El tipo E es el más sensible. Estructura Antigénica:  Presenta antígeno somático y antígeno de espora que son únicos en todas las cepas.  La toxina que es una exotoxina, que se libera cuando la bacteria muere y se lisa. De acuerdo a la toxina se distinguen siete tipos serológicos que se designan como A, B, C (C1 y C2), D, E, F y G. Los tipos A, B y E (y en ocasiones F) son la causa principal de la enfermedad en el hombre. Los tipos A y B se vinculan con varios tipos de alimentos y el tipo E predominan en productos de pesca. El tipo produce cuello blando en aves; el tipo D botulismo en mamíferos

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Determinantes de Patogenicidad:  La toxina son proteínas neurotóxicas; formada por una cadena pesada y una ligera unidas por un puente disulfuro. La cadena pesada sirve para enlazar de manera específica y con avidez a la placa terminal nerviosa motora para facilitar la penetración de la cadena ligera que es la tóxica. La cadena ligera bloquea la liberación de la acetilcolina en las sinapsis y en las uniones neuromusculares; como consecuencia se produce parálisis flácida.  La dosis mortal para humanos está aproximadamente entre 1 a 2 µg..  La temperatura óptima para la producción de la toxina está entre 30 a 38 ºC. El pH se considera que debe ser mayor de 4.6.  La toxina es inactivada calentando el alimento que la contiene a 100 ºC durante un minuto o a 75 a 85 ºC durante 5 a 10 minutos. También por exposición directa a la luz del sol durante cinco días.  Su producción está asociada a bacteriófagos del C. botulinum, por lo que las células tratadas contra el bacteriófago están libres de la capacidad de producir toxinas.  El proceso del tratamiento del alimento en las industrias es a 121 ºC por 30 minutos. Patogenia: Los síntomas aparecen de 18 a 24 horas después de ingerir el alimento tóxico, estos comprenden: transtornos visuales (incoordinación de los músculos oculares, visión doble), incapacidad para deglutir y dificultad para hablar; los signos de parálisis bulbar son progresivos y la muerte ocurre por parálisis respiratorio o cardíaco. No hay fiebre. El paciente permanece totalmente consiente hasta poco antes de su muerte; la tasa de mortalidad es alta. Diagnóstico de Laboratorio: Con frecuencia se puede detectar la toxina en el suero del paciente o en el alimento mediante la prueba biológica: Se inocula a dos ratón intraperitonealmente una suspensión del suero del paciente o una suspensión del alimento, previamente a una de ellos se le administra una inyección con antitoxina botulínica polivalente (A, B y E); el ratón no protegido con la antitoxina desarrolla los síntomas de botulismo y muere.

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SECCIÓN 19: BACILOS GRAM POSITIVOS REGULARMENTE ASPOROGENOS Género: Listeria Especie: Listeria monocytogenes

Características Morfológicas:  Es causa importante de una amplia gama de enfermedades en el hombre.  Es un bacilo corto Gram positivo. No formador de esporas. Tienen tendencia a aparecer en cadenas cortos de 3 a 5 microorganismos, también puede presentar una típica disposición difteroide, es decir en empalizada, propiedad que puede confundir con las corinebacterias. En cultivos incubados de 3 a 6 horas a 37ºC predominan las formas bacilares, pero luego la forma prevalerte es la de bacilos cortos. En colonias rugosas de 3 a 5 días de cultivo se observan estructuras largas filamentosas.  De 20 a 25ºC presenta una activa movilidad por acción de 4 flagelos peritricos, pero a 37ºC solo se forma un flagelo polar, esta característica es útil para su diferenciación de Erysipelothrix y corinebacterias. Características de Cultivo:  La temperatura óptima de crecimiento es de 37ºC pero pueden crecer en un amplio rango de temperatura, hasta a 2.5ºC. Esta capacidad de crecer a bajas temperaturas es utilizada para su aislamiento a partir de muestras que contienen una flora mixta , es decir la muestra de tejido se mantiene a 4ºC durante algunos días antes de ser inoculado en el medio bacteriológico. Es anaeróbico facultativo.  Es un microorganismo delicado y crece bien en agar tripticasa donde las colonias son translucidas y fácilmente reconocibles por su característico color verde azulado cuando se observa con luz oblicua. También crece en agar sangre de carnero donde desarrolla colonias semejantes a Streptococcus de 0.5 a 1.5 mm. de diámetro y con producción de βhemólisis.  Es Catalasa positiva.

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Estructura Antigénica: Presenta antígenos O y H, sobre cuyas bases la bacteria se ha separado en cuatro grupos serológicos, cada uno de ellos con uno o más serotipos. Los serotipos Ia Ib y IVb, causan por lo menos el 90% de todas las infecciones por Listeria en todo el mundo. Determinantes de Patogenicidad:  Su virulencia es multifacética y aparentemente se debe a componentes antifagocíticos presentes en la superficie celular del microorganismo y también a productos insolubles que son excretados durante el crecimiento bacteriano como la hemolisina que es oxígeno lábil, termolábil y cuando se inyecta por vía endovenosa es letal para el ratón.  La hemolisina de la Listeria puede actuar durante la infección rompiendo las membranas, especialmente aquellas de las vacuolas fagocíticas y de los lisosomas  Además, presenta el antígeno lipolítico cuyo papel en la infección no está claro.  Los componentes de superficie que parecen intervenir en la fagocitosis impidiendo que esta se lleve a cabo en forma exitosa de tal manera que la bacteria queda parasitando los mononucleares. Las propiedades físicas, químicas y biológicas de los componentes de la pared celular purificada de la Listeria patógena, son notablemente similares a las endotoxinas y se cree que induce la producción de anticuerpos que pueden reaccionar bajo condiciones apropiadas con los propios eritrocitos del hospedero, causando una lisis in vivo mediada por complemento. Los anticuerpos responsables son de la clase Ig M. Manifestaciones Clínicas: Produce una amplia variedad de síndromes clínicos, que va desde una leve enfermedad similar a la gripe, hasta la listeriosis neonatal fulminante asociada con tasas de mortalidad del 54 al 90%. En el adulto, las infecciones mayores son meningitis (55%), bacteriemia primaria (25%), endocarditis (7%) e infección no meningítica del SNC (6%). Más de la mitad de estos pacientes presentan trastornos subyacentes como cáncer, alcoholismo, cirrosis, diabetes o están recibiendo drogas inmunosupresoras. Patogenia: L. monocytogenes ingresa a la sangre a través del aparato gastrointestinal después de la ingestión de alimentos como queso y vegetales. La proteína de la superficie de la pared celular de la bacteria denominada internalina, interactúa con un receptor de las células epiteliales promoviendo la fagocitosis 93

al interior de las células epiteliales; luego la bacteria encerrada en el fagolisosoma es activada por el pH bajo para producir listerilisina O, la cual provoca lisis de la membrana del fagolisosoma y permite al la listeria escapar hacia el citoplasma de otra célula epitelial. Diagnóstico de Laboratorio: Cultivo: Se basa en el aislamiento de la bacteria de las muestras clínicas apropiadas, dependiendo del síndrome. Los materiales usuales incluyen sangre, líquido cefalorraquídeo, líquido amniótico y secreciones genitales. La combinación de la técnica de enriquecimiento de la muestra en frío y el uso de la luz oblicua para el examen de las colonias es básica. Debe hacerse tinción de Gram a partir de las muestras y examinarse en busca de los típicos bacilos Gram positivos pleomórficos. La identificación de un cultivo se basa en la demostración de la β-hemólisis, producción de catalasa y la movilidad entre 20 a 25 ºC. Las pruebas serológicas no son recomendadas por que presentan reacción cruzada con otros microorganismos Gram positivos incluyendo estafilococos Inoculación en Animales: La inoculación de L. monocytogenes en el saco conjuntival de un conejo joven produce en 24 a 36 horas, queratoconjuntivitis purulenta (Prueba de Antón). La inoculación en la vena marginal de la oreja del conejo provoca una notable monocitosis. La inoculación intraperitoneal en ratones da como resultado foco de necrosis en el hígado y la muerte de los animales.

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SECCIÓN

20:

LOS BACILOS GRAM POSITIVOS IRREGULARMENTE ASPOROGENOS

Género: Corynebacterium Especie: Corynebacterium diphtheriae Características Morfológicas:  Es un bacilo Gram positivo que no forma esporas.  En frotis teñido aparecen en empalizadas o como células individuales, formando ángulos agudos unas con otras en formaciones en V o L. Estas formaciones son causadas por el movimiento en saltos que se producen cuando dos células se dividen. Presenta en un extremo una dilatación que le da la forma de palo de raqueta. A lo largo del cuerpo también presentan gránulos metacromáticos que son cúmulos de polifosfatos polimerizados que le da el aspecto de rosario. Cultivo:  Es facultativo, pero crece mejor en condiciones aeróbicas.  Se utilizan medios complejos para el aislamiento primario, para la caracterización de la colonia y para la producción comercial de la toxina.  Muchas cepas crecen como una película cérea en la superficie de medios líquidos.  El medio de Löffler es útil para el aislamiento primario del microorganismo, donde crece al cabo de 24 a 48 horas con una incubación a 37 º C formando diminutas colonias brillantes de coloración blanco-grisácea. Se puede incorporar también a este medio, sales de telurito, con la finalidad de disminuir el número de contaminantes y las colonias del microorganismo adoptan un color negro o gris característico. En el medio con telurito se puede diferenciar tres tipos principales de colonias:   

Gravis, que son colonias grandes, planas, de color gris a negro, con una superficie roma. Mitis, colonias de tamaño intermedio que son más pequeñas, más negras, brillantes y más convexas. Intermedius, son muy pequeñas y lisas o rugosas.

Resistencia: Resistente a la acción de la luz, desecación y congelamiento que muchos de los bacilos no formadores de esporas. Son destruidos por ebullición durante un 95

minuto, o por exposición durante 58 º C durante 10 minutos, son destruidos fácilmente por la mayoría de los desinfectantes de uso rutinario. Estructura Antigénica:  La toxina, que es única en todas las cepas.  Antígeno K, que son proteínas termolábiles y que se encuentran localizadas en las capas superficiales de la pared y es el responsable de la invasividad y virulencia.  Antígeno O, común en todas las corinebacterias parásitas del hombre y los animales. Es un polisacárido que contiene arabinogalactanos, es termoestable. Determinantes de Patogenicidad:  Invasividad. Está dada por la cápsula. Además también existe un factor que coadyuva a la virulencia que es un glucolípido tóxico que contiene ácido corinemicólico y ácido corinemicolénico. También tiene factores adicionales que desempeñan papel importante en la invasividad, como son: neurominidasa y el N-acetilneurominato liasa, que son fuente fácilmente accesible de energía para las bacterias que habitan las membranas mucosas.  Exotoxina. Es el principal determinante bioquímico de la patogenia de la infección y responsable esencial de todos los efectos patológicos. Esta toxina es producida sólo por cepas infectadas con un bacteriófago moderado que transporta el gen estructural para la producción de la toxina. Es secretada como una única cadena polipeptídica no tóxica que adquiere toxicidad cuando sufre un clivaje en dos fragmentos funcionalmente distintos, A y B por un puente disulfuro. Ambos fragmentos son esenciales para la citotoxicidad. El fragmento B se une a los receptores específicos en la membrana celular del huésped y media la entrada del fragmento A , la cual inhibe catalíticamente la síntesis de proteínas causando necrosis y los efectos neurotóxicos. Patogenia: C. diphtheriae es el único patógeno humano del grupo; se presenta en la naturaleza en vías respiratorias, heridas o sobre la piel de personas infectadas o de portadores normales. Se propaga por gotas microscópicas de las secreciones respiratorias o por contacto con individuos susceptibles; después los bacilos crecen sobre las mucosas o en escoriaciones de la piel y los bacilos toxigénicos comienzan a elaborar su toxina. Esta toxina se absorbe en las mucosas y provoca la destrucción del epitelio y la respuesta inflamatoria superficial. El epitelio necrosado queda embebido en un exudado de fibrina, 96

eritrocitos y leucocitos de modo que se forma una pseudomembrana de color grisáceo, comúnmente sobre las amígdalas, faringe o laringe. La bacteria continúa produciendo activamente la toxina en la membrana. Dicha toxina se absorbe y produce daño tóxico a distancia, como: degeneración parenquimatosa, infiltración grasa y necrosis en miocardio, hígado, riñones y suprarrenales; con frecuencia produce daño nervioso causando parálisis del paladar blando, músculos oculares o de extremidades. La difteria en heridas o sobre la piel se observa principalmente en los trópicos; puede formarse membranas sobre una herida infectada que no cicatriza. La pequeña cantidad de toxina que se absorbe durante la infección cutánea promueve la formación de anticuerpos antitoxina. Diagnóstico de Laboratorio: Sirve para confirmar la impresión clínica y nunca debe retrasarse el tratamiento específico en espera del informe del laboratorio. Muestra. Frotis de lesiones nasales, faríngeas o de otras regiones bajo sospechas, antes de administrar antimicrobianos. Frotis. Con azul de metileno alcalino o tinción de Gram, muestran bacilos en forma de rosario, agrupadas en formas de V o L. Cultivo. En los medios indicados con anterioridad para observar las características de crecimiento. Todo cultivo parecido al de la difteria debe someterse a una prueba de virulencia antes de hacer el diagnóstico bacteriológico de difteria. Se pueden hacer de la siguiente manera: 1. Prueba in vivo: Un cultivo en agar inclinado de Löffler se emulsiona en agua y se inyecta 4 ml. por vía subcutánea a dos cobayos a uno de los cuales se administra 2 horas antes 1000 a 2000 unidades de antitoxina por vía intraperitoneal. El animal no protegido debe morir en 2 o 3 días, en tanto que el animal protegido sobrevive. 2. Prueba in vitro: Se satura una tira de papel de filtro con antitoxina y se coloca sobre una placa de agar que contenga 20 % de suero de caballo. Los cultivos que deben someterse a la prueba de toxicidad, se extienden en bandas a través de la placa en ángulo recto con el papel filtro. Después de 48 horas de incubación, la antitoxina que se difunde a partir de la tira de papel precipita la toxina que se difunde a partir de los cultivos toxigénicos y se producen líneas irradiadas desde la intersección de la tira con las bacterias en crecimiento.

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SECCIÓN 29: STREPTOMYCES Y GENEROS RELACIONADOS Género: Streptomyces Especie: Streptomyces griseus Streptomyces (Waksman y Henrici, 1947): Es uno de los géneros más característicos y conocidos de la división Actinobacteria, la cual agrupa a bacterias filamentosas. Los actinomicetos, históricamente, se han venido agrupando según criterios morfológicos, tales como la capacidad de formar filamentos ramificados y esporas, los cuales ha llevado durante largo tiempo a ser confundidos con hongos. Por ser considerado saprófitos, el papel como patógenos de los Streptomyces está relacionado con el hecho de ser agentes etiológicos de actinomicetomas; sin embargo aún no está bien definido su papel como agentes productores de infecciones sistémicas. Los Actinomicetos están ampliamente distribuidos en la mayoría de tipos de suelo y en la vegetación descompuesta en todas las zonas climáticas, y por sus propiedades bioquímicas y metabólicas, así como por su participación en la descomposición de tejidos animales y vegetales en el humus, son miembros importantes del sistema de descomposición del suelo. La mayoría produce esporas (también denominadas conidios) en los extremos de las hifas aéreas. Streptomyces se caracteriza por poseer una morfología particular en donde se diferencian dos formas de crecimiento, una primaria o asimilatoria y una secundaria o reproductiva. El género es de gran importancia biotecnológica debido a que como metabolitos secundarios produce antibióticos que son de amplio uso en medicina humana y veterinaria, así como compuestos represores de tumores, enzimas y vitaminas. A pesar de la importancia de Streptomyces como uno de los elementos característicos de las poblaciones microbianas edáficas, se conoce poco acerca de su comportamiento en este ambiente, siendo reconocida la necesidad actual del estudio de la distribución del género en diferentes regiones climáticas y ecológicas. Se encuentran reportadas numerosas formas de detección e identificación de aislamientos de Streptomyces; la más reconocida y empleada es la técnica de cultivo de enriquecimiento, en donde mediante la formulación de un medio de cultivo con los nutrientes apropiados y la utilización de condiciones de crecimiento adecuadas, es posible obtener aislamientos primarios de microorganismos particulares. Una metodología alternativa, independiente del aislamiento, se basa en la amplificación de los genes ribosomales y su análisis por secuenciación, patrones de restricción o electroforesis en geles con gradientes desnaturalizantes, para definir la diversidad genética de las comunidades bacterianas en el ambiente. La identificación de estas bacterias sigue siendo difícil, y aún hoy en día su diagnóstico y clasificación principalmente se basa en el estudio de las 98

características morfológicas (macro y microscópicas), en las quimiotaxonómicas y en las bioquímicas Gram positivas, aerobias, catalasa positiva, quimiorganotrofas, no se colorean con la técnica de Ziehl-Neelsen ni de Kinyoun (decoloración por acido sulfúrico al 2%), producen filamentos (o micelios) largos (por lo general de 0.5 a 1.0 μm de diámetro y una longitud indefinida), muy ramificados y que no se fragmentan, filamentos aéreos pueden ser rudimentarios o extensos y pueden estar embellecidos por espirales, enroscamientos o ramificaciones múltiples, los filamentos aéreos de muchas especies producen esporas (comúnmente llamadas conidias), con frecuencia en cadenas, estas pueden ser rectas o flexuosas, enruladas o espiraladas. A menudo carecen de paredes transversales en la fase vegetativa. La superficie de la espora puede ser lisa, rugosa o espinosa. Forma pigmentos asociados con las esporas (azules, verdes, grises, rojos, violetas, blandos o amarrillos). Presenta diversas enzimas como las proteinasas y las hidrolasas. G + C = 69 – 78 mol %. Pared celular con ácido diaminopimélico (L-DAP), glicina, ausencia de polisacáridos o ácidos micólicos (L-DAP específico de Stretomyces, Nocardioides e Intrasporangium). La menaquinona predominante es la de tipo MK-9. A diferencia de Norcardia, Streptomyces no reduce nitratos o nitritos. Hidrolizan con rapidez la caseína e hidrolizan más lentamente la xantina y la tirosina. Las tierras alcalinas y neutras son las más favorables para el desarrollo de Streptomyces que los suelos ácidos. Las colonias presentan aspectos ceroso, de aspecto polvoroso, de color blanco grisáceo, común en la mayoría de los Streptomyces, variando del color crema al negro, como sucede con S. somaliensis; sin embargo, estos aspectos no son específicos, y dependen de las condiciones de cultivo. Son pegajosas y se adhieren al agar debido a que los filamentos profundos penetran en el medio y ancla la colonia. Crecen en medios simples o complejos (medios Saboraud, Ben-nett, Lowenstein-Jensen) formando filamentos ramificados (hifas) aéreas, que poseen cadenas de conidias que no se fragmentan. Son los únicos que forman micelios aéreos en los cultivos. Los cultivos muestran su crecimiento entre dos a diez días, cultivados a temperaturas de 37 °C o, aún mejor, a 30° C. En cultivos estacionarios en caldo los microorganismos se desarrollan en la superficie como una alfombra hasta que se sumergen debido a su propio peso. En cultivos líquidos aireados y agitados se desarrollan en microcolonias esféricas y no producen filamentos aéreos Son los actinomicetos más abundantes de la naturaleza. Se encuentran de forma natural unos pocos centímetros por debajo de la superficie del suelo, en el agua y en los restos orgánicos. Dan el olor característico a los suelos (olor a tierra mojada) por la geosmina. Unas pocas especies producen infecciones en el ser humano (S.somaliensis, S.griseus, S.paraguayensis). Afectan a cultivos como la papa ( S.scabies, S.acidiscabies, S.turgidiscabies) Capaces de degradar sustancias complejas lignocelulosa, quitina o peptidoglicano contribuyendo notablemente a la mineralización de estos compuestos en el suelo y compostaje. 99

Tienen gran importancia en los campos de la industria y farmacéutico como los principales productores de antibióticos p. ej.: S.aureofaciens (tetraciclina), S.erythraeus (eritromicia), S.fradiae (neomicina), S.griseus (estreptomicina), S.racemosus (terramicina), S.venezuelae (cloranfenicol), etc. Streptomyces producen más de 6000 productos químicos distintos entre agentes antibacterianos, antifúngicos, agentes antitumorales, antihelmínticos e inmunosupresores.  Antibióticos antifúngicos  Nistatina (S. noursei)  Anfotericina B (S. nodosus)  Pimaricina (S. natalensis)  Antibióticos antibacterianos  Eritromicina (S. erythreus)  Espiramicina (S. ambofaciens)  Neomicina (S. fradiae)  Estreptomicina (S. griseus)  Tetraciclina (S. rimosus)  Vancomicina (S. orientalis)  Rifamicina (S. mediterranei)  Cloranfenicol (S. venezuelae)  Daptomicina (S. roseosporus)  Inmunosupresores  Tacrolimus (S. tsukubaensis)  Sirolimus (S. hygroscopicus) Diferenciación de las Especies: Entre 1949 y 1957 más de mil especies han sido descritas en el género Streptomyces, llegando a aumentar el número hasta 3.100 a partir de 1970, basándose los criterios en los aspectos morfológicos y la pigmentación de los cultivos. Actualmente pueden estar inventariadas 300 especies. La identificación de la especie requiere numerosas pruebas fenotípicas; no es necesario hacerlo para el diagnóstico en el laboratorio de rutina. Biología Molecular: Para la identificación del género entre los actinomicetos ha sido establecido un método de PCR-RFLP, por el equipo de Steingrübe, utilizando los eslabones complementarios de la “Heat Shock Protein” (hsp 65). Para la identificación de la especie se utiliza la amplificación por PCR de los ARN 16s.

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Epidemiología:  Estas bacterias están ampliamente distribuidas en el medio ambiente.  S. somaliensis, prefiere los suelos áridos arenosos, y su localización ha sido principalmente reportada en África, Arabia, México y América del Sur (Brasil y Venezuela).  S. paraguayensis y otros Streptomyces sp. han sido aislados de suelos, de vegetales en descomposición y de plantas.  A excepción principalmente de S. somaliensis, el cual ha sido identificado como uno de los agentes etiológicos del actinomicetoma (en Arabia Saudita, Nigeria, Níger, Sudán, Somalia, África del Sur, Venezuela y Estados Unidos), estas bacterias han sido clásicamente consideradas como saprófitas, y la evaluación de su rol en patología humana es aún no bien conocida.  A los Streptomyces les corresponde un 15,4% de las cepas de actinomicetos aerobios aislados de las muestras clínicas recibidas en el Centro para Control de las Enfermedades y Prevención de Atlanta, EUA, entre los años de 1985 y 1988, siendo S. griseus la especie aislada con mayor frecuencia después de Nocardia asteroides y Actinomadura madurae. Las muestras positivas correspondieron en orden de frecuencia a las de expectoraciones, de heridas, de sangre y de cerebro.  En un estudio de Mishra, este tercer lugar ha sido confirmado, después de Nocardia asteroides y N. brasiliensis.  En el Instituto Pasteur de París, en el Centro Nacional de Referencia de Micosis Humanas de Antifúngicos y Actinomicetos, la proporción de los Streptomyces en 1998 fue de 27% de los aislamientos clínicos recibidos. Aspectos Clínicos: A pesar del importante número de especies pertenecientes al género Streptomyces, solamente tres especies se relacionan como patógenos en humanos; estas son: S. somaliensis, S. griseus y S. paraguayensis. El papel como patógeno oportunista de los Streptomyces tiende a definirse frente al creciente número de infecciones sistémicas reportadas en la literatura, tales como: peritonitis), pericarditis crónica, septicemia, paniculitis, absceso cerebral, linfadenitis cervical, neumopatía nodular en sujetos seropositivos a VIH, endocarditis, sobreinfección pleural y neumonía. Sin embargo, otras especies como S. albus, S. coelicolor y S. violaceoruber han sido aisladas de caries dentarias, de expectoraciones, de muestras de amígdalas, de sangre y cutáneas, sin que el rol principal como patógenos sea reconocido.

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Tratamiento: Para el tratamiento de las infecciones por los actinomicetos aerobios, son principalmente utilizados los siguientes antibióticos o quimioterapéuticos: estreptomicina, en asociación con dapsona, o el trimetroprim-sulfametoxazol. Según McNeil, los antibióticos más activos in vitro serían la amikacina (100% de cepas sensibles), la minociclina (90%), la eritromicina (86%), la doxiciclina, el imipenem (81%) y la ceftriaxona (80%). El 29 % de las cepas de S. griseus se mostraron resistentes in vitro al trimetroprim-sulfametoxazol.

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SECCIÓN 30: LOS MYCOPLASMAS Género: Mycoplasma Especie: Mycoplasma pneumoniae Mycoplasma: Pertenece a la clase Mollicutes, que incluye bacterias que tienen genomas pequeños, carecen de una pared celular y tienen un bajo contenido de GC (18-40%). La familia Mycoplasmataceae contiene dos géneros que infectan a humanos: Mycoplasma y Ureaplasma, a los que usualmente se les menciona simplemente como mycoplasmas. Aunque hay muchas especies de mycoplasmas, sólo cuatro se reconocen como patógenos de humanos: Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium y Ureaplasma urealyticum. Existen muchas otras espécies que han sido aisladas a partir de humanos, pero su papel en la enfermedad no está bien establecido. En la Tabla 1 se presentan las enfermedades causadas por M. pneumoniae, M. hominis, M. genitalium y U. urealyticum. Tabla 1. Enfermedades causadas por mycoplasmas. ORGANISMO M. pneumoniae

ENFERMEDAD Enfermedad respiratoria del tracto superior, traqueo bronquitis, pulmonía atípica Píelonefritis, enfermedad inflamatoria pélvica, fiebre del post parto (puerperal Uretritis no gonocócica Uretritis no gonocócica

M. hominis M. genitalium U. urealyticum Morfología y Fisiología:

Los mycoplasmas son las bacterias más pequeñas de vida libre. Su tamaño va de 0.2 – 0.8 micrómetros, por lo cual pueden atravesar algunos filtros utilizados para la eliminación de bacterias. Además poseen el genoma con el tamaño más pequeño y como un resultado, han sufrido la pérdida de algunas rutas metabólicas, por lo que se requiere de un medio complejo para su aislamiento. El mycoplasma es un anaerobio facultativo, excepto M. pneumoniae, el cual es un aerobio estricto. Una característica típica que distingue al mycoplasma de otras bacterias, es la falta de la pared celular. Así, ellos pueden asumir múltiples formas incluyendo formas redondas, en forma de pera e incluso la forma filamentosa.

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El mycoplasma crece lentamente por fisión binaria y produce colonias en forma de “huevo frito” en las placas de agar; las colonias de M. pneumoniae tienen una apariencia granular. Debido al lento crecimiento de mycoplasma, las colonias pueden tomar hasta tres semanas para desarrollarse y ser generalmente muy pequeñas. Las colonias de Ureaplasma son extremadamente pequeñas, por lo cual al Ureaplasma se les llama también tiny strains o cepas-T (T-strains). El mycoplasma requiere de esteroles para su crecimiento y síntesis de membrana. La tres especies pueden ser diferenciadas por su habilidad de metabolizar la glucosa (M. pneumoniae), la arginina (M. hominis) o la urea (U. urealyticum). La cuarta especie M. genitalium es muy difícil de cultivar. Patogénesis: A. Factores de adherencia - Los mycoplasmas son patógenos extracelulares que se adhieren a superficies epiteliales celulares. Así, las proteínas de adherencia son uno de los factores de mayor virulencia. La proteína de adherencia en M. pneumoniae se ha identificado como una proteína de 168 kD llamada P1. La adhesina P1 se localiza en la punta de las células bacterianas y se une con los residuos de ácido siálico localizados en las células epiteliales del hospedero. La naturaleza de la adhesinas en las otras especies no ha sido establecida. La colonización del tracto respiratorio por M. pneumoniae da como resultado el cese del movimiento ciliar. Los mecanismos normales de despeje del tracto respiratorio no funcionan, lo cual resulta en una contaminación del mismo y el desarrollo de una tos seca. B. Productos metabólicos tóxicos - La íntima asociación del mycoplasma con las células huésped proporciona un ambiente en el cual los productos metabólicos tóxicos se acumulan, dañando a los tejidos del huésped (Figura 1). Ambos, el peróxido de hidrógeno y el anión superóxido, son productos del metabolismo de mycoplasma que han sido implicados en la patogénesis de los tejidos infectados, ya que en los tejidos infectados se han encontrado lípidos oxidados del huésped. Además, se ha demostrado que el mycoplasma inhibe la actividad de la catalasa de la célula huésped, con lo que se aumentan las concentraciones del peróxido. C. Inmunopatogénesis – Los mycoplasmas pueden activar a los macrófagos y estimular la producción de citocinas y la activación de linfocitos (M. pneumoniae es un super-antígeno). Así, se ha sugerido que los factores del huésped pueden contribuir a la patogénesis, la evidencia experimental en animales sostiene esta sugerencia. La ablación de la función del timo antes de la infección con M. pneumoniae previene el desarrollo de neumonía y en animales en los cuales se restaura la función del timo, la neumonía se 104

desarrolla en una tasa exacerbada. Datos epidemiológicos en humanos sugieren que es necesario que se presenten repetidas infecciones antes de que se observe la enfermedad, de nuevo, sugiriendo que los factores del huésped tienen un papel relacionado con la patogénesis; la mayoría de los niños se infecta entre los 2-5 años de edad, pero la enfermedad es más común en niños de 5-15 años de edad. Mycoplasma pneumoniae: A. Epidemiología – La neumonía causada por M. pneumoniae ocurre a nivel mundial y no se ha observado ningún incremento por actividad estacional. Sin embargo, las epidemias ocurren cada 4 a 8 años. La enfermedad se disemina por contacto cercano vía gotitas de aerosol y por tanto se facilita el contagio en poblaciones confinadas o hacinadas (por ejemplo, entre las familias, en las escuelas, barracas del ejército). La enfermedad es propia de niños (5 - 15 años de edad). B. Síndrome clínico - El síndrome clínico más común seguido de la infección con M. pneumoniae es la traqueo bronquitis, la cual se observa en un 7080% de las infecciones. Aproximadamente una tercera parte de las personas infectadas podría desarrollar neumonía, la cual es generalmente leve pero de duración larga. La neumonía causada por este agente se ha denominado: “neumonía atípica primaria” y “neumonía ambulatoria”. El período de incubación después de la infección, es de aproximadamente dos a tres semanas en el que se observan gradualmente fiebre, dolor de cabeza y malestar. Estos síntomas pueden estar acompañados de una tos persistente no productiva. Los síntomas respiratorios aparecen posteriormente y persisten por algunas semanas. De forma interesante, en la neumonía por M. pneumoniae el examen de rayos X podría mostrar los signos de neumonía inclusive antes de que aparezcan los síntomas respiratorios. Los organismos pueden cultivarse a partir del esputo antes de que los síntomas ocurran y durante el curso de la enfermedad. La resolución de la enfermedad es lenta pero raramente fatal. Esta enfermedad se debe diferenciar de otras neumonías “atípicas” C. Inmunidad – La activación de la vía alterna del complemento y las células fagocíticas, tienen un papel en la resistencia a la infección. A medida que la infección avanza, los anticuerpos tienen un papel importante en el control de la infección, particularmente la IgA. Sin embargo se ha asociado el desarrollo de un tipo de hipersensibilidad retardada, con la severidad de la enfermedad, lo que sugiere que la patogénesis es al menos, en parte, una inmunopatogénesis. 105

D. Diagnóstico de laboratorio - En etapas tempranas de la infección, el diagnóstico podría realizarse en la clínica. Sin embargo, cuando la infección progresa, se puede disponer de diversas pruebas de laboratorio. 1. Microscopía - No es particularmente útil, debido a la ausencia de la pared celular, pero podría ser de utilidad al descartar la participación de otros posibles patógenos. 2. Cultivo - Esputo (generalmente escaso) o bien líquidos de lavado faríngeo deben ser enviados al laboratorio en un medio de transporte especial. Obtener una identificación positiva puede tomar de 2 -3 semanas. El cultivo es esencial para un diagnóstico definitivo 3. Serología.  Prueba de fijación de complemento – La prueba de fijación del complemento es una buena opción, presenta alta sensibilidad y especificidad. Sin embargo, los títulos no alcanzan su máximo hasta las 4 - 6 semanas después de la infección. Un incremento de 4 veces el título es indicativo de una infección reciente. Ya que los niveles de anticuerpos pueden persistir hasta 1 año, un título alto sostenido no necesariamente indica que la infección esté actualmente presente.  Aglutininas en frío - Aproximadamente del 34% a 68% de pacientes con infección de M. pneumoniae desarrollan aglutininas en frío. Las aglutininas en frío son anticuerpos que aglutinan con eritrocitos humanos a 4°C pero no a 37°C. El antígeno ante el cual son dirigidos los anticuerpos es el antígeno I. Estos anticuerpos se producen antes que los anticuerpos de la fijación del complemento y después declinan más rápidamente. Las aglutininas en frío no son específicas para infecciones por M. pneumoniae, estas también podrían aparecer en otras infecciones y otras enfermedades (por ejemplo mononucleosis infecciosa, infecciones por influenza, enfermedad de aglutininas en frío, leucemia). Sin embargo, si un paciente presenta signos clínicos de infecciones por M. pneumoniae, se puede realizar un diagnóstico presuntivo.  ELISA – Existe un nuevo ELISA para IgM que se ha sido utilizado para el diagnóstico de la infección aguda. Es sensible y específico. Sin embargo, aún no está disponible comercialmente.  Tratamiento y Prevención - Ya que mycoplasma carece de pared celular, las penicilinas y cefalosporinas no son eficaces. Los antibióticos de elección son las tetraciclinas (solamente en adultos) y la eritromicina. La prevención es un problema debido que la enfermedad es de larga duración y es complicado el aislar a los pacientes por largo tiempo, con la intención de evitar el contagio por contacto cercano. No hay vacunas disponibles actualmente

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Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum: A. Síndromes clínicos: M. hominis se ha asociado con píelonefritis, enfermedad inflamatoria pélvica y fiebre post-parto (fiebre puerperal). El U. urealyticum se asocia con uretritis no gonocócica. B. Epidemiología: La colonización con M. hominis y U. urealyticum puede ocurrir durante el nacimiento pero en la mayoría de los casos la infección se autolimita. Sólo en un pequeño número de casos la colonización persiste. Sin embargo, las tasas de colonización se incrementan cuándo los individuos comienzan a ser sexualmente activos. Aproximadamente el 15% se colonizan con M. hominis y entre un 45% a 75% con U. urealyticum. Se trata de portadores asintomáticos aunque los microorganismos pueden ser patógenos oportunistas. C. Diagnóstico de laboratorio - El diagnóstico de Laboratorio es a través de cultivo. D. Tratamiento y Prevención - Tratamiento – debido a que los mycoplasmas carece de pared celular, las penicilinas y cefalosporinas son ineficaces. Los antibióticos de elección son tetraciclina (solamente adultos) y eritromicina. Como medidas de prevención son apropiadas bien la abstinencia o el uso de barreras físicas de protección.

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