Artículo.hidroxilamina Como Agente Mutagénico Para Neurospora Crassa Con Corr (1)

Hidroxilamina como agente mutagénico para NeurosporaCrassa Resumen La mutag mutageni enici cida dad d de Hidr Hidrox oxil ilam amin ina a (HA) (HA) ha sido sido prob probad ada a en 8 dife difere rent ntes es muta mutant ntes es de Neurosporacrassa, Neurosporacrassa, auxótrofas a Adenina (ad-3B) ! mutantes de este set de prueba se re"irtieron despu#s del tratamiento con $cido nitroso % metanosulfonato de etilo, indicando &ue estos se re"irtieron por una substitución de un par de bases' mutantes se re"irtieron solo despu#s del tratamiento con *+-., indicando &ue estos se re"irtieron re"irtieron por una inserción inserción o deleción deleción de un par de bases' bases' %  mutantes mutantes se re"irtier re"irtieron on solo espont$neamente/ La HA indu0o re"ersiones en 3 de los ! mutantes, los cuales se re"irtieron por la sustitución de un par de bases % en ning1n otro/ La especi2cidad de acción de HA en los mutantes en el presente set de prueba prueba es consistente consistente con la hipótesis hipótesis de &ue la clase predomina predominante nte de las alteraciones alteraciones gen#ticas inducidas por HA en Neurosporacrassaes Neurosporacrassaes la transición de un par de bases, de uanina*itosina a Adenina45imina/ Adem$s se encontró &ue la frecuencia de re"ersión despu#s del tratamiento con HA aumentó en proporción al cuadrado del tiempo del tratamiento/

Introducción HA induce una sustitución de un par de bases en fagos % el tipo de alteración gen#tica es preferentemente de -* a A-5/ A-5/ La reacción &u6mica entre ent re HA % 7A ha sido anali9ada por :+;;racilo % *itosina' a pH?@/ la reacción es mucho m$s r$pida con *itosina &ue con >racilo, mientras m$s alto el pH, la relación es a la in"ersa/ HA ha mostrado inducir dao cromosomal en c#lulas de mam6feros, pero ning1n ensa%o pre"io ha sido exitoso en identi2car las alteraciones gen#ticas inducidas por HA en eucariotes a ni"el molecular/ La caracteri9ación de mutaciones en Neurospora inducidas Neurospora inducidas por HA es particularmente importante por&ue podr6a ser tan espec62co en eucariotes como en fagos, produciendo mutaciones por sustitución de par de bases, resultando en transiciones de * a A5/ 5al especi2cidad podr6a hacer a HA especialmente idónea idónea para para la caract caracteri eri9ac 9ación ión de altera alteracio ciones nes gen#ti gen#tica cas s induci inducidas das por mut$geno mut$genos s menos menos espec62cos a ni"el molecular por el signi2cado de las pruebas para re"ersibilidad espec62ca/ La prueba prueba para la inducción inducción de re"ersione re"ersiones s en mutantes mutantes resultante resultantes s de alteracio alteraciones nes gen#ticas gen#ticas conocidas es un m#todo m$s simple para caracteri9ar los efectos gen#ticos de mut$genos &ue ning ningun una a t#cni #cnica ca conoc onocid ida a &ue &ue se apli& pli&ue ue desp espu#s u#s de la mut mutaci ación en Neurospora/ Neurospora/ La caract caracteri eri9ac 9ación ión est$li est$limit mitada ada por la colecc colección ión de alterac alteracion iones es gen#ti gen#ticas cas en el mutant mutante e &ue comprende este set de prueba/ n "olumen de preparado fresco de solución de itrato de sodio a ./.= fue aadido a 3 "ol1menes de conidios/ La concentración 2nal de aG  fue de ./..= % el tratamiento fue 2nali9ado como se describe anteriormente !. min despu#s de iniciar el tratamiento

(e)

Trat amient o con EM S

Los conidios fueron suspendidos en buer de :osfato a ./.@= a pH de / ;l tratamiento se comen9ó aadiendo su2ciente ;=< para llegar a la concentración 2nal ./=, el tratamiento suspendido 3.. min despu#s

( f) *+-.

Trat amient o con ICR!"# es

el

código

num#rico

asignado

a

=etoxi-@

cloro-D-(3-

[ etil−2− cloro −etil ] -

aminopropilamino) *lorhidrato de acridina/ Los conidios fueron suspendidos en un buer de :osfatos a ./.@ = pH de / ;l tratamiento se comen9ó adicionando  "olumen de na probabilidad menos a E indica una diferencia signi2cati"a entre el n1mero de re"ersiones en el control % las series tratadas/

Resultados y Discusión (a) Supresores La identi2cación de la alteración gen#tica por mutante determinando la especi2cidad en la inducción de re"ersiones despu#s del tratamiento con agentes diferentes se puede distorsionar por la aparición de mutaciones por supresión 0unto con mutaciones por re"ersión/ Los &ue se re"irtieron de . mutantes diferentes inducidos en el Loci ad-3, han sido anali9ados por la ocurrencia de supresores extragen#ticos, % ninguno fue encontrado, por lo tanto nosotros podr6amos asumir &ue las ocurrencias de supresores fuera de los locus ad-3A o ad-3B son raros o &ue no ocurren/ La inKuencia de los supresores en la identi2cación de las alteraciones gen#ticas en mutantes ad3 ser$ discutido a continuación en otro documento/ Adem$s se est$ haciendo un an$lisis detallado de re"ersiones inducidas de mutantes ad-3I para pro"eer m$s información en este punto/