alcaloides

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

ESCUELA PROFESIONAL DE QUÍMICA

Alcaloides Curso: “Laboratorio de Química Orgánica IV” Profesor: Qco. F. Danilo Barreto Integrantes: Camarena Vargas Amparo La Torre Romero Lilly Luciani Felix Nataly Mamani Quispe Lurdes Villanueva Villanueva, Miguel Ciclo: 6TO ciclo Fecha: 03 de noviembre del 2009

UNFV

1

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

INTRODUCCION..............................................................................................................3 OBJETIVOS.......................................................................................................................4 MARCO TEORICO...........................................................................................................5 Rol de los alcaloides en el Reino vegetal:................................................................5 Química:...................................................................................................................6 Propiedades de solubilidad de los alcaloides:..........................................................7

PARTE EXPERIMENTAL................................................................................................8 Extracción de Alcaloides..........................................................................................8

Extracción de la Uña de gato.................................................................................8 Fase de purificación.............................................................................................11 Reconocimiento del Producto por Cromatografía de Absorción.............................11

Aplicación de la Cromatografía en Capa delgada................................................12 Sembrado.............................................................................................................12 Desarrollo.............................................................................................................12 Revelado..............................................................................................................13 Solubilidad en agua de alcaloides..........................................................................14

Con clorhidrato de robocaina...............................................................................14 Con clorhidrato de procaína ................................................................................14 Con brucina..........................................................................................................15 Identificación de alcaloides con el reactivo de Mayer.............................................17

Preparación general del reactivo de mayer..........................................................17 Identificación de alcaloides con tiocianato de cobalto: Prueba de Scott.................18

Preparación de Tiocianato de Cobalto:................................................................18 Identificación de alcaloides con Reactivo de Dragendorff:.....................................20

DATOS SOBRE LOS REACTIVOS Y PRODUCTOS..................................................22 La Uña de Gato......................................................................................................22 La Cocaína.............................................................................................................23

Alcaloides Naturales de la Hoja de Coca:............................................................24 ANEXOS..........................................................................................................................26 ¿Cómo produce sus efectos la cocaína?...............................................................26 ¿Qué ocurre con la dopamina cuando se consume coca?.....................................26 Efectos de la cocaína:............................................................................................27

CUESTIONARIO.............................................................................................................28 1.- ¿Describa una técnica de extracción de un alcaloide especifico?.....................28 Extracción de la cocaína:.......................................................................................28 3.- ¿Escriba las propiedades físicas y químicas de alcaloides?.............................29 Uña de gato...........................................................................................................29 Hoja de Coca.........................................................................................................30

Aspectos químicos:..............................................................................................30 Propiedades físicas y farmacológicas:.................................................................31 CONCLUSIONES............................................................................................................32 BIBLIOGRAFÍA..............................................................................................................33

UNFV

2

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

INTRODUCCION Alcaloide, grupo de compuestos débilmente alcalinos que contienen nitrógeno, y son en su mayoría de origen vegetal; poseen una complejidad molecular moderada que produce varios efectos fisiológicos en el cuerpo. Se han registrado unos 3.000 alcaloides. El primero que se preparó sintéticamente (1886) es uno de los más simples, la coniína, o 2-propil piperidina, C5H10NC3H7; es muy venenoso, una dosis menor de 0,2 g es letal. La coniína, obtenida de las semillas de la cicuta, fue el veneno utilizado en la ejecución de Sócrates. Aproximadamente 30 de los alcaloides conocidos se usan en medicina. Por ejemplo, la atropina, que se obtiene de la belladona, dilata las pupilas; la morfina es un calmante; la quinina es un remedio específico para la malaria; la nicotina es un insecticida potente y la reserpina un tranquilizador.

UNFV

3

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

OBJETIVOS •

La mejor extracción posible de mezclas de alcaloides a partir de plantas.

•

Reconocimiento de los alcaloides por pruebas de solubilidad y reacciones de identificación, reacciones de gran simplicidad y buena eficacia para el reconocimiento de grupos funcionales o funciones orgánicas.

UNFV

4

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

MARCO TEORICO Son sustancias que presentan en su constitución N, generalmente formando parte de heterociclos. De acuerdo a su estructura pueden agruparse en distintos grupos químicos.1 La presencia de oxigeno en la estructura determina que la sustancia sea un sólido blanco, de sabor amargo y cristalizables. La ausencia de oxigeno en la estructura del alcaloide hace que este sea aceitoso, volátil u odorante. La mayoría de los alcaloides son insolubles o muy poco solubles en agua, pero se disuelven bien en alcohol, éter, cloroformo u otros solventes orgánicos. Se combinan con ácidos para dar sales, comportándose entonces como bases. Las sales son bastante solubles en agua e insolubles en solventes orgánicos.

FIG.01 Estructuras de diversos Alcaloides

En la diferencia de solubilidades de la base alcaloidea y de sus sales en agua y en solventes orgánicos se basa el método general de extracción. Todos los alcaloides son activos a la luz polarizada. Presentan una fluorescencia característica bajo al luz UV o IR, dando lugar a espectros característicos.

Rol de los alcaloides en el Reino vegetal: Las funciones de los alcaloides en las plantas no han sido aun precisadas y están sujetas a especulación. Consistirían, entre otras:

•

En servir de reserva para la síntesis de proteínas.

•

De materiales de protección contra ataques de insectos u otros animales herbívoros.

•

De estimulantes o reguladores de crecimiento o metabolismo interno o de reproducción.

1

V. M. POTAPOV y S. N. TATARINCHIK: Química Orgánica, Segunda Edición, Editorial MIR, Año 1979, País Rusia – Moscú

UNFV

5

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

•

De agentes finales de desintoxicación por transformaciones simples de otras sustancias cuya acumulación puede resultar nociva para la planta.

En algunos casos, se los ha considerado como productos de desecho o finales de metabolismo, idea no compartida, ya que no son productos estáticos en el organismo sino que experimentan transformaciones continuas. Además, es factible suponer que no todos los alcaloides desempeñan funciones similares en las plantas que los contienen y que acostas pueden variar de un caso a otro. Cabe destacar que aproximadamente el 80% de las plantas no producen alcaloides, por lo que tampoco puede suponerse que este tipo de producto natural sea vital para los organismos naturales. En resumen, el papel que desempeñan en los vegetales es todavía objeto de especulaciones y teorías en la mayoría de los casos sin confirmación.

Química: La estructura química de los alcaloides es extremadamente variada. El solo punto común es la presencia de un N, que contiene a la molécula carácter básico mas o menos pronunciada. Este N puede encontrarse bajo la forma de amina primaria, secundaria, terciaria o como compuesto de amonio cuaternario. Puede ser extracilico o intraciclico, que es lo más frecuente. Los alcaloides a menudo son sólidos, cristalizables a veces coloreados, la mayoría de las veces dotados de poder rotatorio. Los alcaloides no oxigenados son volátiles, arrastrables por el vapor de agua (nicotina).2 Bajo la forma de bases son solubles en los solventes orgánicos no polares (éter etílico, cloroformo, benceno, etc.)

•

Solubles en los solventes orgánicos polares: Alcohol.

•

Insolubles en agua.

FIG. 02 Los alcaloides con los ácidos forman sales semejantes a los amonios cuaternarios.

Las propiedades de solubilidad de las sales son diferentes a las que presentan las bases. Las sales de alcaloides son insolubles en los S.O. no polares y solubles en el agua. Las sales de alcaloides por acción de los álcalis precipitan el alcaloide al estado de base. 2

Joseph M. Hornback: Química orgánica, segunda edición, Editorial. Thompon Brooks cole, Año 2006, País USA

UNFV

6

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides En estas propiedades de solubilidad de la base y de la sal alcaloidea se basa la identificación y valoración de los mismos.

Propiedades de solubilidad de los alcaloides: Bases alcaloideas •

Generalmente insolubles en agua

•

Solubles en solventes orgánicos poco polares: éter, cloroformo

•

Con los ácidos forman sales.

•

Bases solubles en agua: colchicina, efedrina.

Sales de alcaloides •

Solubles en agua

•

Insolubles en solventes orgánicos poco polares

•

Son desalojadas de sus combinaciones por los álcalis.

•

Sales poco solubles en agua: berberina

•

Sales de alcaloides de Rauwolfia son solubles CHCI3

UNFV

7

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

PARTE EXPERIMENTAL Extracción de Alcaloides Extracción de la Uña de gato El método a usarse es una extracción continua con solventes orgánicos, para .ello se puede usar una pera de decantación, se puede considerar como una extracción acido base.

El análisis químico de los componentes de una planta se denomina screening de la misma. Generalmente se parte del material vegetal previamente deshidrato (en estufa y corriente de aire a 40 -45ºC) y finalmente pulverizado. Este polvillo vegetal se extrae con fracciones de solvente elegido, o bien con extracción continua con SOXHLET. El tipo de compuesto orgánico extraído, variara con la polaridad del solvente elegido. Normalmente, para un estudio sistemático, se elige como primer solvente de extracción uno poco polar (ej. Éter de petróleo). Luego de la extracción, el residuo sólido se separa del solvente, y se somete al sólido a u nueva extracción, con otro solvente mas polar extrayendo esta vez los compuestos mas polares presentes en el material vegetal.

FIG. 03 Un esquema muy general de extracción de material vegetal

UNFV

8

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

Si se hiciera sobre el polvillo vegetal original un extracto inicial con metanol, muchos de los compuestos no polares serán extraídos, por efectos de co-disolución. La presencia de cada uno de estos grupos de compuestos se puede detectar por reacciones de caracterización específicas (muchas veces empíricas, de estequiometria y mecanismos desconocidos). También es posible aislar estos grupos de compuestos, a través de nuevas secuencias de “llevado a seco-extracción”, ya sea con distintos solventes, o con extracción acidobase.3

FIG 04 . Un esquema de una extracción con solventes orgánicos

Primero se pesa la uña de gato en polvo, el cual es un producto de fácil adquisición en cualquier mercado, asi se peso aproximadamente 20 g

FIG. 05 Peso de uña de gato 3

Lydia Galagovsky Kurman: Química Orgánica, Fundamentos Practicos para el Laboratorio, Ed. Universitaria de Buenos aires

UNFV

9

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

Este polvillo se introduce en la pera de decantación en la cual se ha puesto un algodón en la parte inferior interna para simular un filtro que solo deje pasar al solvente orgánico. Y el solvente orgánico que ha de usarse para extraer los alcaloides de la planta va ser una mezcla de solventes; de metanol y acido clorhídrico

FIG. 06 Izquierda Agregar la uña de gato en polvo, Derecha Agregar la mezcla metanol-acido

Por efecto de la gravedad el solvente ira mojando todo el producto de uña de gato, y debido a la polaridad de este el extracto que se recoge va a ser rico en alcaloides.

FIG.07 Producto bruto: Mezcla de alcaloides procedente de la uña de gato

NOTA: Se debe estar atento a la cantidad de solvente, pues este no debe secarse, si fuera necesario agregar más solvente metanol-acido

UNFV

10

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

Luego de obtener el extracto este se concentra, exponiéndolo al vapor de agua en una placa petri Calentar hasta resequedad, ya que debido a la volatilidad del metanol este se ira primero por tener un menor punto de ebullición.

Fase de purificación El alcaloide que se extrajo en el paso anterior esta en estado básico Este se hará con lavados sucesivos: Primero con bicarbonato de sodio, una base débil que puede pasar al alcaloide a su estado básico, insoluble en agua así todas las impurezas polares quedaran en la fase acuosa. Se extrae la fase acuosa. El segundo lavado es con cloroformo un solvente orgánico que es ligeramente polar para extraer específicamente a los alcaloides pero la polaridad de estos no es exacta para dicho solvente es así que forma emulsiones que impiden la fácil decantación del producto. Se necesita romper la emulsión, para ello se agrega sulfato de sodio anhidro, en pocas cantidades para ir probando si romper la emulsión, las emulsiones son sales que son difíciles de trabajar, con pocas cantidades de desecante no se rompe la emulsión así se emplea solución de sulfato de sodio anhidro saturado, previamente calentado hasta disolución. Esto logra romper la emulsión se separa y se decanta la parte orgánica que contiene al alcaloide con solvente cloroformo, que es bastante volátil y se evapora fácilmente al dejarlo en el ambiente. Si se trabaje con un solvente de un poco más polar como cloroformo o diclorometano en exceso no se formarían emulsiones y se facilitaría el trabajo, pero este solvente es más caro y escaso en el laboratorio.

Reconocimiento del Producto por Cromatografía de Absorción El proceso de cromatografía de adsorción se basa en la separación de un soluto entre una fase sólida de adsorbente y una fase móvil. El fenómeno de adsorción ocurre en la superficie del granulo de fase fija, y se fundamenta en la atracción entre el soluto y el adsorbente por formación de uniones dipolo y formación de puentes hidrogeno. El soluto es adsorbido en la superficie del adsorbente y luego desorbido por el solvente de fase móvil. Si se trata de una mezcla de solutos, el más fuertemente atraído por el adsorbente, será el más difícil de eluir y será el que “corre” o se desplaza menos

UNFV

11

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

Aplicación de la Cromatografía en Capa delgada La técnica de C.C.D. es de aplicación analítica. Se utiliza comúnmente para seguir el desarrollo de una reacción (aparición de productos y desaparición de reactivos), para analizar el número aproximado de componentes de una muestra. Para cubrir el soporte cubrir el soporte con la capa se puede, suspender en un solvente volátil (cloroformo – metanol 9:1), donde se sumerge la placa, y luego se seca al aire La capa se puede conseguir comercialmente, de una lámina de poliéster, o sobre una lamina de aluminio. Las ventajas de este material son que puede cortarse del tamaño deseado; y, luego de usarse y revelarse, puede se guardado. Tiene un inconveniente su alto costo

Sembrado La solución que contiene los solutos a sembrar debe ser concentrada. Cuando la solución se pone en contacto con al adsorbente, los sitios mas activos adsorberán inmediatamente soluto y solvente, esto depende de su estructura. Este se hace con un capilar que es cortado con fuego a la mitad y estirado para obtener una punta fina ideal para la siembra.

FIG.08 Siembra de la placa cromatográfica

Desarrollo Se lleva acabo sumergiéndolas en cubas, de modo tal que el nivel del solvente, alcance la capa de adsorbente, y ascienda por capilaridad, pero cuidado que no llegue hasta la altura donde están sembradas las sustancias Cuando el frente del solvente ha llegado casi al borde superior del adsorbente, se retira la placa de la cuba y se marca altura del frente (para cálculos de R f). Se deja evaporar el solvente y se observa las manchas coloreadas, o se revela las sustancias incoloras, para lograr su detección.

UNFV

12

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

FIG.09 Desarrollo de la placa cromatográfica

Revelado Reactivo de Dragendorff según Munier y Macheboeuf para alcaloides. Solución a; se disuelve 0,85g de bismuto (III) nitrato básico en una mezcla de 10 ml de acido acético glacial y 40 ml de agua. Solución b: se disuelve 8g de yoduro potasio en 20 ml de agua. Solución pulverizable: en caso necesario, se mezclan 5 ml de la solución a y 5 ml de la solución b, y se añade 20 ml de acido acético glacial. La solución se completa con agua hasta 100 ml Su tratamiento ulterior es el calentamiento.

FIG.10 Esquema final de la placa cromatográfica

UNFV

13

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

Solubilidad en agua de alcaloides Con clorhidrato de robocaina Cogemos un tubo de ensayo, agregándole una pizca de clorhidrato de robocaina Esta en forma de cristales blanquecinos, la cual al agregarle agua destilada un mililitro se solubilisa.

FIG.11 Solubilidad de la Robocaina

Conclusiones: •

Se observa que es soluble en agua, ya que es una sal, y sabemos que en el agua se ionizara y en forma de cationes y aniones se polarizara, como el agua es polar será afín en esta por su misma naturaleza, será soluble en esta.

Con clorhidrato de procaína

FIG.12 Estructura de la Procaína

Identificación de la sustancia: Formula química clorhidrato de 4/aminobenzoato de 2/(dietilamino) etilo. Novocaína o Procaína Procaína, anestésico local, conocido por su nombre comercial Novocaína, que se utiliza en odontología y cirugía. El clorhidrato de procaína, término correcto para designar este alcaloide, fue sintetizado por primera vez en 1905 y sustituyó con rapidez

UNFV

14

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides a la cocaína ya que es más fácil de sintetizar y esterilizar, su acción es más breve, no produce adicción y es de cuatro a seis veces menos tóxico. La procaína, al igual que otros anestésicos locales como la tetracaína, actúa como un dispositivo de bloqueo nervioso, interrumpiendo la generación y conducción de los impulsos nerviosos para el dolor. En odontología permite efectuar extracciones dentales sin dolor. En la cirugía menor se suele utilizar junto con un fármaco vasoconstrictor que limita el flujo de sangre. También se emplea en obstetricia y en ocasiones para aliviar el dolor lumbar. En la actualidad la procaína ha sido reemplazada en gran parte por otros anestésicos como la lidocaína. Algunos individuos son hipersensibles a la procaína, y cuando se inyecta debajo de la piel se produce una urticaria. La fórmula química de la procaína es C13H20O2N2HCl Procedimiento Tomamos un tubo de ensayo, introducimos una pizca de clorhidrato de Procaína Esta en forma de cristales blanquecinos, la cual al agregarle agua destilada un mililitro se vuelve soluble.

FIG.13 Solubilidad de la Procaína

Conclusiones: •

Se observa que es soluble en agua, ya que es una sal, y sabemos que en el agua se ionizara y en forma de cationes y aniones se polarizara, como el agua es polar será afín en esta por su misma naturaleza, será soluble en esta.

Con brucina Sinónimo

Camiramina

Su origen Se obtiene la brucina en la preparación de estricnina PELLETIER Y GAVENTOUD La extrajeron en un principio de la angustura falsa tratándola como a los demás estricnos añadiéndola magnesia al liquido y lavando la porción insoluble; este liquido contenía brucina; le saturaron con acido oxálico

UNFV

15

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides Evaporaron el todo hasta sequedad y lavaron el oxalato brucina que quedo por residuo con alcohol absoluto enfriando a 0ºC, después lo disolvieron en agua disolviendo en agua, añadieron cal o magnesia evaporaron la solución hasta sequedad y calentaron el residuo con alcohol, por ultimo filtraron el liquido alcohólico, vertieron el agua en el y le abandonaron a la evaporación espontánea La separación de la brucina d la estricnina esta fundada en la mayor solubilidad del alcaloide concentrado. Su forma tiene forma de prisma recto de base romboidal, blanca y transparente que por lo común tiene algunas líneas de espesor Reconocimiento de ión nitrato La brucina es un alcaloide que en medio sulfúrico concentrado forma con los iones nitrato un compuesto de color amarillo característico (absorbancia a 410 nm) • Tomar una pizca del fertilizante y disolverlo en 1 ml de agua destilada, o en su caso si éste está en disolución tomar 1 ml en un tubo de ensayo.

•

Poner unos cristales de brucina en la placa de toque y cinco gotas de H2SO4 concentrado, se agita y se disuelve la brucina. Si el ácido sulfúrico tiene indicios de nitratos, aparecerá un color rosado, lo cual no es un obstáculo para el ensayo.

•

Sobre el reactivo Brucina/ H2SO4 poner una gota de disolución problema

•

La coloración amarilla indica la presencia de nitratos

FIG.14 Estructura de la Brucina

Procedimiento En un tubo de ensayo, agregamos una pizca de Brucina Esta en forma de cristales blanquecinos, la cual al agregarle agua destilada un mililitro no se vuelve soluble. Mas no ocurre así en el agua pues esta es polar, se tendría que polarizar agregándole un acido, como acido clorhídrico, recién se polariza: formándose sal más agua conocimiento general.

UNFV

16

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides Conclusiones: Al agregarle agua a este reactivo no se solubiliza ya que esta en forma de base, en cambio al agregarle acido si se solubiliza ya que es un compuesto orgánico con mayor cantidad de enlaces carbono, es afín a ella ya que tiene su misma naturaleza.

Identificación de alcaloides con el reactivo de Mayer El reactivo de Mayer se emplea para la caracterización no específica de alcaloides. La mayoría de los alcaloides reaccionan dando un precipitado blanco o amarillo claro, amorfo o cristalino. El precipitado (una sal compleja) puede disolverse posteriormente en algún solvente menos polar para su identificación

Preparación general del reactivo de mayer. En un matraz de Erlenmeyer de 125ml, disolver 1.36g de cloruro de mercurio (HgCl 2) con 60 ml de agua. En otro matraz de la misma capacidad, disolver en agua 5g de yoduro de potasio (KI). Mezclar las soluciones y aforar a 100 ml con agua destilada. El reactivo solo se adiciona a soluciones previamente aciduladas con acido clorhídrico o ácido sulfúrico .Formando una Solución. Acuosa de tetrayodomercuriato de potasio

FIG.15 Reactivo de Mayer

Procedimiento: En tres tubos de ensayo colocar una cantidad apropiada de brucina, clorhidrato de procaína y clorhidrato de cinchonina respectivamente.

FIG.16 Tubos de ensayo conteniendo de izquierda a derecha Brucina (forma de Base), clorhidrato de Procaína (forma de sal), clorhidrato de Cinchonína (forma de sal)

UNFV

17

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

El reactivo de Mayer debe ser empleado en solución neutra. En medio alcalino su acción es neutra y en medio acido precipita. Luego a cada tubo de ensayo se le agrega mg del soluciones acuosas de los 3 alcaloides antes mencionados reactivo se observa su solubilidad, siendo solubles los alcaloides en forma de clorhidrato, que una sal, que por se dipolar es soluble en agua para la tercera en forma de base débil además de insoluble en agua se le trata con un acido mineral, con unas gotas de acido clorhídrico, con lo que se logra tener al alcaloide en forma de clorhidrato por lo tanto soluble en agua, y listo para poder ser identificado con el reactivo de Mayer

FIG.17 Tubos de ensayo en igual orden que en foto anterior, después de la prueba de Mayer a la cual todas dieron positivas a la presencia de alcaloides

Observaciones:

•

La brucina, clorhidrato de procaína, Clorhidrato de Cinchonina son polvitos blancos todos estos alcaloides.

•

Se considera un resultado positivo cuando existe un precipitado blanco o crema de la solución.

Conclusiones: •

El reactivo de Mayer se basa en la acides de los alcaloides en su forma de sales (clorhidratos) debido que en medios básicos el reactivo de Mayer no precipita.

Identificación de alcaloides con tiocianato de cobalto: Prueba de Scott Preparación de Tiocianato de Cobalto: A partir del cloruro de cobalto hexahidratado (CoCl2.6H2O) y mezclarlo con tiocianato de amonio estas dos sales disolverlo en agua.

UNFV

18

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

Reacción:

Hallando X1 para saber cuando de CoCl2 necesitare para generar 2gr de Co(SCN)2entonces:

Pero esto es sin agua y con agua seria:

Hallando X2 para saber cuando de NH4SCN necesitare para generar 2gr de Co(SCN)2 entonces:

Entonces las cantidades que se utilizo para preparar el tiocianato de cobalto fueron 2.7204gr de CoCl2*6H2O y 1.7378 g de NH4SCN luego se diluyo en agua y el color de la solución fue violeta.

FIG.18 Erlenmeyer con Tiocianato de Cobalto.

En un vaso precipitado agregar una añadimos la glicerina. UNFV

cantidad de tiocianato de cobalto luego le

19

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

En tres tubos de ensayo colocar brucina, clorhidrato de Procaína, Clorhidrato de Cinchonina. A cada uno de los tubos de ensayo se agrega unas gotitas de este tiocianato de cobalto con glicerina. Y los resultados fueron los siguientes: con la brucina el resultado fue positivo cambio a un color púrpura vivo. Con el clorhidrato de procaína y el clorhidrato de cinchonina el resultado fue negativo no hubo cambio de color.

Brucina

Clorhidrato de Procaína

Clorhidrato de cinchonina

Conclusiones:

•

El tiocianato de cobalto con glicerina se utiliza para reconocimiento de alcaloides en su forma de bases débiles y ello lo comprobamos ya que hubo un cambio de color con la brucina que es una base y con las otras dos como el clorhidrato de procaína y el clorhidrato de cinchonina, con las que no hubo cambio de color.

•

Este también es un reactivo que reacciona por el pH del compuesto a analizar, se puede deducir que estas reacciones implican un cambio en el Nitrógeno básico de los alcaloides, es por ello que en los casos de clorhidratos no reaccionados debido a que el nitrógeno en esta esta saturado e impedido.

Identificación de alcaloides con Reactivo de Dragendorff:

UNFV

20

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides Para la preparación del reactivo de Dragendorff se disuelve 8,0 g de Bi(NO)3 5H2O en 20 ml de acido nitrico concentrado y 27,2 g de KI en 50 ml de agua, Mezclar las soluciones y dejar em reposo durante 24 Horas Filtrar las soluciones y completar a 100 ml. El producto de mezclar ambas soluciones da conocidocomo reactivo de Dragendorff.

tetrayodobismutato potasico

La prueba se considera positiva por un precipitado color anaranjado – marrón Pueden dar Rx (+) con Dragendorff: •

Proteínas

•

•α - Pironas

•

•Cumarinas

•

•Hidroxiflavonas

•

•lignanos

FIG.19 Tubos de Ensayo con alcaloides en el mismo orden anterior después de la prueba de Dragendorff la que dio positivo para los tres

UNFV

21

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

DATOS SOBRE LOS REACTIVOS Y PRODUCTOS La Uña de Gato Clasificación taxonómica. Según la bibliografía consultada la uña de gato está clasificada taxonómicamente de la siguiente manera: REINO : Vegetal DIVISION : Magnoliophyta CLASE : Magnolipsida SUBCLASE : Asteridae ORDEN : Rubiales FAMILIA : Rubiaceae GENERO : Uncaria ESPECIES : Uncaria tomentosa (Will.) DC. Uncaria guianensis (Aubl.) Gmel. Descripción de la planta. Es una trepadora gigante, cuyo tallo principal puede alcanzar un grosor de 25 cm. y una longitud total de hasta 40 m. Las ramas jóvenes tienen forma cuadrangular. Presencia de espinas ganchudas, leñosas que llegan a tener 2 cm de largo por 0.5 cm de ancho, dirigidas hacia abajo, no retorcidas. Hojas pecioladas, limbo de consistencia membranosa, de forma oblonga u oblongo-aovado de aproximadamente 9 a 17 cm de longitud por 4 a 9 cm de ancho, en el envés presenta finos vellos largos y cortos, que es lo que dá a esta especie el nombre de tomentosa. Inflorencencias en cabezuelas cuyo diámetro varía entre 1.5 a 2 cm. Las flores son sésiles de color amarillento. El fruto es bivalvo y alargado, mide hasta 6 mm de longitud. Las semillas son fusiformes, muy pequeñas, longitudinales y aladas. (Steyermark, 1974; Obregon, 1994; Dwyer, 1980; Mac Bride,1936; Croat, 1978).4 Distribución: Crece en el Perú en forma silvestre en la pluvisilva a una altura entre los 300 y 1000 mt sobre el nivel del mar. valles del Perené, Paucartambo, regiones del cerro de la sal y el gran pajonal departamentos de Loreto, San Martín, Pasco, Junín y Madre de Dios Complejo Fitoquimico: En La Hoja Glicosidos del ácido quinovico. Alcaloides oxindólicos pentacíclicos: Isopteropodina Isomitrafilina Dihidrocorinanteína, Isomitrafilina, Pteropodina, Rincofilina, Uncarina, Speciolifina, Mitrafilina, Isorincofilina, Hirsutina Pteropodina, compuestos polihidroxilados, Epicatequina, Procianidinas, Estigmasterol, Campesterol La Corteza de raíz Acido oleanólico, 5-g4

http://www.monografias.com/trabajos15/cultivo-uncaria-tomentosa/cultivo-uncaria-tomentosa.shtml

UNFV

22

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides carboxistrictosidina, Esteroles, Alcaloides oxindólicos pentacíclicos, Estigmasterol, Campesterol, Sitosterol, Triterpenos poilihidroxilados, Polifenoles derivados de la epicatequina de las procianidinas A, B1, B2, B4

La Cocaína El alcaloide puro o cocaína fue aislado por primera vez en 1859 por Niemann, quien noto que tenía sabor amargo y producía un efecto peculiar en la lengua a la que adormecía y casi privaba de la sensibilidad. Hojas de coca (coca leaves), contienen vitaminas A, E, B1; B2; B3 y C (acido ascórbico), proteínas y microelementos (calcio, fósforo, hierro, potasio y sodio), tanina y además catorce alcaloides los que fomentan su acción medicinal. Efectiva acción fisiológica de hojas de coca se debe principalmente a alcaloides. Estos pertenecen al grupo tropanos, conjuntamente con atropina y escopolamina. Alcaloides de coca son una mezcla de ecgoninas, proteínas e igrinas. Entre productos secundarios de ecgonina se encuentran cocaína (metilo-benzol-ecgonina), metiloecgonina, benzol-ecgonina y xenamil-cocaína; entre proteínas se encuentran tropeina y seudo-tropeina, dihidroxipeina, tropacocaina y benzol-tropan, como también igrina, irolina y cusco-hidrina, estero isomeros y parte de la línea de truxilina, se observa también la presencia de nicotina. En el año 1982 en el Departamento de Química Fisiológica del Instituto Nacional de Nutrición y del Ministerio de Salud Pública se realizaron análisis de hojas de coca, los que permitieron obtener siguientes resultados. Estos datos son básicos, pero tenemos que tomar en cuenta que dependiendo de algunos factores la composición química de hojas de coca puede variar, en esto influyen la forma específica del arbusto, composición química de suelo, forma de cultivación y de recolección, tiempo y condiciones de resecado como también condiciones de almacenamiento.

Tabla .01 Composición Química de la Hoja de Coca

Informe № 296-82-DQF/INN, Institutos Nacionales de Salud - Instituto de Nutricion, Universidad Peruana Cayetano Heredia Humedad, g% Extracto seco, g% Extracto etereo, g% Hidratos de Carbono, g% Proteina Total (N x 6.25), g%

9.21 0.79 4.53 49.62 15.96

Proteina digerible (N x 6.25.), g%

12.39

Fibra cruda, g% Cenizas, g% Arena y Silice, g%

13.00 7.68 1.55

UNFV

23

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides Caroteno, mg% Tiamina, mg% Riboflavina, mg% Vitamina C, mg% Niacina, mg% Calcio, mg% Fosforo, mg% Hierro, mg% Sodio, mg% Potasio, mg%

42.34 0.16 0.88 16.70 26.00 1550.7 209.7 4.2 0.59 0.96

Alcaloides totales, g%

0.821

Alcaloides Naturales de la Hoja de Coca: •

Cocaína: Es el éter metilico de la benzoil egnonina, tiene propiedades anestésicas y analgésicas.

•

Egnonina: Es un derivado carboxilado de la atropina, tiene propiedades de metabolizar grasas, glucidos y carbohidratos. Adelgaza la sangre.

•

Atropina O escopolamina: es anestésico que produce sequedad en el árbol respiratorio

•

Pectina: Es absorbente y antidiarreico, junto a la Vitamina E, regula la producción de melanina para la piel.

•

Papaína: Esta proteasa, que en mayor proporción contiene la papaya, es muy parecida a la catepsina animal, es una especie de fermento que acelera la digestión.

•

Higrina: Excita las glándulas salivares cuando hay deficiencia de oxigeno en el ambiente.

•

Globulina: Es un cardiotonico que regula la carencia de oxigeno en el ambiente, mejorando la circulación sanguínea. Evita el soroche (mal de altura).

•

Piridina: Acelera la formación y funcionamiento del cerebro, aumenta la irrigación sanguínea a la hipófisis y las glándulas, traduciéndose en una mejoría del cuerpo en general.

•

Quinolina: Evita la formación de la caries dental junto al fósforo y al calcio.

•

Conina : Es un anestésico poderoso.

•

Cocamina: Es un analgésico que junto a la anterior, ayuda a aumentar las propiedades anestésicas y analgésicas de la cocaína natural.

•

Insulina: Refresca y mejora el funcionamiento del hígado, la secreción de la bilis y su acumulación a la vesícula. Es diurético, ayuda a eliminar las sustancias toxicas no fisiológicas. Es un polisacárido, muy parecido a las vitaminas B-12, que produce aumento de células de la sangre.

•

Benzoína: Acelera la formación de células musculares y evita la putrefacción de alimentos, de ahi sus propiedades terapéuticas para gastritis y ulceras.

UNFV

24

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

•

Reserpina: Regula la presión arterial en hipo e hipertensión y ayuda a la formación de células óseas.

Estos 14 alcaloides, los aminoácidos que contienen, los ácidos y las vitaminas A, B1, C y E, la tiamina, niacina y riboflavina, la convierten en la planta mas completa del universo en Nitrógeno No Proteico, que es el que elimina las toxinas y patologías del cuerpo, obteniendo combinaciones optimas con frutas y plantas medicinales. Partes activas: Las hojas (1%). Usos:Como medicinal, se utilizan sus derivados como anestésico. En uso popular se utiliza por sus propiedades estomacales y circulatorias y como estimulante para evitar las sensaciones de hambre, sed y fatiga. Uso extramedicinal en el consumo de las drogas derivadas de esta planta: cocaína, crac etc. Toxicidad: Mínima cuando se obtiene a partir de la hoja que contiene concentraciones muy bajas de alcaloide. Resulta toxica a partir de su derivado la cocaína

FIG.20 Estructura 3D y 2D de la Cocaína

NOMENCLATURA: (1R,2R,3S,5S)-3-(benzoiloxi)-8-metil-8-azabiciclo[3.2.1] octano-2-carboxilato de metilo FORMULA : C17H21NO4 PESO MOL : 303.35 g/mol

UNFV

25

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

ANEXOS ¿Cómo produce sus efectos la cocaína? Se han realizado muchos estudios para entender la forma en que la cocaína produce los efectos placenteros y la razón por la que es tan adictiva. Uno de los mecanismos es el efecto que ejerce sobre las estructuras profundas del cerebro. Los científicos han descubierto regiones del cerebro que se incitan por todo tipo de estímulos gratificantes, tales como alimentos, agua, sexo y muchas de las drogas de abuso. Uno de los sistemas neurales que parece ser mas afectado por la cocaína se origina en una región muy profunda del cerebro llamada el área ventral del tegmento (AVT). Las células nerviosas originadas en el AVT se extienden a la región del cerebro conocida como núcleo accumbens, una de las áreas claves del cerebro involucrada en la gratificación. Por ejemplo, en estudios con animales, la gratificación aumenta la actividad en el núcleo accumbens.5 Los investigadores han descubierto que cuando esta ocurriendo un evento gratificante, las neuronas del AVT aumentan considerablemente la cantidad de dopamina que liberan en el núcleo accumbens. Dentro del proceso normal de comunicación, una neurona libera dopamina dentro de la sinapsis (el pequeño espacio entre dos neuronas). Allí, la dopamina se liga con proteínas específicas (llamadas receptores de dopamina) en la neurona adyacente así enviando una señal a la misma. Las drogas de abuso pueden interferir con este proceso normal de comunicación. Por ejemplo, los científicos han descubierto que la cocaína bloquea la eliminación de la dopamina de la sinapsis lo que resulta en una acumulación de la misma. Esta acumulación de dopamina causa una estimulación continua de las neuronas receptoras, lo que se asocia con la euforia que comúnmente reportan los usuarios de cocaína.

¿Qué ocurre con la dopamina cuando se consume coca?

FIG.21 Efecto neuronal cuando se consume droga 5

http://es.wikipedia.org/wiki/Coca%C3%ADna

UNFV

26

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

Lo que ocurre es que la cocaína bloquea la enzima DAT. Al estar bloqueada, no puede absorber la dopamina descargada por las neuronas. El resultado es una concentración dopaminica muy elevada en las sinapsis, lo que a su vez provoca un incremento generalizado de dopamina en el cerebro, como puede observarse en el grafico. Así se genera una euforia elevada, si bien no natural. La sensación de bienestar, euforia, placer, seguridad, etc., que la droga causa es artificial y poco duradera. Si solo tuviese esas consecuencias, la cocaína no seria tan peligrosa. Pero las cosas no son tan sencillas.

Efectos de la cocaína: Los efectos de la cocaína se presentan casi inmediatamente después de una sola dosis y desaparecen en cuestión de minutos u horas. Los que usan cocaína en pequeñas cantidades (hasta 100 mg.) generalmente se sienten eufóricos, energéticos, conversadores y mentalmente mas alertos, particularmente con relación a las sensaciones visuales, auditivas y del tacto. La cocaína también puede disminuir temporalmente la necesidad de comer y dormir. Algunos usuarios sienten que la droga los ayuda a realizar algunas tareas físicas e intelectuales más rápido, mientras que a otros les produce el efecto contrario. La forma en que se administra la cocaína determina el tiempo que dura el efecto inmediato de euforia. Mientras más rápida es la absorción, mas intenso es el "high"; pero al mismo tiempo, cuanto mas rápida es la absorción, menor es la duración del efecto de la droga. El "high" que produce la inhalación se demora en presentarse y puede durar de 15 a 30 minutos, mientras que el que se obtiene fumando puede durar de 5 a 10 minutos.6

Tabla .02 Efectos a corto y largo plazo del consumo de Cocaína

Efectos a corto plazo

Efectos a largo plazo

Aumento de energía

Adicción

Disminución de apetito

Irritabilidad y cambios de temperamento

Agudeza mental

Intranquilidad

Aumento en las palpitaciones del corazón y la tensión arterial

Paranoia

Contracción de los vasos sanguíneos

Alucinaciones auditivas

Aumento de la temperatura Dilatación de las pupilas 6

http://www.scribd.com/doc/8972707/Alcaloides

UNFV

27

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

CUESTIONARIO 1.- ¿Describa una técnica de extracción de un alcaloide especifico? Extracción de la cocaína: Las hojas de coca se someten a ciertas operaciones con el objeto de obtener la cocaína en bruto; las hojas pulverizadas se humedecen con solución de carbonato sodico y se tratan con aceite mineral (petróleo). Las bases que se han disuelto de este se separan del mismo con agua que contenga acido sulfúrico, y la solución sulfúrica se precipita después con carbonato sodico. La cocaína en bruto obtenida de este modo, que además de cocaína contiene la mayor parte de las bases restantes, se aprovecha en Europa sobre todo en Alemania para obtener cocaína pura y las sales de este alcaloide, particularmente el clorhidrato. La cocaína libre se obtiene pura del clorhidrato en solución acuosa descomponiéndolo mediante el amoniaco, lejía de sosa o el carbonato sodico

FIG.22 Diagrama para la extracción de Cocaína a partir de la hoja de Coca

UNFV

28

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

3.- ¿Escriba las propiedades físicas y químicas de alcaloides? Uña de gato Información Farmacológica:. El extracto acuoso y etanólico de la Uncaria tomentosa han demostrado tener actividad citostática, contraceptiva y antiinflamatoria; asimismo se demostró que todos los alcaloides oxindólicos de la raíz, con excepción de mitrafilina y rinchofilina, muestran un pronunciado aumento de fagocitosis, teniendo actividad antiviral con el virus RNA del VSV También se comprobó su efecto antiinflamatorio util para reducir el dolor por Osteoartritis, inflamaciones de la piel por reacciones alérgicas y para tratamiento de tumores y parvoviosis contiene (alcaloides: Isomitrafilina y pteropodina).que tienen propiedad nmunoestimulante Aumentan la actividad fagocítica de los granulitos neutrófilos y macrófagos, y estimula la producción de linfoquinas y el número de monocitos en fases activas en la circulación periférica, hasta en un 50%,.Los granulocitos incrementan en un 60% su poder fagocitario por lo que es útil en cáncer, sida, candidiasis sistémica, herpes virus. Los glucósidos quinóvicos. contenidos le confieren propiedad Antiinflamatoria Un 15% superior a la indometacina, util en artritis reumatoide, artritis diversas, bursitis, reuma, lupus, fibromialgias. Antimutágena y citostática (isorincofilina). Inhibe las ADN polimerasas alfa. Las mitosis de células H,L se reducen, mientras que las de los fibroblastos normales no se alteran. Útil en cáncer, evita las metástasis. AQUINO, et al. en 1989 probaron la actividad antiviral de los nueve glicósidos aislados de Uncaria tomentosa contra el virus de la estomatitis vesicular Útil contra los ARNvirus encapsulados, virus del sida HIV (combinada con AZT), herpes genital y herpes zoster, resfriado común, sinusitis, otitis7 Información Toxicologica: El análisis de toxicidad a una muestra micropulverizada y otra de extracto seco de Uncaria tomentosa No se presentaron signos ni efectos colaterales ni se presentó efecto letal o muerte en los animales de experimentación, por lo que no se establece el DL50 (dosis letal por vía oral), por carencia de mortalidad alguna, a dosis menores a 2 gr/ Kg de peso U.N.M de San Marcos laboratorio de anatomía y farnacognosia Contraindicaciones: Esta contra indicada durante la administración de ciclosporina o de medicamentos que tengan la función de evitar el rechazo en transplante de órganos Por ser un producto natural que se encuentra aún en estudio su consumo será restringido durante el periodo de gestación y post operatorio

7

Bernat Vanaclocha Vanaclocha,Cañigueral: Fitoterapia: vademécum de prescripción

UNFV

29

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

Hoja de Coca Aspectos químicos: La cocaína (C17H21O4N); se define como un alcaloide porque tiene las características clásicas de estos: es una base nitrogenada capaz de formar sales en ácidos orgánicos e inorgánicos, tienen origen vegetal y actividad farmacológica definida. Pertenece al grupo de los alcaloides tropanicos, su núcleo fundamental es el tropano el cual es producto de la condensación de un anillo de cinco miembros o pirrolidinico y otros de seis miembros o piperidinico con tres átomos comunes, dos de carbono y uno de nitrógeno. El nitrógeno que cumple la función de puente contiene un grupo metilo. Del tropano deriva la ecgonina que presenta un radical hidroxilo (OH) en el carbono 3 y un grupo carboxilico (COOH) en posición 2; siendo por tanto el 3-hidroxi-2- carboxi-tropano. La ecgonina puede formar esteres con los alcoholes mediante su radical carboxi (derivado de acido metanoico) y con los ácidos por medio del grupo OH presente en la molécula. El ester doble producto de la reacción con alcohol metilico y acido benzoico es la cocaína. La unión ester es bastante labil en presencia de tejidos vegetales o animales, lo que hace que el contenido de cocaína en las hojas de coca se vaya perdiendo con el tiempo: la desecación hace mas lento el proceso pero no la suprime la ecgonina contiene 4 átomos de carbono asimétricos o quirales que generan formas estereoisomericas, las cuales pueden dividirse en dos grupos, las que contienen los grupos hidroxilo y carboxilo en el mismo núcleo molecular (las formas cis), o sobre lados opuestos (las formas trans) •

trans ecgonina

•

cis-ecgonina

La cocaína al igual que la ecgonina contiene cuatro átomos de carbonos quirales, las cocaínas derivadas de la forma trans, se distinguen por la letra griega a las cuales son d-cocaína o isococaina y las cocaínas que tienen configuración cis, son las l-cocaínas; una mezcla de ambos isomeros en proporciones iguales genera la llamada cocaína racemica que no tiene actividad óptica. Los átomos quirales en la molécula de l-cocaína que es la mas importante y tiene actividad biológica son las presentadas en seguida, los cuales han sido tomados uno por uno para una mejor visión de su configuración absoluta, así como de la posición de sus grupos sustituyentes: Los carbonos quirales que contienen las moléculas de cocaína compiten entre si y se contrarresta, por tanto la actividad óptica de la cocaína así como de todos los alcaloides se ve condicionada por la presencia del átomo de nitrógeno en su estructura, es decir la cocaína presenta actividad óptica por el nitrógeno mas que por los carbonos quirales pero tampoco se debe ignorar que estos producen algún efecto, en la desviación de la luz polarizada por la cocaína. Tanto la d-cocaína como la lcocaína han sido sintetizados por Willstaller a partir de una mezcla de esteres de ecgonina. De esta mezcla se separo un t-y-ecgonina la cual fue transformada en sus UNFV

30

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides derivados, uno de los cuales fue obtenido naturalmente d-y-cocaína. De los esteres de ecgonina residuales fue preparada una cocaína racemica la que por cristalización fraccional de sus bitartaratos se obtuvo la l-cocaína.

Propiedades físicas y farmacológicas: La l-cocaína es el alcaloide mas importante de las hojas de coca, son prismas monoclínicos, incoloros, con un punto de fusión de 98oC, cristaliza a partir de etanol, es muy soluble en cloroformo (CHCl3), soluble en etanol, éter dietilico, sulfuro de carbono (CS2), benceno, aceite de oliva y trementina; acetona, acido acético, petróleo; muy poco soluble en agua fría, sus soluciones son alcalinas al papel de tornasol; es insoluble en glicerina. La soluciones de cocaína son levógiras y tiene una [a] D20= -15,83o (rotación especifica en la línea del sodio a 20oC) en cloroformo. Sublima con descomposición a temperaturas que estén por encima de su punto de fusión tiene sabor amargo e insensibiliza transitoriamente los nervios linguales.

UNFV

31

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

CONCLUSIONES •

En los vegetales los alcaloides proceden del metabolismo secundario y se originan a partir de aminoácidos terpenos y acetogeninas.

•

Los principales productores de alcaloides son generalmente los vegetales, encontrándose en mayor cantidad en las gimnospermas especialmente en las dicotiledóneas.

•

Los alcaloides están localizados en tejidos periféricos: corteza, raíces, hojas, frutos y semillas, cumpliendo diferentes funciones ya sean de defensa contra parásitos o insectos o productos de almacén de nitrógeno y excreción.

•

La mayoría de los alcaloides se nombran con la terminación “ina” y algunos de acuerdo a la especie, genero, nombre vulgar, descubridor, etc.

•

Las propiedades de los alcaloides es bastante variable esta depende de la presencia de oxigeno (sólidos cristalizables) o ausencia de la misma (líquidos), su solubilidad esta en base a su forma libre (insoluble en agua, soluble en alcohol) o sal (soluble en agua, soluble en alcohol), presentan mayoritariamente una actividad óptica levógira.

•

· La identificación de los alcaloides se determina mediante reacciones de precipitación, coloración y cristalización.

•

Según estudios realizados la HOJA DE COCA presenta un alto contenido nutricional NO PROTEICO destacando su uso como un anticaries natural, presenta bajos niveles de toxicidad si se consume directamente.

•

Cuando se ha consumido cocaína esta bloquea el correcto funcionamiento de la sinapsis (transferencia del impulso nervioso entre las neuronas denditras –axon), esto se debe porque bloquea el proceso de reciclaje de la dopamina, haciendo que esta se acumule el cerebro, causando alucinaciones.

UNFV

32

Laboratorio de Química Orgánica IV Alcaloides

BIBLIOGRAFÍA Libros [1] V. M. POTAPOV y S. N. TATARINCHIK: Química Orgánica, Segunda Edición, Editorial MIR, Año 1979, País Rusia – Moscú: Paginas: 445-447 [2] Joseph M. Hornback: Química orgánica, segunda edición, Editorial. Thompon Brooks cole, Año 2006, País USA Paginas: 1206-1208 [3] Lydia Galagovsky Kurman: Química Orgánica, Fundamentos Practicos para el Laboratorio, Ed. Universitaria de Buenos aires Paginas: 115-116 Libros de Internet [5] Bernat prescripción

Vanaclocha

Vanaclocha,Cañigueral:

Fitoterapia:

vademécum

de

[http://books.google.com.pe/books?id=K3V4p5Pj_dAC&pg=PA489&dq=u %C3%B1a+de+gato#v=onepage&q=&f=false Paginas de Internet [4]

Uña de gato

http://www.monografias.com/trabajos15/cultivo-uncaria-tomentosa/cultivouncaria-tomentosa.shtml [6]

Coca http://es.wikipedia.org/wiki/Coca%C3%ADna

[7]

Alcaloides http://www.scribd.com/doc/8972707/Alcaloides

UNFV

33