Aislamiento de Enterobacterias

AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS INTRODUCCIÓN: Es la forma común de denominar a las bacterias Gram Negativas. Reciben este nombre porque suelen encontrarse en el intestino de los mamíferos. mamíferos. Las especies que poseen agelos son móviles; el resto inmóviles. La capacidad para fermentar la lactosa ! el tiempo empleado en "acerlo sirven para diferenciar los g#neros. Los que no reali$an la fermentación son patógenos los fermentadores sapro%tos.

CLASIFICACIÓN: Las enterobacterias constitu!en la familia Enterobacteriaceae. &e clasi%can en cinco tribus' Esc"eric"ieas (lebsielleas )roteeas *ersineas ! Er+inieas. ,ada una comprende diversos g#neros.

IMPORTANCIA IMPORTANCIA DE RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS EN ALIMENTOS: Enterobacterias patógenas' La presencia de Enterobacterias patógenas en los alimentos supone un grave riesgo para los consumidores que van a ingerirlos. -ebemos garanti$ar la ausencia de este tipo de microorganismos en los alimentos.  /acillus cereus  ,lostridium botulinum  ,lostridium perfringens  Esc"eric"ia coli  Listeria monoc!togenes  &almonella  &"igella  &tap"!lococcus aureus  *ersinia enterocolitica

AISLAMIENTO DE LAS ENTEREBACTERIAS: 1. Agar Mc Conkey: Conke y: La bacteria E. coli forma colonias ro0as por un vira0e del indicador de p1 2ro0o neutro3 dando como resultado lactosa 4. La bacteria &almonella t!p"i forma colonias incoloras ! no vira el indicador de p1 por lo que es lactosa 5 . Este medio se utili$a para el aislamiento de bacilos Gram negativos negativos de f6cil desarrollo aerobios ! anaerobios facultativos. )ermite diferenciar bacterias que utili$an o no lactosa en muestras clínicas de agua ! alimentos. 7undamento' En el medio de cultivo las peptonas aportan los nutrientes necesarios necesarios para el desarrollo bacteriano la lactosa es el "idrato de carbono fermentable ! la me$cla de sales biliares ! el cristal violeta son los agentes selectivos que in"iben el desarrollo de gran parte de la ora Gram positiva. )or fermentación de la lactosa disminu!e el p1

alrededor de la colonia. Esto produce un vira0e del color del indicador de p1 2ro0o neutro3 la absorción en las colonias ! la precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. )reparación' &uspender 89 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 8 minutos ! me$clar "asta uniformar. ,alentar suavemente ! "ervir : a  minutos "asta disolver. Esterili$ar en autoclave a ::5?> "oras a @85@A B, en atmósfera aeróbica Resultados'

2. Sa!onea S"#gea Agar: Cedio de cultivo utili$ado para el aislamiento de &almonella spp. ! de algunas especies de &"igella spp. a partir de "eces alimentos ! otros materiales en los cuales se sospec"e su presencia. 7undamento' Es un medio de cultivo selectivo ! diferencial. La selectividad est6 dada por la sales biliares ! el verde brillante que in"iben el desarrollo de bacterias Gram positivas de la ma!oría de los coliformes ! el desarrollo invasor del )roteus spp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa ! a la formación de 6cido sulf"ídrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar acidi%can el medio "aciendo virar al ro0o el indicador de p1 obteni#ndose colonias rosadas o ro0as sobre un fondo ro0i$o. &almonella &"igella ! otros microorganismos no fermentadores de lactosa crecen bien en el medio de cultivo ! producen colonias transparentes. La producción de 6cido sulf"ídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de "ierro. )reparación' &uspender D9 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 8 minutos ! me$clar "asta "omogenei$ar. ,alentar a ebullición durante  o @ minutos. No esterili$ar en autoclave. Enfriar a ?8589 semanas las personas curadas eliminan &almonella. Mambi#n puede ocasionar %ebres ent#ricas o infección intestinal por intoFicación con algunos alimentos.

Re()&a*o( *e Pr)e+a( '

PRUEBAS BIO,UIMICAS: I.

Pr)e+a *e #n*o

La prueba del indol es una prueba bioquímica reali$ada en especies bacterianas para determinar la "abilidad del organismo de romper el indol del amino6cido triptófano. Esta división molecular es lograda por una serie de en$imas intracelulares diferentes un sistema que en con0unto se le llama con frecuencia triptofanasa. &e genera el indol por una desaminación reductiva del triptófano via la mol#cula intermediaria 6cido indolpirúvico. Las triptofanasas catali$an la reacción de desaminación durante el cual se remueve el grupo amino 2N13 de la mol#cula de triptófano. Los productos %nales de la reacción son el indol 6cido pirúvico amoníaco 2N1@3 ! energía. ,omo coen$ima de la reacción se requiere al fosfato de piridoFal Mal como ocurre con muc"as pruebas bioquímicas los resultados de una prueba de indol se indican con el cambio de color que sigue a la reacción. Esta prueba es positiva cuando se muestra un anillo de color anaran0ado. Ello es debido a la presencia de escatol tambi#n conocido como metil5indol o indol metilado otro posible producto de la degradación del triptófano /acteria indol positiva

 )lesiomonas s"igelloides

 Esc"eric"ia coli

  )asturella multocida )asturella

 La ma!oría de los )roteus spp.

/acteria indol negativa

 La ma!oría de los /acillus spp.

 Ictinobacillus spp. ureae

 )asturella "aemol!tica )asturella

 &almonella spp.

II.

Pr)e+a *e C#&ra&o:

En el medio de cultivo el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno ! el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Imbos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buer el magnesio es cofactor en$im6tico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente oFalacetato ! piruvato. Este último en presencia de un medio alcalino da origen a 6cidos org6nicos que al ser utili$ados como fuente de carbono producen carbonatos ! bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al a$ul ! esto es indicativo de la producción de citrato permeasa. Resultados'  5)ositivo' crecimiento ! color a$ul en el pico alcalinidad. 5Negativo' el medio permanece de color verde debido a que no "a! desarrollo bacteriano ! no "a! cambio de color.

CONCLUSIONES:  





Las enterobacterias son Gram negativas ! contienen m6s de @9 g#neros ! m6s de :99 especies que pueden tenermorfología de bacilos o cocos. La capacidad para fermentar la lactosa ! el tiempo empleado en "acerlo sirven para diferenciar los g#neros. Los que no reali$an la fermentación son patógenos los fermentadores sapro%tos. La capacidad para fermentar la lactosa ! el tiempo empleado en "acerlo sirven para diferenciar los g#neros. Los que no reali$an la fermentación son patógenos los fermentadores sapro%tos. Ilgunos de las enterobacterias que se encuentran en los alimentos no son patógenos pero se debe tener cuidado con los patogenos !a que provocan muc"as enfermedades. Esa es la ra$ón por la cual se debe "acer un buen mane0o de los alimentos ! tener buena "igiene.