Agar Caldo Urea

AGAR CALDO UREA Se utiliza para la valoración de la producción de ureasa por algunas enterobacterias. Este medio contiene glucosa peptona urea ! ro"o de #enol. Las bacterias $ue producen ureasa a partir de la urea dan lugar al carbonato de amonio ! el indicador se vuelve ro"o p%rpura. Obs&rvese en la tabla de reacciones bio$u'micas bio$u'micas $ue solo el g&nero (roteus da esta reacción positiva. ) Utilización de urea como #uente de carbono. ) La enzima ureasa *idroliza la urea en amoniaco ! an*'drido carbónico ante la variación del p+ por la alcalinización el indicador Ro"o ,enol vira de amarillo claro a ligeramente rosado o rosa me-icano. ) Se utiliza solamente para la detección de la ureasa en especies del g&nero (roteus. ) Si los nutrientes suministrados por el e-tracto de levadura se consumen antes $ue la bacteria muestre crecimiento no podr determinarse con e-actitud su capacidad de *idrolizar urea. ) (ero si es capaz de *idrolizar la urea pero no utilizar el amoniaco como #uente de nitrógeno no se produce crecimiento ! puede dar un #also negativo.

Christensen Medio (Urea Agar Base). Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.

Fundamento En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el ro!o de fenol es el indicador de p". #lgunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando

amoníaco y di$ido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el ro!o de fenol del amarillo al ro!o. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o %lebsiella.

Resultados Microorganismo Proteus mirabilis #&'' ()*+ %. pneumoniae #&'' +**/*) Escherichia coli #&'' 12311 S. fle$neri #&'' 1*11 S. typhimurium #&'' (*15

Actividad ureásica Positiva

Color del medio -o!o-osado

Positiva d0bil

-o!o-osado

4egativa

#marillo

4egativa 4egativa

#marillo #marillo

Limitaciones 6acterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser %lebsiella, Enterobacter y 'itrobacter, viran al color ro!orosado de todo el medio de cultivo luego de varios días de incubacin. 4o calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone facilmente.

Características del medio Medio preparado7 amarillo

SM Medio Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es 8til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento El triptfano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la tripteína, que puede ser o$idado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un con!unto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de %ovac9s o de Erlich, para originar un compuesto de color ro!o. :as cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un p" mayor a +.1.

esultados Ce!as m"viles# producen turbidez del medio, que se e$tiende mas allá de la línea de siembra. Ce!as inm"viles# el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra. Ce!as S$% !ositivas# ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. Ce!as S$% negativas# el medio permanece sin cambio de color. Ce!as indol !ositivas# desarrollo de color ro!o luego de agregar el reactivo de %ovac9s o de Erlich. Ce!as indol negativas# sin cambio de color.

Microorganismo

Movilidad

ndol

E. coli #&'' 12311 %. pneumoniae #&'' +**/*) P. mirabilis #&'' ()*+ S. typhimurium #&'' (*15 S. enteritidis #&'' )*+/ S. fle$neri #&'' 1*11

; 

; 

&roducci"n de ácido sul'hídrico  

;



;

;



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;



;







Limitaciones En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie, la movilidad puede ser difícil de observar. #lgunas bacterias productoras de melanina como M. morganii, pueden dar un color parduzco, que no debe confundirse con el color negro debido a la produccin de ácido sulfhídrico.

Características del medio Medio preparado7 ámbar.

Simmons Citrato Agar Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como 8nica fuente de carbono y energía.

Fundamento En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la 8nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la 8nica fuente de carbono. #mbos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. :as sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de p", que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como 8nica fuente de carbono, usan sales de amonio como 8nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a trav0s del ciclo del ácido tricarbo$ílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, o$alacetato y piruvato. Este 8ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.

Resultados &ositivo# crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad. egativo# el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

Microorganismo

Citrato !ermeasa

%lebsiella pneumoniae #&'' +**/*) S. typhimurium #&'' (*15 E. coli #&'' 12311 S. fle$neri #&'' 1*11

Positivo Positivo 4egativo 4egativo

Color del medio #zul #zul . ;ojo en pico de flauta< alcalino Sin cambio de color en capa profunda< alcalina. 8. 2roducción de 10S< precipitado negro ?. 2roducción de gases< 2roducción de burbujas, descomposición del medio, ligera muesca del medio sobre el costado del tubo o despla"amiento del medio del fondo, dejando un espacio libre.

Forma de reporte de resultados.

$. - : 9 (@ermentación de glucosa solamente) 0.  9 : 9 (@ermentación de glucosa  lactosa) >. - : - (Ao fermentación de glucosa  lactosa).

!os resultados se escriben siempre siguiendo un patrón. 2rimero la reacción del pico de flauta seguida por la reacción de la capa profunda, separadas por una barra.

isina $ierro Agar. Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarbo$ilacin ? desaminacin de la lisina y en la produccin de ácido sulfhídrico.

Fundamento En el medio de cultivo, la peptona y el e$tracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. :a glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarbo$ilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de p", el cual es de color amarillo a p" igual o menor a 2.1, y de color violeta a p" igual o mayor a /.5. Por decarbo$ilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el vira!e del indicador al color violeta. :a decarbo$ilacin de la lisina, tiene lugar en medio ácido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. :os microorganismos que no producen lisina decarbo$ilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un vira!e de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 1( hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. :a produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro. :as cepas de los g0neros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un ácido alfacetocarbnico, el cual, con la sal de hierro y ba!o la influencia del o$ígeno forma un color ro!izo en la superficie del medio.

Resultados  /ecar0o1ilaci"n de la lisina# Prueba Positiva7 Pico violeta?fondo violeta. Prueba 4egativa7 Pico violeta?fondo amarillo. %/esaminaci"n de la lisina# Pico ro!izo?fondo amarillo. Esto sucede con cepas del g0nero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp. +&roducci"n de ácido sul'hídrico# Prueba positiva7 Ennegrecimiento del medio @especialmente en el límite del pico y fondoA Color en el !ico de Color en la 2nnegrecimiento 'lauta 0ase del tu0o del medio Proteus mirabilis #&'' ()*+ -o!o #marillo 4egativo Salmonella typhimurium #&'' P8rpura P8rpura Positivo (*15 Salmonella enteritidis #&'' P8rpura P8rpura Positivo )*+/ Providencia spp. -o!o #marillo 4egativo 'itrobacter freundii P8rpura #marillo Positivo Microorganismos

Morganella spp.3 EdBarsiella spp. %lebsiella pneumoniae #&'' +**/*) Escherichia coli #&'' 12311

-o!o P8rpura

#marillo P8rpura

4egativo Positivo

P8rpura

P8rpura

4egativo

P8rpura

P8rpura

4egativo

3Algunas es!ecies de Morganella s!!.4 !ueden desaminar la lisina.

Características del medio Medio preparado7 color violeta.

1.- Lisina descarboxilasa positivo

 Descarboxilaciòn positiva, H2S positivo

.-Lisina descarboxilasa ne!ativa

".- Lisina desaminasa positivo

1.- #itrato positivo

2.- #itrato ne!ativo

F$%D&'(%)*+ '*)ILID&D sim

M5 Medio. Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su movilidad, actividad de ornitina decarbo$ilasa y produccin de indol.

Fundamento Medio de cultivo semislido, altamente nutritivo debido a la presencia de e$tracto de levadura, peptona y tripteína. #demás, la tripteína aporta grandes cantidades de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol. :a de$trosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la deteccin de la enzima ornitina decarbo$ilasa, el p8rpura de bromocresol es el indicador de p", que en medio alcalino es de color p8rpura y en medio ácido es amarillo. Por su composicin, es posible detectar ) reacciones en un mismo tubo7 movilidad, presencia de ornitina decarbo$ilasa e indol. :a movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas allá de la línea de inoculacin. :a reaccin positiva a la ornitina está dada por un color p8rpura del medio. Cebido a la fermentacin de la glucosa se reduce el p" produciendo una condicin ácida y originando que el indicador de p" p8rpura de bromocresol vire al amarillo. :a presencia de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarbo$ilasa, la cual decarbo$ila la ornitina presente. Por decarbo$ilacin, se alcaliniza el medio, con el consecuente vira!e del indicador hacia el color p8rpura. El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color ro!o luego de agregar unas gotas de reactivo de %ovac9s o de Erlich, indica un resultado positivo.

Resultados Movilidad# -esultado positivo7 presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la línea de siembra. -esultado negativo7 crecimiento solamente en la línea de siembra. %5rnitina decar0o1ilasa# -esultado positivo7 color p8rpura. -esultado negativo7 color amarillo. # veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie del medio. +&rue0a del indol# :a prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. -esultado positivo7 color ro!o al agregar el reactivo revelador.

-esultado negativo7 el color del reactivo revelador permanece incoloro amarillento. Microorganismo E. coli #&'' 12311 %. pneumoniae #&'' +**/*) P. mirabilis #&'' ()*+

Crecimiento Movilidad

ndol

6ueno 6ueno

; 

; 

5rnitina decar0o1ilasa ; 

6ueno

;



;

Características del medio Medio preparado7 p8rpura transparente a ligeramente opalescente.

MR6& Medio Medio utilizado para la realizacin del ensayo de -o!o de Metilo y