Actividad de La Ureasa

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA –UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Ambiente-ECAPMA Programas: Zootecnia; Agronomí Agronomía; a; Ingeniería Agroforestal

LABORATORIOS DE BIOQUÍMICA METABÓLICA-LBM Prof: Jairo ranados!, M"c

PRÁCTICA 1 Determin!i"n #e A!ti$i## Ure%&i! 'AU( en &)e*+&, &t+& . /+rr0e&

INTERANTES DEL RUPO NATALIA NATALIA ROCÍO BUITRAO BUITR AO RAMOS COD2 1345617634 B)itr8+2nt*i98mi*2!+m LORIA :O;ANA OLMOS COD2 *+!L>?@>! /L>A%! >ctiidad ;reásica, forra:e, suelo, urea, enzimas$ ABSTRACT

;rease Bs > exoenzyme ;rease exoenzyme that cata catalyzes lyzes the hydr hydrolysi olysis s reac reaction tion of the urea, the main cell product nitrogen degradation of proteins and nucleic acids, Chich is easier to remoe than other forms of nitrogen n itrogen (as ammonia) is Chy Less solule in Cater and toxic (!cience in !chool, 2""#)$ Bn this reaction, the urea reaDs para train dioxide techniques for the analysis of soil enzyme actiity 21 /aron and ammonium, as descried in the folloCing reaction (uintero*Lizaola et al$, 2""+) -2./0.-2  -2 0 ****** 2.-  /02 ;rease is found mainly in seeds, micro*organisms and inerterates$ Bn plants, it is he hexa xame merr ;. (c (con onsi sist sts s of si six x id ident entic ical al ch chai ains ns)) an and d is lo loca cate ted d in th the e cytoplasm$ 0ptimum p- is 3$4 and its optimum temperature 5" 6 / (7andeler and 8erer, 19##)$ &he enzymatic actiity of urease in soil and forage samples Cas Ca s me meas asur ured ed$$ &h &he e me meth thod odol olog ogy y co cons nsis iste ted d a asi sica call lly y re remo moi ing ng .a .a/l /l y centrifugation the supernatant Chich is itself susequently Cith -/l title and  &ashiro  & ashiro indicator Airo an emerald green color color$$ &he results shoCed that the actiity of urease paragraph Eeasure soil and forage samples F>! 9#" and 3++ micromoles of urea < g$ min respectiely$ ?eing mayor of the metaolic actiity of soil enzyme in excess esta regarding the actiity in fodder fodder$$ 7%GF0@H! urease actiity, feed, soil, urea, enzymes$ 2

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INTRODUCCIÓN *a calidad y la salud de los suelos se miden a tra+s de distintos indicadores ue e+al.an su funcionamiento /%oran et al!, 01112! Para medir la calidad, se considera u tan adecuadas son sus 3ro3iedades físicas y uímicas 3ara 3ermitir el intercambio de gases, la retenci4n de 5umedad y de nutrientes, la 3enetraci4n de raíces, entre otros! En este conte6to, uno de los indicadores ue se 5a utili7ado es la magnitud de la acti+idad en7im8tica de la ureasa in+olucrada en los 3rocesos antes mencionados! *a mayoría de las en7imas act.an dentro de las clulas, 3ero algunas son e6tracelulares! *a acti+idad en7im8tica del suelo es im3ortante 3orue refle(a el estado en el ue se encuentran sus 3oblaciones microbianas /%oran, 99; ianfreda y #uggiero, 92! %ado a la ele+ada tecnificaci4n em3leada 3ara uso con monoculti+os se 5a 3roducido un r83ido deterioro de los suelos! En +ista de esta 3roblem8tica, en los .ltimos a2, la relaci4n C'$ /#i+ero y Paolini, 011?2, contenido de lignina /*2 y celulosa /@ioretto et al!, 9?2, contenido de 3olifenoles /PP2 /Palm y "8nc5e7, 01102, las relaciones *'$, PP'$ y /*PP2'$ /Palm y "8nc5e7, 0110; "ing5 et al!, 9B2! %entro de este marco, la acti+idad en7im8tica es considerada como una de las características m8s din8micas del suelo, ya ue res3onde r83idamente a los cambios en las 3r8cticas de mane(o dentro de un sistema! "e utili7a la medici4n de la acti+idad de distintas en7imas del suelo, como 3or e(em3lo la ureasa, 3ara seguir la din8mica de la minerali7aci4n del $, ya ue 3ermite e+aluar los cambios 3roducidos en las transformaciones de este elemento esencial en los suelos, como efecto del uso de residuos org8nicos de distintos orígenes, debido a su 3artici3aci4n como en7imas 5idrolíticas en la descom3osici4n de residuos! El ob(eti+o de este traba(o fue e+aluar la acti+idad en7im8tica de la ureasa en algunas muestras biol4gicas!

12 /UNDAMENTACIÓN TEÓRICA 121 MAPA CONCEPTUAL

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12 diagrama de flu(o relacionado con los +ideos

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2 MATERIALES Y MTODOS 21 LISTA DE MATERIALES Y EQUIPOS UTILIADOS C)#r+ 12 *ista de materiales y eui3os utili7ados en la 3r8ctica A*i!!i"n Mteri* " eF)i+ C!i## . 'Oer!i"n /+t+8r=G Re* 'mr!( Pre!i&i"n )nitri(

B*nH n*Gti! Ogitar durante  minutos

/entrifugar a +"" rpm durante + minutos

 &omar el sorenadante (Jase liquida)

Hescartar el precipitado (Jase solida) Eedir el sorenadante en una proeta y adicionar .a/l hasta 2+ >gitar durante " segundos

@otular

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>listar el monta:e de titulación la(ar, purgar ,cargar y enrasar la ureta con -/l ",1.

/olocar el %rlenmeyer que contiene la solución lanca, agregar + gotas del indicador tashiro, dea:o la ureta y adicionar lentamente el -/l, hasta que aparezca y permanezca un color (erde esmeralda$ %sto indica que los equi(alentes*gramo del hidróxido de amonio fueron neutralizados por los equi(alentes*gramo del ácido clorhídrico$

@egistrar en su tala de datos, los mL de -/l gastados en la titulación del lanco$

@epetir el procedimiento anterior, con el tuo !t y anotar los mL empleados de -/l

/ontinuar el proceso con los tuos 1, 2,  y 4 K registrar los mL gastados de -/l en la tala de datos$

?2 RESULTADOS Y DISCUSIÓN ?21 TABLAS DE DATOS M)e&tr

1"

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m '8( &)e*+ =+rr0e e&t%n#r J*n!+

V;CL'm*( 124 12? 12 32

0!9gr  0!>gr 

-

?22 C%*!)*+& ?221 A!ti$i## Ure%&i! en e* t)J+ e&t%n#r 

 AU=

( mL HClSt −mLHClB ) × 0,1 × 1000 µ mol × Fd 2 ×t ( min )  Fd =

50 mL 5 mL

?222 A!ti$i## Ure%&i! #e* &)e*+

 AU=

( mL HCl para tubo 1 −mLHClB ) × 0,1 × 1000 µmol × Fd 2 ×t ( 30 min )

 Fd =

50 mL

V  f  ( mL )

×

 100  g

W Suelo

?22? A!ti$i## Ure%&i! #e* =+rr0e  AU=

( mL HCl para tubo 2 −0,2 ) × 0,1 × 1000 µmol × Fd 2 × t ( min)  Fd =

50 mL

V  f ( mL )

11

×

100 g

W  Forraje

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?2?TABLA DE RESULTADOS TJ* 2 Acti+idad Hre8sica de las muestras biol4gicas TUBO TIPO DE MUESTRA AU'   µmolurea / g.min ¿ 1

E&t%n#r

1626



S)e*+

53

?

/+rr0e

7@@

?2?21 RÁ/ICAS

8raLca 1$ >cti(idad ureasa en muestras iologicas 12"" 1""" #""

micromoles de urea >, 001-09B %ouglas, *!A!, =remner!, J!M! 01B! E6traction and colorimetric determination of urea in soils! "oil "cience "ociety of American Proceedings! F, >?1->9

1

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ianfreda, *!, #uggiero, P! 9! En7yme acti+ities in soil! En: $anni3ieri, P!, "malla!, ! /editores2! $ucleic acids and 3roteins in soil! Ca3ítulo 09! "3ringer Publis5ing Com3any!  Alemania andeler, E!, erber, ! 01>>! "5ort-term assay of soil urease acti+ity using colorimetric determination of amonium! =iology and @ertility of "oils! , >-B9! Nuintero-*i7aola #!, @errera-Cerrato #!, Etc5e+ers-=arra J!%! 9?! Manual 3ara la medici4n de acti+idades en7im8ticas en com3ost y +ermicom3ost! Colegio de Postgraduados! Cam3us Montecillo! M6ico #IE#&, C! K J! PA&*I$I! 011?! Efecto de la incor3oraci4n de residuos org8nicos sobre algunas 3ro3iedades uímicas de dos suelos en ene7uela! enesuelos :9F-! "cience in "c5ool, 9>! 5tt3:''OOO!scienceinsc5ool!org'3rint'0BF! Consultado en octubre de 90!

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PRÁCTICA  CrJ+n+ Or8%ni!+ . C!i## Am+rti8)#+r #e &)e*+& RESUMEN 'Re#!tr en m%im+ 13 *Gne&, en )n &+*+ tet+> Q)K &e

PALABRAS CLAVES> 'E&!riJir @(>

ABSTRACT 'T VARIABLE DESCRIPCIÓN E&e!tr+=+t+met EVALUADA Tit)*!i"n ri Mteri +r8%ni! MO '( NT

Nitr"8en+ t+t* '(

CO

CrJ+n+ +r8%ni!+'(

;

P+ten!i* #e ;i#r"8en+&



C!i## Am+rti8)#+r

?2?21 RÁ/ICAS 'POR E:EMPLO(

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r%=i! 12Re&)*t#+& n%*i&i& /i&i!+F)Gmi!+ #e &)e*+ +

4$44 4$55

4$"5

4 

2$5

2$

V*+re& +r!ent)*e& 2 1

"$2

"

In#i!#+re& /i&i!+F)Gmi!+&

?24 2 DISCUSIÓN DE RESULTADOS EN ESTE ESPACIO SE DEBE REALIAR UN ANÁLISIS INTERPRETATIVO Y COMPARATIVO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS, TRATANDO DE CON/RONTAR LOS VALORES CON LA /UNDAMENTACIÓN TEÓRICA Y CON LA LITERATURA 42 CONCLUSIONES 'E&!riJir mGnim+ Cin!+( ESTAS SE DERIVAN DE LA DISCUSIÓN DE RESULTADOS

@2 BIBLIORA/ÍA

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'UTILIADA Y CONSULTADA, MÍNIMO 6 RE/ERENCIAS EN NORMAS APA(

PRÁCTICA 4 A!ti$i## Ct*Gti! #e Ct*& 'ACAT( en m)e&tr& #e +ri8en Bi+*"8i!+ RESUMEN 'Re#!tr en m%im+ 13 *Gne&, en )n &+*+ tet+> Q)K &e

PALABRAS CLAVES> 'E&!riJir @(>

ABSTRACT 'T m#)r!i"n . &ene&!en!i 2 MATERIALES Y MTODOS 21 LISTA DE MATERIALES Y EQUIPOS UTILIADOS'!+m*etr e* !)#r+(

C)#r+ 12 *ista de materiales y eui3os utili7ados en la 3r8ctica A*i!!i"n Mteri* " eF)i+ C!i## . 'Oer!i"n /+t+8r=G Re* 'mr!( Pre!i&i"n )nitri(

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