Acción de La Lipasa Pancreática Sobre La Leche Homogenizada (2)

ACCIÓN DE LA LIPASA PANCREÁTICA SOBRE LA LECHE HOMOGENIZADA Revisión de conceptos: Hidrólisis de lípidos Pancreatina El alumno debe revisar cómo se lleva a cabo la hidrólisis de lípidos, cuales son sus productos y sus condiciones. Este es un ejercicio muy sencillo, con el cual se demostrará la acción enzimática de la lipasa pancreática. Se deducirá la hidrólisis de los lípidos y la existencia de productos en forma titrimética. MAERIAL NECESARIO 5 tubos de ensaye 15 X 150 5 vasos de precipitados de 250 ml 1 gradilla 1 bureta para titulación

Cada grupo se responsabilizará de traer a la practica la leche homogenizada (leche de litro) PROCEDIMIENTO 1. Coloque en su gradilla 5 tubos de ensaye de 15 X 150 y numérelos de alguna forma para su identificación 2. Añada 10 ml de leche homogenizada a cada uno de los 5 tubos 3. Añada 3.0 ml de pancreatina al 1% a cada uno de los 5 tubos y agítelos. 4. Inmediatamente vacíe el contenido del tubo 1 a un vaso de precipitados de 250 ml que ya contenga 25 ml de alcohol etílico de 95 grados. 5. Lleve los demás tubos a un baño de agua a 37 ºC anotado la hora exacta 6. Agite bien el contenido del primer vaso de precipitado. Añádale 0.5 ml de fenolftaleína y titúlelo con KOH al 0.05 N hasta un color rosa permanente. 7. A los 10 minutos saque el tubo 2 del baño, vacíe el contenido a otro vaso de precipitado con 25 ml de alcohol etílico. Añádale 0.5 ml de fenolftaleína y titúlelo de la misma manera que el caso anterior. 8. A los 20 minutos saque el tubo número 3, a los 30 minutos el tubo número 4 y a los 40 minutos el tubo número 5. Déles el mismo tratamiento que el tubo número 1 9. El tubo número 1 es el testigo, por lo tanto para obtener los valores que va a reportar tiene que restarle a todos los tubos, el valor obtenido en el tubo 1. 10. Calcule los ml de KOH consumidos en cada tubo.

DATOS EXPERIMENTAES No de tubo

ml de KOH consumidos en titulación

ml de KOH después de restar el testigo

1 2 3 4 5

FUNDAMENTO DE LA REACCIÓN Fundamento de la reacción de la lipasa

Fundamento de la reacción titrimétrica

CUESTIONARIO 1. ¿por qué usar leche homogenizada en este ejercicio? 2. ¿por qué el pH de la titulación, aumenta en cantidad a medida que el tiempo de incubación es mayor?

LECTURA Practica: Acción de la lipasa sobre leche homogenizada Entre las clases de enzimas que catalizan la hidrólisis de diversos ésteres hay diferencias entre las lipasas y las esterasas. Esta diferencia se basa en su especificidad preferencial selectiva. Los sustratos naturales de las lipasas son aceites o grasas, o sea triacilgliceroles de ácidos grasos de cadena larga, mientras que los sustratos naturales de las esterasas, son los ésteres de ácidos grasos de bajo peso molecular. Las dos clases de enzimas son sumamente inespecíficas en cuanto a la naturaleza del ácido graso o del alcohol, que tienen efecto no en la especificidad, sino en la velocidad de reacción. La hidrólisis de los triacilgliceroles que consumen los animales superiores se lleva a cabo principalmente en el intestino delgado, por medio de enzimas lipolíticas elaboradas en el páncreas. Las lipasas pancreáticas existen en dos tipos: las específicas para romper la unión éster en posición alfa o alfa prima de los triacilgliceroles y las específicas para las uniones beta. La hidrólisis completa de los triacilgliceroles procede entonces por pasos. Primero se hidrolizan rápidamente las uniones alfa y alfa prima y luego lentamente se rompen las uniones beta. Estas reacciones se aceleran con las sales biliares como el taurocolato o glucolato de sodio, que emulsifican y solubilizan a los lípidos. Las sales biliares se producen en el hígado, se almacenan en la vesícula biliar y al momento de las comidas se vierten al intestino delgado inducidas por la hormona colesistoquinina, que se sintetiza en el mismo intestino delgado. La lipasa (E.C.3.1.1.3.) tiene el nombre técnico de triacil glicerol acil hidrolasa. Antiguamente se llamaba esteapsina. Se extrae de diferentes fuentes biológicas. Contiene siempre diversas fracciones proteicas de muy diversas fracciones proteicas de muy diversas masas moleculares, que van desde 39,000 hasta 200,000 daltones, todas ellas con actividad lipolítica. Estas esterasas hidrolizan sustratos emulsificados y no atacan sustratos en verdadera solución. Se cree que esto se deba a que la enzima se adsorbe a su sustrato emulsificado y la velocidad inicial de reacción está en función del número de moléculas de enzima adsorbidas en la interfase. Se le llama pancreatina a un extracto de páncreas con fuerte actividad lipolítica. La actividad enzimática se mide por titulación de la cantidad de ácidos grasos liberados de los ésteres. Es necesario trabajar con emulsiones de los sustratos. Uno de los emulsificantes más comúnmente empleados es el alcohol polivinílico (PVA), pero se pueden usar otros emulsificantes como bentonita, goma arábiga, oleato de sodio, etc. El uso de la leche homogenizada es fácil y da excelentes resultados para demostrar la actividad de las lipasas, puesto que en la leche homogenizada ya están las grasas emulsificadas y vienen en glóbulos finamente divididos. Consiguientemente en este caso no habrá necesidad de una emulsificación ulterior.