4 Informe de Analisis

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO FACULTAD DE INGENIERÍA PESQUERA Y ALIMENTOS ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS

Análisis de Alimentos Ana Lancho Ruiz  90G

Clemente Calderón, Keythlyn Rubí

1524120377

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Martínez Pujalla, Caroline Lisseth

1524120323

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Padilla Velasquez, Julissa Margarita

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Padilla Villalobos, Melissa Katherine

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Taya Sifuentes, Antuanet Aurora

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Facultad de Ingeniería Pesquera y de Alimentos

INDICE

INTRODUCCIÓN  .................................................................................................................................. 3 OBJETIVOS........................................................................................................................................... 4 MARCO TEORICO  ................................................................................................................................ 5 MUESTRAS, MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS ............................................................................ 9   ............................................................................................................ 10   ...................................................................................................................................... 12   ......................................................................................................................................... 17   .................................................................................................................................. 18   ..................................................................................................................................... 18

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INTRODUCCIÓN En 1910, el botánico ruso M. Tswett describió por vez primera esta técnica, que fue aplicada a la separación de pigmentos de plantas, dándole el nombre de cromatografía en referencia a las bandas coloreadas de pigmentos que se separaban por su adsorción selectiva sobre columnas de yeso. Tras su descubrimiento, la cromatografía quedo prácticamente olvidada hasta 1930 año en que fue redescubierta por Kuhn y Lederer, quienes la aplicaron para la separación de carotenoides; a partir de este momento, el uso de esta técnica se fue extendiendo cada vez más, al tiempo que se desarrollaban diferentes versiones de la misma: cromatografía de reparto (Martin y Synge, 1941), de papel (Consden, Gordon y Martin, 1944), de capa fina (Stahl, 1958), etc.

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OBJETIVOS

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Determinar cromatografía de papel y cromatografía de capa fina para una muestra de chicha morada ´´NEGRITA´´.

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Entender la importancia de la cromatografía en el área de Análisis de Alimentos.

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Relacionar todos los conceptos relacionados a la cromatografía para entender el proceso de separación del color en una muestra de chicha artificial.

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MARCO TEORICO Cromatografía 

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Tswett (1906). Método de cromatografía en el cual los componentes de una mezcla son separados en una columna adsorbente dentro de un sistema fluyente. Método usado principalmente para la separación de los componentes de una muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es móvil. La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido soportado en un sólido o en un gel (matriz). La fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en una capa, distribuida como una película, etc. (I.U.P.A.C)

Figura N°1, Cromatografía en papel Actualmente la Cromatografía es el nombre que se le da a un grupo de técnicas utilizadas en la determinación de la identidad de sustancias, en la separación de componentes de las mezclas y en la purificación de compuestos. Esta técnica es muy efectiva por lo t anto se utilizada tanto a nivel de investigación como nivel industrial. (Textos Científicos, 2007) Este método puede variar, pero siempre se basa en un principio: Todos los sistemas cromatograficos contienen una fase estacionaria y una fase móvil.

Figura N°2, Tabla de fases móviles y estacionarias, Cromatografía ANALISIS DE COLORANTES Y PIGMENTOS (CROMATOGRAFIA) 5 | 18

Facultad de Ingeniería Pesquera y de Alimentos Tipos de Cromatografía: Clasificación atendiendo al fundamento de separación

Cromatografía de Líquidos:  _ Fase móvil líquido y fase estacionaria sólida 

1. Cromatografía de adsorción: La fase estacionaria sólida retiene a los solutos por un doble efecto de adsorción física y química. Las interacciones implicadas son del tipo de Van Der Waals. 2. Cromatografía de cambio iónico: El sólido retiene a los solutos gracias a las atracciones electrostáticas. La fase estacionaria sólida lleva en las superficies cargas electrostáticas fijas, que retienen contra iones móviles que pueden intercambiarse por iones de la fase móvil. 3. Cromatografía de exclusión: La fase estacionaria es un material poroso, que retiene a las moléculas en función de su tamaño, en ocasiones se denomina también cromatografía de filtración sobre geles o permeabilidad de geles (GPC).  _ Fase estacionaria líquida

Fi ura N°3

1. Cromatografía de reparto: La fase estacionaria es un líquido inmovilizado sobre un material inerte sólido que solo actúa de Fi ura N°4 soporte. 2. Cromatografía de afinidad o fases enlazadas: La fase estacionaria generalmente es un polímero de tipo líquido inmovilizado sobre un sólido inerte por enlaces covalentes.

Figura N°5, Cromatografía de reparto, Slide Player

Cromatografía de Gases:  _ Fase móvil gaseosa 

1. Cromatografía de adsorción: Llamado también cromatografía gas- sólido, la fase estacionaria es un sólido finamente dividido, que retiene a los solutos por adsorción. 2. Cromatografía de partición o reparto: La fase estacionaria es un líquido retenido por impregnación o por enlace sobre un sólido inerte. Se basa en equilibrios de distribución. ANALISIS DE COLORANTES Y PIGMENTOS (CROMATOGRAFIA) 6 | 18

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Figura N°6, Modelo de Cromatografía de gas, Emase

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Cromatografía de Fluidos Supercríticos: Un fluido supercrítico es un fluido calentado a T° y P superiores a las críticas. Posee algunas características propias de un gas y alagunas propias de un líquido. La fase estacionaria puede ser líquida o sólida.

Clasificación atendiendo al modo que se lleva a cabo una separación 1. Cromatografía en columna: La fase estacionaria se introduce en un tubo estrecho a través del cual se hace pasar por una fase móvil. Esta se desplaza por capilaridad, gravedad o presión. Pueden emplearse fases móviles líquidas, gaseosas o fluidos supercríticos.   

Cromatografía de Líquidos Cromatografía de gases Cromatografía de fluidos supercríticos

2. Cromatografía plana: La fase estacionaria se coloca en un soporte plano. En cromatografía plana el flujo de fase móvil se consigue por capilaridad y gravedad. Solo pueden emplearse fases móviles líquidos. Existen 2 tipos: 

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Cromatografía de papel: La fase estacionaria está constituida por el agua retenida en celulosa, también existen papeles cambiadores de iones. Cromatografía en capa fina: La fase estacionaria es un sólido adsorbente finamente dividido o un líquido inmovilizado sobre un sólido colocado sobre una placa plana.

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Figura N°7, Cromatografía de papel

Figura N°8, Cromatografía en capa fina

Funcionamiento de un Cromatógrafo de Gas El esquema general:  _Fuente de gas  _Sistema de inyección  _Horno y Columna cromatográfica  _Sistema de detección  _Sistema de Registro Figura N°9, Esquema de Cromatografía de Gas, ResearchGate Funcionamiento de Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)  _Sistema de suministro de fase móvil  _Sistema de inyección de muestra  _Columna cromatográfica  _Detector

Figura N°10, Esquema de Cromatografía de HLPC, HPLC Química ANALISIS DE COLORANTES Y PIGMENTOS (CROMATOGRAFIA) 8 | 18

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MUESTRAS, MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS A) Muestra Chicha Morada “Negrita”

MAIZENA “DURYEA”

B) Reactivos Éter de Petróleo

Agua Destilada

Alcohol-Etanol

C) Materiales Papel Filtro

Placa Petri

Vaso precipitado de 250 ml

Vaso Precipitado de 500 ml

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A) CROMATOGRAFIA DE PAPEL 

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Se comenzara con un lavado analítico de los materiales Se cortara el papel filtro en forma circular , donde se escogerá como molde el vaso precipitado de 250 ml Se hará un huequito al centro del papel y se le introducirá papel filtro como se muestra en la imagen. Repetiremos el proceso en tres vasos precipitados diferentes

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Se prepara una solución concentrada de chicha morada

12 g ------------------ 50 ml 

Se mezclara hasta que quede uniforme

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Se sembrara la muestra en el papel filtro y se colocara encima del vaso precipitado de 50 ml de alcohol , éter de petróleo y agua destilada y seguidamente se tapara con un vaso precipitado de mayor volumen

OTRO METODO DE CROMATOGRAFIA DE PAPEL

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A) B) C) D)

Se cortara papel filtro en forma de lápiz , donde colocaremos nuevamente en un vaso precipitado 50 ml de Alcohol , donde la siembra será de 1 punto y veremos como la muestra correrá de manera mas rápida y visual .

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Facultad de Ingeniería Pesquera y de Alimentos E) COMRATOGRAFIA EN CAPA FINA

Se formara el engrudo con un poco de maizena en 125 ml de agua , la mezcla se disolverá y debe quedar espesa y homogénea

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Se colocara el engrudo en 3 placas Petri donde se dejara secara temperatura ambiente , dando como resultado una base uniforme

Una vez seca se sembrara en el centro a su vez se echara una cierta cantidad de agua destilada, etanol y éter de petróleo respectivamente y se tapara , luego de unos minutos se observara el recorrido

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En esta parte de la práctica se utilizó papel filtro (posee celulosa) como fase estacionaria y un eluyente como fase móvil. Los eluyentes utilizados fueron: Éter de petróleo, Agua destilada y Etanol. Cada uno posee diferente polaridad que permitirá que el eluye se disperse en el papel filtro. - ÉTER DE PETRÓLEO Utilizamos éter de petróleo, pero no se presenció la dispersión de los componentes de la muestra, debido a su baja polaridad. FIGURA Nº1. Eluyente Éter de Petróleo en cromatografía de papel

FIGURA Nº2. Tiempo de espera para éter de Petróleo

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Facultad de Ingeniería Pesquera y de Alimentos - ETANOL Al utilizar etanol como eluyente no se evidenció mayor corrimiento de los componentes, sabiendo que el etanol es uno de los más polares por debajo del agua, llegamos a la conclusión de que no fue etanol puro, sino un alcohol isopropílico el que utilizamos. FIGURA Nº3. Eluyente Etanol en cromatografía de papel

FIGURA Nº4. Tiempo de espera para el Etanol

FIGURA Nº5. Corrimiento de los componentes

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Facultad de Ingeniería Pesquera y de Alimentos - AGUA DESTILADA Al usar agua destilada se evidenció claramente el arrastre de los componentes sobre el papel filtro. Corroborando que el agua es un eluyente de alta polaridad. Se observó la separación de los colores rojo por el centro y por el borde azul, indicando que el azul tiene más polaridad que el color rojo. (Observar la Figura 8) FIGURA Nº6. Eluyente Agua destilada en cromatografía de papel

FIGURA Nº7. Tiempo de espera para el agua

FIGURA Nº8. Corrimiento de los componentes

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En esta parte de la práctica se utilizó a la placa petri con una capa de almidón como fase estacionaria y un eluyente como fase móvil. De igual manera los eluyentes utilizados fueron: Éter de petróleo, Agua destilada y Etanol. - ÉTER DE PETRÓLEO Al igual que en la cromatografía de papel que se utilizó el éter de petróleo, siendo un eluyente de baja polaridad no hay arrastre de componentes. FIGURA Nº9. Eluyente éter de petróleo en cromatografía de capa fina

ETANOL Se presencia la dispersión del colorante sobre la capa de almidón, indicando que es un compuesto polar a pesar que el alcohol que no utilizamos no fue puro. Se observa separación del color rojo y un punto azul. FIGURA Nº10. Eluyente etanol en cromatografía de capa fina

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Facultad de Ingeniería Pesquera y de Alimentos - AGUA DESTILADA Se presencia la dispersión del colorante sobre la capa de almidón, indicando que es uno de los compuestos más polares. Se observa separación de los colores rojo y azul, siendo los componentes de los ingredientes de la chica morada de sobre. FIGURA Nº10. Eluyente agua destilada en cromatografía de capa fina

“La cromatografía de papel trabajo con el principio de que en un sistema de dos fases, los solutos

se mueven junto con la fase móvil a una velocidad que es dependiente de su distribución diferencial entre las dos fases. La celulosa del papel es el medio de soporte en el que se mueven los solventes”. (Vejar, 2005, p.147) - “La explicación es el agua se une a la celulosa polar, mucho más fácilmente que el solvente orgánico, de manera que esencialmente se puede decir que el solvente orgánico se m ueve sobre las fibras hidratadas de la celulosa”. (Vejar, 2005, p.147) - “Las diferencias de retención se deben a afinidades de adsorción, de solubilidad de un medio fijo o de fijación por enlaces iónicos; las diferencias de elución se deben, principalmente, a la mayor o menor solubilidad en el disolvente que circula... en resumen: el balance (afinidad por el soporte/afinidad por el eluyente) determina mayor o menor velocidad de elución de cada componente, lo que permite separarlos”. (Primo, 1995, 1223) Esto nos lleva a decir que es método muy indispensable para determinar pigmentos en colorantes.

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Se observó en esta práctica que por medio de la cromatografía es posible la separación de los colores, como la polaridad de solventes utilizados para la cromatografía determinan el resultado mostrándonos sus diferentes compuestos. En el caso del éter de petróleo no presento dispersión en ninguno de los dos casos a pesar que es un líquido (fase móvil) por lo cual llegamos a la conclusión que se debe a su baja polaridad. El etanol a pesar de su alta polaridad no evidencio mayor corrimiento y se debe a que no era etanol puro sino un alcohol isopropílico. Al usar agua destilada se evidenció claramente el arrastre de los componentes sobre el papel filtro. Comprobando que el agua es un eluyente de alta polaridad, observando la separación de los colores rojo por el centro y por los bordes azules, indicando que el azul tiene más polaridad que el color rojo.

CONCEPTOS FUNDAMENTALES DE CROMATOGRAFIA.MNCS Papers. http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografia/principios_ de_cromatografia.pdf Huertas Greco, Sánchez Medina (2012) ESQUEMA DE UN CROMATÓGRAFO DE GASES https://www.researchgate.net/figure/316148428_fig11_Figura-12-Esquema-de-uncromatografo-de-gases-Tomado-de-Huertas-Greco-Sanchez Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC). HPLC Química.

http://cromatografia.com.mx/ CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA EFICACIA - CROMATOGRAÍA DE GASES Emaze.com https://www.emaze.com/@AORWFTTW/Trabajo-Bioquimica MURILLO CORREA, A. CROMATOGRAFÍA DE REPARTO O DE PARTICIÓN. Slideplayer. http://slideplayer.es/slide/10434926/ CROMATOGRAFIA. Universidad Nacional del Santa. http://biblioteca.uns.edu.pe/saladocentes/archivoz/curzoz/cromatografia.pdf  TÉCNICAS CROMATOGRAFICAS. Archivos de Química Analítica Ambiental. Universidad de Jaén. http://www4.ujaen.es/~mjayora/docencia_archivos/Quimica%20analitica%20ambiental/T ema6.pdf  CROMATOGRAFÍA (2011) Blogspot. http://angela-qumicaorgnica.blogspot.pe/2011/11/cromatografia.html VEGA VIERA, J. MUÑOZ ROJAS A. CROMATOGRAFIA DE GASES EN ALCOHOLES. Universidad Nacional del Santa. https://es.slideshare.net/vegabner/cromatografia-de-gases-en-alcoholes CROMATOGRAFÍA. Textos Cientificos. https://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia

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