3 Sem Tinciones

 

Universidad de Chile Facultad de Medicina Curso Histopatología 2007

Tinción Histológica Tutora: TM Solange Zapata Residente: Dr Jorge Chamorro Ruiz 3 de Mayo del 2007

 

Técnica Histológica Fijación  Deshidratación  Aclaramiento  Inclusión 



Corte  Tinción  Montaje 

Seminario Anterior 

 

Tinción y Montaje     

Corte Desparafinado – Rehidratación Tinción Deshidratación Montaje 

Cubreobjetos: funciones 

Protección del tejido



↓ refracción de luz polarizada

 

Colorantes 

¿Por qué colorear una muestra? Los diversos elementos de los tejidos poseen prácticamente el   mismo índice de refracción, lo que hace que el reconocimiento de distintas estructuras sea una un a ta tare rea a dififíc ícilil..

 

Definición de Colorante 



  cuer cuerpo po col color orea eado do que U n c o l o r a n t e e s u n puede comunicar su color a otro cuerpo. La coloración es la propiedad que tienen ciertos cuerpos de ejercer una   absor absorció ción n sel selecti ectiva va sobre la luz. Dicho de otra manera un cuerpo se ve de tal color porque trasmite por transparencia o por difusión las radiaciones complementarias

de las que él absorbe.

 

Tipos de Colorantes 





Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula.

Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular.  Sales metálicas que se precipitan en los tejidos

y forman depósitos de metales en ellos.

 

Tipos de Coloraciones 

 Directas: se producen por inmersión en el baño

colorante. 

 Indirectas: en este tipo de coloración, el

colorante no puede actuar directamente, el objeto a colorear debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante, esta se llama mordiente.

 

Fundamentos Químicos de la Coloración 

Clas Cl asifific icac ació ión n co colo lora rant ntes es se segú gún n af afin inid idad ad:: Colorantes nucleares o básicos: su componente colorante activo es una base coloreada que se combina co con n lo loss ácidos nucleico coss.  Colo lora ran ntes citoplasm smá ático coss o ácidos: su componente 

a ctivo es un ácido coloreado que se combina con el citoplasma. Colo lora rant ntes es ne neut utro ross, tanto el ácido como la base son  Co coloreadas.

 

Colorantes básicos ANILINA+ Cl

Los colorantes básicos reaccionan con los GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes texturales, que son los grupos fosfato de los ácidos áci nuclei (ADN y RNA), los gryuplooss SULdos FATnuc O dleicos e lcos os  glucosaminoglucanos

GRUPOS CARBOXILO de las   proteínas. La reacción de estos grupos varía según el pH.

 

Colorantes ácidos Na+ ANILINA

Los colorantes ácidos se unen primariamente a los componentes texturales por medio de enlaces electrostáticos de manera similar pero o p u e s t a a l a d e l o s c o l o r a n t e s b á s i c o s . L a s anilinas ácidas reaccionan con grupos catiónicos, como los  grupos amino ionizados amino  ionizados de las proteínas.

 

Entonces: 

Elementos que se tiñan con colorantes básicos (ej. Hematoxilina) son basófilos:: basófilos 





La Heterocromatina y los Nucleolos por los grupos Fosfato ionizados. Ergatoplasma por grupos Fosfato ionizados. Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados



Elementos que se tiñan con colorantes ácidos (ej. acidófilos: Eosina) son  La mayor parte del citoplasma no especializado.  Filamentos Citoplasmáticos.  Fibras extracelulares. Todos estos debidos a grupos  Amino ionizados.

 

Metacromasia 

Fenómeno por el cual un colorante  cambia de color  tras reaccionar con un componente textural. textural.



Se debe a que en tejidos con altas concentraciones de   POLIANIONES, la molécula del colorante se polimeriza entre si y sus propiedades de absorción son diferentes de las propiedades de las moléculas individuales.

Cromótropos: Glucosaminoglucanos

sulfatados, nucleoproteínas, cartílago, gránulos de los mastocitos. El cristal violeta también genera metacromasia al teñir amiloide

 Azul de Toluidina Toluidina tiñe tiñe gránulos mastocito púrpura

 

Tinc nció ión n (col (color orac ació ión) n) de cort cortes es Ti 

Diferentes componentes celulares y tisulares poseen diferentes afinidades tintoriales.

 

Tinc nció ión n (col (color orac ació ión) n) de cort cortes es Ti

 

Hematoxilina-Eosina Técnica de tinción más usada.  Hematoxilina:  





Colorante natural. Propiedades similares a las anilinas básicas. Tiñe todas las estructuras celulares, pero principalmente el núcleo (Histonas).

Eosina: Colorante ácido.   Acción es la de una anilina ácida.  Tiñe ppalmente citoplasma celular. 

 

Cortes de piel Tinción Hematoxilina-Eosina

 

Técnica de Tinción H/E 

Tinc Ti nció ión n co con n he hema mattox oxililin ina. a.



Lavado con abundante agua.



 Aplicar Borato de Potasio. 

Cambia el color generado por la hematoxilina del morado al azul.

 Aumenta el contraste de color.



 

Técnica Tinción H/E II 



Diferenciación:  El Elim imin inac ació ión n se sele lect ctiv iva a de dell ex exce ceso so de co colo lora rant nte. e.  Se obtiene pasando el corte por un baño de alcohol ácido.  Res Resalt alta a núc núcleo leos. s. Azuleamiento:  La tinción queda de color rojizo se vira a azul intenso  Sumerge la placa en agua corriente alcalina o carbonato de litio al 1% en agua.



Eosina 

Obtenemos núcleos azules, citoplasma rosado y colágeno y fibras musculares rosado pálido.

 

Cubre-objeto 

 

Una vez teñido el tejido debe ser protegido con un cubre-objeto. Deshidratar 

Medio de montaje

 

Limpieza de láminas

 

 Análisis de placas

 TÉCNICAS ESPECIALES ESPECIALES ±10% biopsias

DIAGNÓSTICO 80-90% bp

 

Tinciones Especiales

 

Tinciones para Amiloide

H/E

Rojo Congo (cortes ±30 mm)

 

Tincione incioness para para Amiloi Amiloide de

Birrefringencia

 

c

Bacterias c Gram negativo: colonias bacterianas se tiñen rojas

a

d

b a y b Gram positivos: tinción azul

d FITE: bacilos ácido resistentes

se tiñen rojo  

Bacterias II

 Ambas placas con tinción Ziehl Neelsen Bacilos ácido resistentes se tiñen rojo brillante

 

Calcio  Von  V on Kossa-Azul Toluidina Toluidina

 Von  V on Kossa: Kossa: depósitos de calcio

Se tiñen café oscuro negro  

Colágeno I: proteína extracelular, predominante en dermis, función estructural

bb a

c

a y b Picrosirius: Colágeno I color amarillo-rojizo

d

e e Van Gieson: colágeno I rojo

c y d Tricromico Masson: colágeno I verde  

Colágeno III: o fibras de Reticulina, en dermis perineural, perivascular 

Impregnación con Nitrato Plata: fibras de reticulina se tiñen de negras

 

Eosinófilos

Tinción Giemsa, eosinófilos se ven rojos

 

Fibras elásticas

HE

Orceína ácida de Pinkus/Giemsa:

fibras de coloración pardo oscura  

Fibrina

ambas, Tinción de Picro-Mallory: Picro-Mallory: Fibrina se tiñe rojo claro También PAS

 

Hemosiderina

a

b

a Gránulos de Hemosiderina sin teñir t eñir,, de colora ción amarillo-café birrefringentes

b Ferrocianuro de Potasio de Perls: azul

 

b

Hongos b b PAS para Criptococo (rojo) a a Mucicarmin para teñir Criptococo: hongos de coloración azul-violácea c Tinción de PAS evidenciando

cc

Blastomicosis  

c Tinción de Gomori para Criptococo

Hongos II

c a

a PAS esporas fungicas b PAS Coccidiomicosis en ambas, hongos se tiñen rojos

b  

Lípidos sólo en tj fijado en + cortes porformalina congelación

bb Sudan III: adipocitos rojos

a

a Sudan IV: adipocitos anaranjados c

c Sudan black b: Lípidos azul-negruzcos  

Mastocitos

ambas, Tinción con Azul de Toluidina: gránulos de Mastocitos azul-púrpura (metacromasia)

 

Mastocitos ambas, Tinción de Giemsa, donde los gránulos g ránulos de los Mastocitos son teñidos púrpura

 

Melanina

ambas, Tinción de Fontana Masson pigmento melánico se tiñe negro

 

Principales colorantes

 

Tricrómico de Masson 

Principal Uso: Colágeno.



Tiñe: Colágeno Verde.  Núcleo, músculo y nervios  Rojo oscuro.  Citoplasma  amarillo 

 

Van Gieson 



Principal Uso: Tejido Fibroso

Tiñe: 

Colágeno  rojo.





Núcleo negro Músculos, azul nervios  amarillos  (+Verhoeff) fibras 

elásticas



negro

 

Fontana Masson 

Principal Uso: Melanina



Tiñe: 

Melanina  Negro.

 

Plata Metenamina 



Principales Usos: Hongos y Cuerpos de Donovan

Tiñe: Paredes micóticas  Negros.  Cuerpos de Donovan  negro 

 

PAS 

Principales Usos: Glucógeno, MPS neutros Hongos, Membrana basal.y



Tiñe: Glucógeno  Diastasa lábil.  MPS neutros y Paredes micóticas  Diastasa 

resistentes.

 



Reacción positiva para glucógeno y polisacáridos neutros.

+ DIASTASA 

Reacción positiva sólo para polisacáridos neutros.

 

 Azul alcián 



Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos Tiñe Mucopolisacáridos ácidos (mucina)  Azul.



 

toluidina  Azul de toluidina 



Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos Tiñe 

Mucopolisacáridos ácidos  Purpura metacrómico.

 

Giemsa 

Principales usos: Gránulos mastocitarios, MPS ácidos, eosinófilos, médula ósealeishmanias,



Tiñe: 



Gránulos mastocitarios, Mucopolisacaridos ácidos  Púrpura. Eosinófilos, leishmanias  Rojo.

Eosinófilos en mucosa gástrica  

Ferrocianuro de Potasio de Perls. 



Principal Uso: Hemosiderina

Tiñe: 

Hemosiderina  Azul

 

Rojo Congo 



Principal Uso:  Amiloide.

Tiñe 

Sustancia amiloide  Roja con luz, Verde con luz polarizada

 

Von Kossa 

Principal Uso: Calcio



Tiñe: 

Calcio  Negro.

 

Naftol AS-D cloroacetato esterasa 



Principal Uso: Mastocitos y Neutrófilos Tiñe: 

Gránulos de mastocitos y neutrófilos Rojo

 

Orceína ácida de Pinkus/Giemsa 



Principal elásticas.Uso: Fibras Tiñe: 

Fibras elásticas  Pardo oscuro.

 

Histopatología es como la espada del augurio