1 - Inmunoglobulinas

 

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

INMUNOLOGÍA SEMINARIO No 1: OBTENCIÓN Y PURIFICACIÓN DE GAMMAGLOBULINAS POR PRECIPITACIÓN CON SULFATO DE AMONIO

 

SANGRE 





Tejido conjuntivo líquido. 

Elementos formes.



Plasma sanguíneo.

Representa el 18% del peso corporal. Medio de transporte mas importante del organismo.

 



Funciones: Transporte.



 Homeostasis.  Autoprotección

 Defensa.

 

PLASMA SANGUINEO 

Solución acuosa compuesta de: 

Electrolitos.



Nutrientes.



Metabolitos.



Proteínas.



Vitaminas.



Oligoelementos.

 

PROTEINAS PLASMÁTICAS 



Mayor parte de la fracción soluble del plasma sanguíneo. Su concentración es de 60-80g/L

 



Funciones: 

Transporte de sustancias.



Regulación del equilibrio hídrico.





La hemostasia Protección contra agentes patógenos.

 

PLASMA Albúmina

100 proteinas α1 Globulinas

α2 β  γ 

 

CARACTERÍSTICAS 

Albumina 



Proteína más abundantes.

Globulinas: 

α y β transporte de

lípidos, vitaminas y de los iones metálicos.  γ anticuerpos solubles (inmunoglobulinas)

 

ELECTROFORESIS 



Proteínas y macromoléculas macromolécul as con carga eléctrica. Separación de proteínas del suero por electroforesis (acetato de celulosa).



Tinción con colorantes (visualizar las bandas).

 

GAMMAGLOBULINAS 

Llamadas inmunoglobulinas (Ig). 

Formada por subunidades ( dos cadenas pesadas y dos ligeras).



Enlaces disulfuro.



Zonas constantes.



Zonas variables. 

Zonas hipervariables.

 

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS 

CLASIFICACIÓN: Proteína más

•

abundante

IgG

Se adhiere a los macrófagos •

Aumenta la fagocitosis •

 

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS 

CLASIFICACIÓN: Se encuentra en secreciones

•

Defensa contra la entrada de m o por membranas externas •

IgA

Establece un sinergismo para destruir a ciertos m o •

 

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS 

CLASIFICACIÓN: Denominada

•

macroglobulinas

IgM

Adoptan forma de anillo •

Anticuerpo muy eficiente •

 

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS 

CLASIFICACIÓN: No se conoce su

•

función

IgD Presente en la superficie de los linfocitos del recién nacido •

 

TIPOS DE GAMMAGLOBULINAS 

CLASIFICACIÓN: Se encuentra en concentraciones bajas •

IgE Responsable de las reacciones de hipersensibilidad •

 

PRECIPITACIÓN SALINA La solubilidad de las proteínas depende de la fuerza iónica  Fenómenos:  “Salting in”   “Salting out”  

 

DIÁLISIS 



Basado en la imposibilidad de que las proteínas atraviesen los poros de una membrana semipermeable. Se utiliza para eliminar compuestos de bajo PM o cambiar el medio en que se encuentran.

 

FILTRACIÓN EN GEL También llamada cromatografía de permeación en gel.  Separa las proteínas según su tamaño y su forma. 

 

ELECTROFORESIS EN GEL SDS En la electroforesis las proteínas se desplazan en un campo eléctrico  La velocidad de corrida depende de: 

  

Tamaño Forma Carga eléctrica.

 

FUNDAMENTO DE (NH4)2SO4 

Fenómeno de “salting out” 



La precipitación representa una competición entre la proteína y la sal respecto al agua.

 

FACTORES QUE AFECTAN LA PRECIPITACIÓN SALINA 

Efecto de fuerza iónica

 Temperatura

 Concentración

 pH

 

PRECIPITACION CON SULFATO DE AMONIO VENTAJAS

DESVENTAJAS

La solubilidad es modificada muy poco por la temperatura.

La sal debe ser removida por diálisis

El efecto de desnaturalizació desnaturalización n es menor No requiere ajuste de pH

Contaminación Contaminació n bacteriana Reacciones de oxidación

 

MÉTODOS DE SEPARACIÓN Y PURIFICACIÓN DE GAMMAGLOBULINAS GENERALES O INESPECIFICOS  Precipitación salina Método de Cohn  Precipitación con iones de metales pesados  Precipitación con lactato de etacridina 0.4% 

Electroforesis (resina de polivinilo, poliuretano)  Cromatografía de intercambio iónico 

(DEAEcelulosa, CM-celulosa)

 

  ESPECÍFICOS  Se basan en una reacción serológica específica anticuerpo con su antígeno odel hapteno  Inmunoabsorbentes (p-aminobencilcelulosa)

 

UTILIDAD DE PRODUCTOS OBTENIDOS Tratamiento en inmunodeficiencia  Inmunomodulador en enfermedades: autoinmunitarias   Antisueros 

 

REFERENCIAS 





Barret T. James. Introducción a la inmunoquimica y la inmunología. México : Nueva Editorial Interamericana. 1981 Berrón R., Espinosa F., Márquez M., Sainos A.,Marfil J., Mogica D., Lima V., Hernández V., Espinosa Espi nosa S.,Ayometzi M., Berrón A., González V. Consenso de expertos en el uso terapéutico actual de la inmunoglobulina intravenosa. Revista Alergia México 2005;52(1):42-50 Rendina George. Técnicas de Bioquímica aplicada. México. Nueva editorial interamericana. 1974 pp 46-50