Determinación de la concentración de clorofila en una muestra de Beta vulgaris var. Cicla (acelga) , y establecimiento de su espectro de absorción

BIOQUIMICA

Laboratorio Bioquímica

var.  Determinación de la concentración de clorofila en una muestra de  Beta vulgaris var. Cicla (acelga ! " establecimiento establecimiento de su es#ectro de absorción $esica %atalia Ló#e&! Cesar Da'id Ca#arro a

Campus del Puente del común, km 7, Autopista Norte de Bogotá, Chía, Cundinamarca, Colombia

I %  O  M A C I O % A8 I C U L O  -istoria del artículo* artículo*  ecibido (ebrero (ebrero 2 de 2/0  ecibi" en (orma re)isada %11   Aceptado%11   Palabras cla)e* cla)e*

Eigmento 8ransmitancia Absorbancia )s#ectro de absorción colorimetria

)/UM)%

/e reali&ó un barrido del es#ectro es#ectro U.+.I/ U.+.I/ de un #atrón de clorofila clorofila con el fin de identific identificar ar la longitud de onda a la cual esta biomolecula absorbe ma"or cantidad de lu&! #ara #osteriormente reali&ar la cuantificación de de clorofila que se encuentra en la  Beta vulgaris var. Cicla 3)ste an-lisis se efectuó mediante el estudio de una muestra #roblema obtenida tras el tratamiento de la materia  #rima! la cual fue sometida a un #roceso de secado " e5tracción so5let, con el e5tracto obtenido se reali&o una solución de 0 mg; ml a#ro5imadamente! se midió la absorbancia " finalmente se obtu'o la concentración de clorofila en la muestra a tra'*s de m*todos gr-ficos3 Adicionalmente cada miembro en el equi#o de traba1o reali&o : mediciones de @@ l cada una con el fin de #robar cu-l de ellos es mas diestro en el uso de la micro#i#eta3

1. Introducción

)l estudio a ni'el bioquímico de cualquier biomol*cula requiere la utili&ación de t*cnicas analíticas que #ermitan su determinación cualitati'a " cuantitati'a! así como su caracteri&ación físico+química " biológica, una de las t*cnicas m-s utili&adas es la es#ectrosco#ia de lu& U.+ .I/ debido a que  #ermite allar la concentración de un com#uesto en solucion0 (%ie'es Abril Día&, adicionalmente traba1os teóricos muestran que el umbral de absorción de la longitud de onda del es#ectro de absorción del U.+.is U.+.is #ro#orciona una estimación ra&onable del tama2o de #artícula (/3 Martíne&3 La clorofila es una de las biomol*culas de ma"or inter*s! no solo  #or ser un #igmento ca#a& de con'ertir la energía ó#tica de la lu& en energía el*ctrica! lo cual la ace res#onsable en gran medida de la 'ida de las #lantas 4 (CAL.O ! sino adem-s #or #oseer   #ro#iedades anti cancerígenas! antibacterianas! antio5idantes! " energi&antes6 (Botanical online, #or lo general los #igmentos fotosint*ti fotosint*ticos cos como la clorofila " la feofitina son abitualment abitualmentee determ determina inados dos #or m*todo m*todoss es#ect es#ectrof rofotom otom*tr *trico icoss7 (/3 (/3 D)L .ALL) 8A/C9% La finalidad de este laboratorio es determinar cuantitati'amente la concentración de clorofila en una muestra #roblema de  Beta vulgaris var. Cicla mediante el uso de la es#ectrosco#ia de lu& U.+.I U. +.I/ / como t*cnica de cuantificación cuantificación de esta biomol*cula! biomol*cula! adem adem-s -s se bu busc scaa esta establ blece ecerr el es#e es#ect ctro ro de abso absorc rció iónn de la clorofila! la longitud de onda a la que #osee ma"or absorción de

la lu&! " la familiari&ación del equi#o de traba1o con el uso del es#ectrofotómetro 2. Métodos y Materiales

2.. !spectros de absorci"n #$%$&' para cloro(ila

/e tomo una #astilla #atrón de clorofila " se maceró finamente con a"uda de un mortero! con lo cual #osteriormente #osteriormente se #re#aró una solución de clorofila de : mg;ml en una me&cla me&cla etanol+ *ter  etílico (!04!0? " 4@ mg;ml con el #atrón de clorofila #re#arado anteriormente! se determino la absorbancia absorbancia de las muestras muestras con a"uda del es#ectrofotómetro es#ectrofotómetro  #ara reali&ar la cur'a de calibración 2.+. eterminaci"n de la concentraci"n de cloro(ila en la muestra problema

BIOQUIMICA

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/e #esaron 73:4g de acelga fresca! se corto en tro&os mu"  #eque2os " se lle'o a la estufa #or 6  a 7@FC con el fin de determinar el G de umedad que abía en la muestra, una 'e& se obtu'o el material com#letamente seco! se reali&o una e5tracción so5let con una me&cla de etanol+ *ter etílico ( CH(4+log(?@;0@H@!@44M  13

.. !spectros de absorci"n #$%$&'

La absorti'idad molar ( del -cido ben&oico en metanol es a#ro5imadamente 0!?:)+ 7molesJ::gmolH@!@7:gramos de Manganeso al inicio a GmanganesoH 7!:G  b @!@7:gJ0@@@H7!:mg;0)+6RgH7:@@mg;Tg

Imagen 0= barrido del es#ectro U.+.I/ #ara la clorofila )l barrido se reali&o en un rango desde los 7@@ asta los @@ nm con el fin de identificar la longitud de onda m-5ima a la que la mol*cula de clorofila #resenta ma"or absorbancia! este rango de longitudes de onda se utili&o debido a que en *l se encuentra la lu& 'isible! sin embargo solo en determinados rangos (7@@+:@@  ( ?@@+?>@ tiene la ca#acidad de alterar los electrones que se encuentran en las mol*culas de clorofila (.alencia  Von&ales! 4@063 Como se e'idencia en la imagen 0! se obtu'ieron 4 grandes #icos, el #rimero de ellos corres#ondiente a los 7@@ nm a#ro5imadamente ! alrededor del a&ul! " otro a los ?@< nm alrededor del ro1o, segSn (.alencia  Von&ales! 4@06 en los distintos estados energ*ticos en los que #uede estar una mol*cula de clorofila! solo se 'an a obser'ar aquellos en los que las frecuencias asociadas de la lu& est*n a 73?50@˄: $ ?3?50@˄4 t&3 De tal manera que la ma"oría de los electrones de la mol*cula tendr-n sus estados de energía acotados en bandas que est-n alrededor de las frecuencias del ro1o " el a&ul, sin embargo dado que e5iste gran 'ariedad de com#uestos que al igual que este absorben en frecuencias de a&ul! el #ico #resente cercano a 7@@nm fue descartado a #esar de ser el m-s alto! " se escogió el de ?@< nm como la longitud de onda a la cual se reali&aría la medición de absorbancia de la muestra #roblema .2. Cur)a de calibraci"n para la cloro(ila

)n la reali&ación de la cur'a de calibración que se utili&aría #ara allar la concentración de clorofila! uno de los 'alores de absorbencia tomados se ale1a un #oco de lo es#erado tal como se  #uede obser'ar en la grafica 0! dica diferencia #uede deberse a errores de #rocedimiento! como una mal a#ro5imación de la concentración de clorofila #resente en la muestra 7 ! dados #or errores de medición a la ora de reali&ar la solución con etanol+ *ter etílico (