Laporan HPLC resmi

LAPORAN ANALISIS MAKANAN DAN KOSMETIK ANALISIS METIL PARABEN DALAM KRIM KOSMETIK DENGAN METODE HPLC (HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY)

Oleh: KELOMPOK 7 Fajar Kholikul A.

(K100110043)

Fahmi Azhari

(K100110066)

Hestu Putri M.

(K100110085)

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA 2014

LAPORAN ANALISIS MAKANAN DAN KOSMETIK ANALISIS METIL PARABEN DALAM KRIM KOSMETIK DENGAN METODE HPLC (HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC) A. Tujuan 1. Mahasiswa diharapkan dapat melekukan preparasi dan analisis metil paraben dalam sediaan krim dengan metode HPLC. 2. Mahasiswa diharapkan dapat mengetahui prinsip penggunaan HPLC dalam analisis metil paraben dalam sediaan krim.

B. Deskripsi Produk 1. Sampel

: Peeling Cream La Tulip

2. Berat

: 0,5 gram

3. Komposisi

: Purified water, Stearic acid, Polyethylene, Kaolin, Glycerin, Cetyl alcohol, Sulfur, Metil paraben, Fragrance

4. Produsen

: La Tulip Cosmetiques, PT REMBAKA

5. No. Produk

: 1550410

6. Exp. Date

:-

C. Material dan Prosedur 1. Material a. Alat : -

Seperangkat instrumen HPLC

-

Glassware

-

Syringe

-

Pipet tetes

-

Pipet volume

-

Pro pipet

-

Mikro pipet

-

Ultrasonikasi

-

Sentrifugator

b. Bahan: -

Baku metilparaben

-

Asetonitril

-

Air

-

Kolom C18

-

Metanol

-

Krim sampel

2. Prosedur a. Kondisi Percobaan Flow Rate : 0,8 mL/menit Detection : 238 nm Fase gerak : MeOH : asetonitril : air (15 : 27 : 58) Fase diam : C18

b. Cara Kerja 1) Pembuatan baku metilparaben µg/ml Ditimbang metilparaben 50 mg, dimasukkan ke dalam labu ukur 5 ml ↓ Ditambah asetonitril hingga tanda, didapat konsentrasi 1 % ↓ Ditambah 500 µl 1% dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL ↓ Ditambahkan asetonitril hingga tanda, didapat baku metilparaben 100 µg/ml.

2) Preparasi sampel Ditimbang akurat 0,5 g sampel krim, dimasukkan ke dalam beker gelas ↓ Ditambahkan asetonitril 20 ml, disonikasi selama 10 menit ↓ Dipindahkan ke tabung sentrifuge dan disenrifyge 3000 rpm selama 15 menit

↓ Diambil supernatannya (beningnya) ↓ Disaring dan dimasukkan ke dalam flakon ↓ Diinjekkan 10 µl sampel ke instrumen HPLC ↓ Jika kadar terlalu besar maka dilakukan pengenceran ↓ Dihitung kadar metilparaben menggunakan kurva baku.

D. Hasil dan Pembahasan 1. Hasil Percobaan Sampel

Berat Sampel (g)

Retention Time (minute)

Peak Area

Kadar (%b/b)

Orientasi

0,5036

8,633

2.469.587,95

0,180

Replikasi I

0,4918

8,503

2.518.391,67

0,189

Replikasi II

0,4936

8,527

4.221.357,20

0,330

Replikasi III

0,4982

8,387

3.546.438,70

0,271

ẍ %b/b = = 0,2425 SD

= 0,0713

2. Data dan Perhitungan  Pembuatan Kurva Baku Konsentrasi (μg/mL)

Retention Time (menit)

12,5

8,463

769.451,67

25

8,702

1.467.353,81

50

8,543

2.987.995,91

75

8,613

3.652.359,10

100

8,545

5.165.046,85

Peak Area

Regresi Linear Konsentrasi vs Peak Area A = 258554,69 B = 48569,27 r

= 0,9933

y

= 48569,27 x + 258554,69

 Penimbangan Sampel Orientasi 

Replikasi I

Replikasi II

Kaca arloji kosong

= 9,5506 gram

Kaca arloji+sampel

= 10,0643 gram

Kaca arloji+sisa

= 9,5607 gram

Sampel

= 0,5036 gram

Kaca arloji kosong

= 10,2613 gram

Kaca arloji+sampel

= 10,7644 gram

Kaca arloji+sisa

= 10,2726 gram

Sampel

= 0,4918 gram

Kaca arloji kosong

= 22,4520 gram

Kaca arloji+sampel

= 22,9556 gram

Kaca arloji+sisa

= 22,4620 gram

Sampel

= 0,4936 gram

Replikasi III

Kaca arloji kosong

= 20,4139 gram

Kaca arloji+sampel

= 20,9198 gram

Kaca arloji+sisa

= 20,4216 gram

Sampel

= 0,4982 gram

 Pembacaan Sampel Sampel

Berat Sampel (g)

Orientasi

0,5036

Retention Time (minute) 8,633

Replikasi I

0,4918

8,503

2.518.391,67

78801

Replikasi II

0,4936

8,527

4.221.357,20

95047

Replikasi III

0,4982

8,387

3.546.438,70

117566

 Perhitungan Kadar  Orientasi y

= 48569,27 x + 258554,69

2.469.587,95 = 48569,27 x + 258554,69 = 45,5233 μg/mL

x

= 0,04552 mg/mL

Sampel

= 0,5036 g ad 20 mL = 503,6 mg/20 mL = 25,18 mg/mL

= 0,180 %b/b

 Replikasi I

Peak Area

High

2.469.587,95

68936

y

= 48569,27 x + 258554,69

2.518.391,67 = 48569,27 x + 258554,69 = 46,5281 μg/mL

x

= 0,04652 mg/mL

Sampel

= 0,4918 g ad 20 mL = 491,8 mg/20 mL = 24,59 mg/mL

= 0,189 %b/b  Replikasi II y

= 48569,27 x + 258554,69

4.221.357,20 = 48569,27 x + 258554,69 = 81,5907 μg/mL

x

= 0,08159 mg/mL

Sampel

= 0,4936 g ad 20 mL = 493,6 mg/20 mL = 24,68 mg/mL

= 0,330 %b/b

 Replikasi III y

= 48569,27 x + 258554,69

3.546.438,70 = 48569,27 x + 258554,69 = 67,6947 μg/mL

x

= 0,06769 mg/mL

Sampel

= 0,4982 g ad 20 mL = 498,2 mg/20 mL = 24,91 mg/mL

= 0,271 %b/b

3. Pembahasan Metil paraben merupakan salah satu jenis pengawet yang banyak digunakan dalam industri, baik makanan, kosmetik maupun produk farmasetika. Metil paraben biasa digunakan bersama propil paraben dan keduanya memiliki aktivitas sebagai antibakteri dan antifungi yang mudah diperoleh serta murah, sehingga digunakan luas dalam industri sebagai bahan pengawet. Penggunaan bahan pengawet ini dalam jangka waktu lama dapat menjadi berbahaya dan memicu terjadinya berbagai penyakit, termasuk kanker. Berikut ini struktur kimia metil paraben:

Pada praktikum ini dilakukan analisis kandungan metil paraben dari suatu sampel kosmetik menggunakan metode High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Prinsip dari metode ini didasarkan pada interaksi analit dari sampel terhadap fase diam

dan fase gerak. Fase gerak dialirkan melalui kolom ke detector dengan bantuan pompa. Sampel yang dilarutkan dalam solvent, dimasukkan ke dalam aliran fasa gerak dengan cara injeksi. Di dalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen campuran berdasarkan perbedaan kekuatan interaksi anatara analit dengan fase diam pada kolom. Analit yang kurang kuat interaksinya dengan fase diam akan keluar dari kolom terlebih dahulu. Sebaliknya, analit yang kuat berinteraksi dengan fasa diam akan keuar dari kolom lebih lama. Setiap komponen campuran yang keluar dari kolom dideteksi oleh detektor kemudian direkam dalam bentuk kromatogram. Analisis kandungan metil paraben pada praktikum ini dilakukan terhadap sampel krim kosmetik La Tulip yang diperoleh dari pasaran. Fase diam yang digunakan adalah kolom C18 dan fase gerak kombinasi methanol, asetonitril, dan air dengan perbandingan 15:27:58. Berdasarkan penelitian Hajkova (2003), kombinasi fase gerak tersebut merupakan kombinasi yang paling optimal karena menghasilkan pemisahan sampel yang baik. Waktu retensi pada pemisahan metil paraben yang dihasilkan dari penelitian tersebut sekitar 3,5-4 menit. Pada praktikum ini dihasilkan waktu retensi untuk seluruh sampel pada menit ke 8. Perbedaan ini terjadi karena panjang kolom yang digunakan dalam prktikum berbeda dengan panjang kolom pada jurnal referensi. Panjang kolom dalam prktikum adalah 12,5 cm, sedangkan panjang kolom dalam jurnal referensi 25 cm. Hal inilah yang menyebabkan waktu retensi yang diperoleh sebesar 2x waktu retensi referensi. Kurva baku dibuat dari berbagai konsentrasi baku metil paraben, yaitu 12,5; 25; 50; 75; dan 100 μg/mL menghasilkan nilai r sebesar 0,9933 dengan persamaan kurva baku y = 48569,27 x + 258554,69. Pada pembacaan sampel dilakukan sebanyak 3x replikasi dengan berat sampel 0,5 gram dalam 25 mL methanol. Hasil pembacaan yang diperoleh menunjukkan waktu retensi pada menit ke 8,3-8,6 dengan kadar rata-rata sebesar 0,2425 %b/b dan nilai SD = 0,0713. Menurut peraturan BPOM, metil paraben adalah pengawet jenis ester (phydroxybenzoic acid) yang di perbolehkan dengan kadar maksimum 0,4% untuk ester tunggal

dan

0,8%

untuk

ester

campuran

(Peraturan

Kepala

BPOM

No:

HK.00.05.42.1018). Berdasarkan peraturan tersebut, dapat diketahui bahwa sampel

kosmetik yang dianalisis dalam praktikum ini mengandung metil paraben dengan kadar yang diijinkan karena lebih kecil dari 0,4%.

E. Kesimpulan Sampel krim kosmetik La Tulip mengandung metil paraben dengan kadar 0,2425% dan memenuhi batas aman penggunaan metil paraben dalam sediaan kosmetik sesuai dengan peraturan BPOM yaitu kecil dari 0,4%.

F. Daftar Pustaka Ha´jkova, R., Solich, P., Dvorak, Icha, J. S., 2003, Simultaneous determination of methylparaben, propylparaben, hydrocortisone acetate and its degradation products in a topical cream by RP-HPLC, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 32, 921-/927.