Bctv2 U1 Ea Riba

 

 

CARRERA:  

Ing. en biotecnología

ALUMNO:

Ricardo Barrón Anaya

GRUPO:

BI-BCTV2-1602-B2-001

FECHA: 

FACILITADOR: 

TRABAJO:

15 de noviembre del 2016  Cristina Jasso del Toro Actividad 2 unidad 2 

 

INTRODUCCION Las técnicas de micropropagació micropropagación n se usan como método para incrementar el numero de plantas en especies con problemas de reproducción o en poblaciones extremadamente reducidas, ya que con estas técnicas se consiguen altas técnicas de multiplicación vejetal En las técnicas de cultivo in vitro se pueden presentar diversos problemas debidos a ala contamionacíon del material de partida, la falta de respuesta de los explantes iniciales, la hiperhidratación de los tallos y la ausencia de enraizamiento, asi como la posible aparición de la variación somaclonal, la cual genera una variación génetica en el materiañ vegetal a consecuencia del cultivo in vitro. DESARROLLO Cuando se trata de una regeneración vegetativa, las plantas regeneradas a partir de los explantes diploides deberían ser se r idénticas a la planta madre, pero no siempre sie mpre es asi, se han encontrado entre las plantas regeneradas una variación, debido a que por si mismo el cultivo in vitro puede ser estresante para las células vegetales e involucra procesos mutagéneticos durante el establecimiento del esplante.(Castro 2008). A este proceso se le llama variación somaclonal por Larkin y Scowcroft, el cual involucra cambios en las plantas reneradas los culaes son transmitidos a la progenie. Los mecanismos en los que se desarrolla la variación somaclonal son multiples y entre ellos se encuentran los relacionados con errores en los procesos de división miitótica y meiótica, sobrecruzamiento somático, el desequilibrio en el pool de nucleótidos que podría alterar tanto la replicación como la reparación del ADN, la replicación anormalmente retrasada de la heterocromatina, el efecto de los reguladores de crecimiento, la activación de los transposonos y los cambios en el ADN de los orgánulos citoplásmicos. (Coronel 2015). Las variaciones se pueden dar sin un cambio morfológico evidente, debido a que una diferencia estructural en un producto génico puede no alterar lo su actividad biológica lo suficiente como para producir un fenotipo modificado.

Cuando la variación somaclonal es epigenética, epigené tica, se debe a un cambio en la expresión de los genes, reversible y no heredable, lo cual puede estar asociado a alteraciones en los patrones de metilación del ADN cambios en las histonas, remodelación de la cromatina y en los niveles de bajos RNAs.

 

  Fig. 1 Condicciones del cultivo in vitro que originan la variación somaclonal La variación somaclonal es de interés practico, esto debido a sus potenciales usos en el cultivo de la plantas, sin embargo para el objetivo principal de la propagación in vitro, se convierte en un fenómeno indeseable. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA GENERACIÓN DE LA VARICACION SOMACLONAL La aparición de la variación somaclonal depende de los siguientes factores:   Genotipo. Se asume que la frecuencia de cambios d depende epende de variaciones

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preexistentes en el genotipo y de las interacciones que surgen entre el genotipo y el proceso de cultivo.

  Nivel de ploidia. Los poliploides, que tienen mas de dos juegos de

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cromosomas completos, tleran la ganancia o perdida de cromosomas, pudiendo asi cumplir con los requisitos para la regeneración.

 

  Explante. Las quimeras son mosai mosaicos cos genéticos, lo que significa que dentro dentro

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de una misma planta existen células con diferentes constituciones genéticas, lo cual se debe a una serie de cambios generados en el ADN nuclear de ciertos tipos celulares. Por lo que la utilización de explantes con tejidos quimeros preexistentes puede resultar en una fuente extra de variación.

  Via de regeneración. Se a encontrado que la variación en cultivos

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embriogénicos es relativamente menor a la que aparece en cultivos organogénicos, lo cual se debe a la gran presión de selección impuesta en la foemación de los embriones, la cual es mayor que la requerida en la formación de brotes.

  Medio de cultivo. El estdo físico del medio de cultivo también influye en el

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nivel de variación obtenida, debido a que un explante puede tener difenerente comportamiento si se cultiva en un medio sólido u en un medio liquido.

  Las fitohormonas. Principalmente el 2,4-D (ácido 2,4 diclorofenoxiacético),

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pueden ser inductores deconsumo varioación que ejercen efectos sobre la respiración celular, el deya azucares y en profundos el control de la división celular.   La concentración de oxigeno. El estrés por falta de oxigeno en la células de

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la supeficie del callo es diferentes al de aquellas células que se encuentransituadas masprofundamente, y teniendo en cuenta que la anaerobiosis produce etanol, el cual se puede comportar como un mutágeno.

  La edad del cultivo. Existe un aumento en la proporción de variantes en

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cultivos envejecidos y también en plantas obtenidas a través de varios subcultivos.

  La deficiencia o exceso de minerales. La falta o el exceso de minerales afecta

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la estabilidad genética in vitro, en donde las dificiencias o excesos de azufre, fosforo, nitrógeno, calcio y magnesio pueden generar cambios genómicos.

PROTOCOLO DE MICROPROPAGACIÓN Para lograr la estabilidad fenotípica en plantas a partir de la técnica de cultivo in vitro se establece el siguiente protocolo: 1.  Seleccionar la planta madre. Se debe seleccionar la planta que muestre mejores características físicas ya esto refleja una buena extabilidad celular.

 

2.  Selección aducada del explante. Se debe seleccionar explantes que mustren una composición homogénea y evitar explates que presente variaciones de coloración ya que estos podrían conten células quimeras que promueven la variación. 3.  Selección del medio del cultivo. Es necesario seleccionar un medio de cultivo en donde no se promuevan reacciones anaerobias ya que estas producen productos mutagenicos como el etanol que estimulan la variación. 4.  Establecer un regeneración de plantas por medio de embriogénesis ya que esta disminuye la variación. 5.  Dosificación adecuada de auxinas. Se deber regular el uso de fitohormonas, como el 2,4-D (ácido 2,4 diclorofenoxiacético, el AIA (ácido indolacético) y el ANA (ácido naftalenacético) ya que estos son responsables de los incrementos de la metilación de la citosina. 6.  Establecer un flujo constante de oxigeno. 7.  Realizar subcultivos frecuentes de los explantes que no han envejecido. 8.  Implementar una adecuada dosificación de los nutrimentos minerales del cultivo para evitar deficiencias o excesos de los mismos. 9.  Implemetar marcadores fenotípicos, bioquímicos y moleculares que nos indiquen la existencia de variación somaclonal. CONCLUSIONES La variación somaclonal es un evento que puede desarrollarse durante el cultivo de tejidos vejetales in vitro, y es un efecto indeseado cuando se quiere lograr la propagación con buena estabilidad fenotípica en las plantas. La variación somaclonal es efecto que tiene su potencial cuando se busca mejorar las propiedades de una planta y establecer cultivos mas rentables, es por ello que como estudiantes de biotecnología debemos terner el conocimiento de como estimular y controlar la variación somaclonal de los cultivos in vitro.